(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011571509.3
(22)申请日 2020.12.27
(71)申请人 李琳超
地址 318050 浙江省台州市路桥区路南街
道张李村
(72)发明人 杨艺 肖继
(74)专利代理机构 衡阳市科航专利事务所
43101
代理人 刘政旺
(51)Int.Cl.
A01N 1/00(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
小鼠肠卷标本制备装置及方法，涉及动物标
本制备技术领域。小鼠肠卷标本制备装置，包括
卷绕器和蜡条；卷绕器包括手柄和固定连接在手
柄一端的卡座，卡座远离手柄的端部设有插孔；
蜡条一端插装在卡座的插孔中，另一端从卡座的
插孔中伸出。小鼠肠卷标本制备方法，应用于上
述的小鼠肠卷标本制备装置。本发明的优点在
于：1、使用了Bouins液对肠皮进行预硬化处理， 有利于保持肠皮的平整性。可减少卷绕肠皮操作
对肠皮的拉扯和按压，一方面降低了卷绕肠皮时
整性。2、肠卷制作方法简单易上手，耗时较短，能
及时阻断内源性或外源性的酶反应，有利于保证
小肠组织中蛋白的稳定性。权利要求书2页 说明书6页 附图2页CN 112586491 A 2021.04.02 C N 112586491
A
1.小鼠肠卷标本制备装置，其特征是：包括卷绕器和蜡条；卷绕器包括手柄和固定连接在手柄一端的卡座，卡座远离手柄的端部设有插孔；蜡条一端插装在卡座的插孔中，另一端从卡座的插孔中伸出。
2.如权利要求1所述的小鼠肠卷标本制备装置，其特征是：卡座的插孔为正六棱柱形孔，插孔的孔口处设有倒角，相应的，蜡条呈正六棱柱形，并与插孔的尺寸相适应。
3.如权利要求2所述的小鼠肠卷标本制备装置，其特征是：蜡条的横切面的最大内接圆的直径为10mm，卡座的插孔的深度为20mm。
4.如权利要求1‑3中任一项所述的小鼠肠卷标本制备装置，其特征是：手柄为正四棱柱形杆，蜡条的轴心线与手柄的轴心线重合。
5.如权利要求4所述的小鼠肠卷标本制备装置，其特征是：定心回转机构包括插套、轴承、轴承座和端盖；轴承座内部设有用于安装轴承的内腔，内腔中设有环形台阶面；插套呈圆柱形，其中心处设有贯通
其两侧端面的通孔A，通孔A与手柄的外形尺寸相适应；轴承套装在插套上，并安装在轴承座的内腔中，其一端通过轴承座内腔中的环形台阶面定位，其另一端通过端盖定位；端盖设在轴承座的一端，并与轴承座和插套固定连接，其中心处设有可供手柄通过的通孔B；定心回转装置通过插套上的通孔A与卷绕器的手柄插接。
6.小鼠肠卷标本制备方法，应用于权利要求1‑5中任一项所述的小鼠肠卷标本制备装置，其特征是，步骤如下：
S01，取样小鼠小肠：
a、将小鼠麻醉后固定于操作台，暴露胸壁，心脏穿刺放血，至小鼠失血性休克；
b、待小鼠死亡后，腹部消毒，剪开腹壁，暴露腹腔，游离并切断小肠上段的贲门部，结扎小肠上段开口，再游离并切断小肠下段的回盲部；
c、通过注射器向小肠内注射生理盐水，以冲洗小肠内腔，使小肠内腔中的内容物从肠道下段切口处排出；
d、结扎小肠下段开口，游离出全段小肠，使用注射器向游离出的小肠内注入2ml生理盐水，以避免小肠内腔塌陷而导致腔壁粘连；
S02，制作矩形肠皮：
将注入生理盐水的小肠放置于玻璃皿中，在小肠上段紧邻结扎口的位置剪开一个横向切口，再将剪刀刀刃从横向切口处伸入小肠内腔，沿小肠的纵向方向从上至下剪开小肠，将横向切口上段的小肠切除，并剪开小肠下段的接扎线，最终形成一条矩形肠皮；
S03，矩形肠皮硬化处理：
将矩形肠皮的绒毛面朝上，展开平铺于操作台面上，再将Bouins液撒在矩形肠皮上，对矩形肠皮进行5‑10min的硬化处理，以固定矩形肠皮的形态，便于后续的肠卷制作；
S04，制作肠卷：
a、用镊子钳取矩形肠皮的一端放置在蜡条上，并保证矩形肠皮的绒毛面朝向蜡条表面，然后转动手柄，通过手柄带动蜡条转动，从而将矩形肠皮以蜡条为轴心，逐圈环绕蜡条形成圆柱形肠卷；
b、断开蜡条与卡座的连接后，将蜡条和肠卷一同置于Bouins液中浸泡，对肠卷进行硬化处理，以固定肠卷的形态，防止后续浸泡福尔马林溶液时肠卷散开或变形；
