(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810719192.X
(22)申请日 2018.07.02
(71)申请人 宁夏医科大学
地址 750004 宁夏回族自治区银川市兴庆
区胜利街1160号
(72)发明人 余建强 魏炜 李玉香 刘宁
杜娟
(74)专利代理机构 北京三聚阳光知识产权代理
有限公司 11250
代理人 李红团
(51)Int.Cl.
A61K 31/7034(2006.01)
A61P 9/10(2006.01)
A61P 25/00(2006.01)
(54)发明名称
脑病药物中的用途
(57)摘要
本发明公开了毛蕊花糖苷(Verbascoside)
在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的
用途。本发明的实验结果表明在安全剂量范围内
使用时，剂量为240mg/kg的毛蕊花糖苷可以显著
改善新生大鼠缺氧缺血模型早期神经功能障碍，
减少缺血区域脑梗死体积以及神经元坏死，证明
毛蕊花糖苷具有促进神经功能恢复和预防新生
儿缺氧缺血性脑病后致残致死的作用。权利要求书1页 说明书7页 附图