c、再将蜡条和肠卷从Bouins液中取出，转移到福尔马林溶液中浸泡6‑10h，对小肠进行
组织进一步固定，以终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，保持组织原有的形态，避免抗原失活或弥散；
d、用锋利的刀刃沿肠卷的径向面下刀，切除肠卷轴向两端的组织和超出肠卷轴向两端的蜡条部分，仅保留肠卷轴向2‑3cm的宽度，最终得到符合包埋盒尺寸的圆柱形肠卷，将圆柱形肠卷置于包埋盒中；
S05，肠卷脱水：
a、将包埋盒置于流动水中冲洗10min，充分除去圆柱形肠卷上的福尔马林溶液；
b、将包埋盒置于装有75%酒精的脱水盒A中浸泡80min；
c、将包埋盒从脱水盒A中取出，置于装有85%酒精的脱水盒B中浸泡80min；
d、将包埋盒从脱水盒B中取出，置于装有95%酒精的脱水盒C中浸泡80min；
e、将包埋盒从脱水盒C中取出，置于装有纯酒精的脱水盒D中浸泡80min；
f、将包埋盒从脱水盒D中取出，置于装有纯酒精的脱水盒E中浸泡80min；
S06，肠卷浸蜡：
a、将包埋盒从脱水盒E中取出，置于装有二甲苯原液的溶液盒A中浸泡20min；
b、将包埋盒从浸蜡盒A中取出，置于装有二甲苯原液的溶液盒B中浸泡30min；
c、将装有软蜡的浸蜡盒A置于烘箱中烘烤，使软蜡融化，再将包埋盒从溶液盒B中取出，置于浸蜡盒A中浸泡液态软蜡60min；
d、将装有软蜡的浸蜡盒B置于烘箱中烘烤使其软化呈液态，再将包埋盒从浸蜡盒A中取出，置于浸蜡盒B中浸泡液态软蜡60min；
e、将装有硬蜡的浸蜡盒C置于烘箱中烘烤使其软化呈液态，再将包埋盒从浸蜡盒B中取出，置于浸蜡盒C中浸泡液态硬蜡120min；
S07，肠卷包埋：
a、将脱水浸蜡后的圆柱形肠卷取出，置于包埋模具凹槽底部中心位置；
b、将液态硬蜡注满整个包埋模具凹槽，盖上包埋模具的盖子；
c、将整个包埋模具置于‑18～‑22℃的冷藏柜中静置20分钟；
d、将包埋模具的盖子取下，再将包埋模具倒置，轻叩包埋模具，使包含肠卷的蜡块从包埋模具中完整的脱出。
7.如权利要求6所述的小鼠肠卷标本制备方法，其特征是：S01步骤中，采用的麻醉剂为异氟烷，剂量为致死量；S01步骤中，小肠上段结扎点距离小肠上段切口1～2cm；S01步骤中，注射器的注射点位于小肠上段结扎点的后端1～2cm。
8.如权利要求7所述的小鼠肠卷标本制备方法，其特征是：S06步骤中，浸泡软蜡的过程中，设置烘箱温度为58～66℃之间，使软蜡维持融化状态；S06步骤中，浸泡硬蜡的过程中，设置烘箱温度为58～66℃之间，使硬蜡维持融化状态。
小鼠肠卷标本制备装置及方法
技术领域
[0001]本发明涉及动物标本制备技术领域，特别是一种小鼠肠卷标本制备装置及方法。
背景技术
[0002]肠道是有机物、水分、毒物、药物转化和吸收的重要器官，与其它实质性脏器组织不同，肠道组
织呈现管状空腔样结构。肠道组织的病理生理学验证是医学实验研究中不可或缺的一部分，医学实验中通常会使用大鼠、小鼠、家兔等小动物作为肠道样本的采集对象。在样本的采集和固定部分，如何保持肠道形态结构的完整性和检测蛋白的稳定性一直是实验室困扰科研人员的技术难题。
[0003]现有的实验动物肠道组织固定方法包括横切固定法和纵切固定法。
[0004]横切固定法操作如下：1、取样肠道组织，并在合适的位置横向切断，从而形成圆环形的切口；2、再将包含切口的肠道组织泡入福尔马林溶液，进行脱水和防腐处理；3、将脱水和防腐处理后的肠道组织包埋进入石蜡中，并使切口完整展现出来。通过切口可展现小肠绒毛、小肠肌层、小肠粘膜等肠道结构。但横切固定法存在的不足之处是：通过切口仅能展现出的肠道结构非常有限，不能完整的呈现肠道组织的全貌。
[0005]纵切固定法操作如下：1、取样肠道组织，沿肠道组织的长度方向(纵向)剪开肠道，从而形成一条矩形的肠皮，肠皮的一面为肠道外壁，肠皮的另一面为肠道内壁；2、再将肠皮泡入福尔马林溶液，进行脱水和防腐处理；3、将脱水和防腐处理后的肠皮展开平整后，包埋进入石蜡中。通过展开的肠皮可展现小肠绒毛、小肠肌层、小肠粘膜等肠道结构。但纵切固定法存在的不足之处是：1、肠皮在浸泡福尔马林溶液时，由于脱水会产生扭曲、翻转、弯折，给后续的平整操作增加了不小的难度；2、肠皮在平整操作时，需要进行按压、抻拉等操作，难以避免的造成肠道损伤，不利于保持肠道形态结构的完整性。
发明内容
[0006]本发明的目的是克服现有技术的不足，而提供一种小鼠肠卷标本制备装置及方法，它解决了现有的小鼠肠道组织固定方法中，横切固定法不能完整的呈现肠道组织的全貌，纵切固定法操作难度大且容易造成肠道损伤的问题。
[0007]本发明的技术方案是：小鼠肠卷标本制备装置，包括卷绕器和蜡条；卷绕器包括手柄和固定连接在手柄一端的卡座，卡座远离手柄的端部设有插孔；蜡条一端插装在卡座的插孔中，另一端从卡座的插孔中伸出。
[0008]本发明进一步的技术方案是：卡座的插孔为正六棱柱形孔，插孔的孔口处设有倒角，相应的，蜡条呈正六棱柱形，并与插孔的尺寸相适应。
[0009]本发明再进一步的技术方案是：蜡条的横切面的最大内接圆的直径为10mm，卡座的插孔的深度为20mm。
[0010]本发明更进一步的技术方案是：手柄为正四棱柱形杆，蜡条的轴心线与手柄的轴心线重合。
[0011]本发明更进一步的技术方案是：定心回转机构包括插套、轴承、轴承座和端盖；轴承座内部设有用于安装轴承的内腔，内腔中设有环形台阶面；插套呈圆柱形，其中心处设有贯通其两侧端面的通孔A，
通孔A与手柄的外形尺寸相适应；轴承套装在插套上，并安装在轴承座的内腔中，其一端通过轴承座内腔中的环形台阶面定位，其另一端通过端盖定位；端盖设在轴承座的一端，并与轴承座和插套固定连接，其中心处设有可供手柄通过的通孔B；定心回转装置通过插套上的通孔A与卷绕器的手柄插接。
[0012]本发明的技术方案是：小鼠肠卷标本制备方法，步骤如下：
S01，取样小鼠小肠：
a、将小鼠麻醉后固定于操作台，暴露胸壁，心脏穿刺放血，至小鼠失血性休克；
b、待小鼠死亡后，腹部消毒，剪开腹壁，暴露腹腔，游离并切断小肠上段的贲门部，结扎小肠上段开口，再游离并切断小肠下段的回盲部；
c、通过注射器向小肠内注射生理盐水，以冲洗小肠内腔，使小肠内腔中的内容物从肠道下段切口处排出；
d、结扎小肠下段开口，游离出全段小肠，使用注射器向游离出的小肠内注入2ml生理盐水，以避免小肠内腔塌陷而导致腔壁粘连；
本步骤中，采用的麻醉剂为异氟烷，剂量为致死量；
本步骤中，小肠上段结扎点距离小肠上段切口1～2cm；
本步骤中，注射器的注射点位于小肠上段结扎点的后端1～2cm；
S02，制作矩形肠皮：
将注入生理盐水的小肠放置于玻璃皿中，在小肠上段紧邻结扎口的位置剪开一个横向切口，再将剪刀刀刃从横向切口处伸入小肠内腔，沿小肠的纵向方向从上至下剪开小肠，将横向切口上段的小肠切除，并剪开小肠下段的接扎线，最终形成一条矩形肠皮；
S03，矩形肠皮硬化处理：
将矩形肠皮的绒毛面朝上，展开平铺于操作台面上，再将Bouins液撒在矩形肠皮上，对矩形肠皮进行5～10min的硬化处理，以固定矩形肠皮的形态，便于后续的肠卷制作；
S04，制作肠卷：
a、用镊子钳取矩形肠皮的一端放置在蜡条上，并保证矩形肠皮的绒毛面朝向蜡条表面，然后转动手柄，通过手柄带动蜡条转动，从而将矩形肠皮以蜡条为轴心，逐圈环绕蜡条形成圆柱形肠卷；
b、断开蜡条与卡座的连接后，将蜡条和肠卷一同置于Bouins液中浸泡，对肠卷进行硬化处理，以固定肠卷的形态，防止后续浸泡福尔马林溶液时肠卷散开或变形；
c、再将蜡条和肠卷从Bouins液中取出，转移到福尔马林溶液中浸泡6～10h，对小肠进行组织进一步固定，以终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，保持组织原有的形态，避免抗原失活或弥散；
d、用锋利的刀刃沿肠卷的径向面下刀，切除肠卷轴向两端的组织和超出肠卷轴向两端的蜡条部分，仅保留肠卷轴向2‑3cm的宽度，最终得到符合包埋盒尺寸的圆柱形肠卷，将圆柱形肠卷置于包埋盒中；
S05，肠卷脱水：
a、将包埋盒置于流动水中冲洗10min，充分除去圆柱形肠卷上的福尔马林溶液；
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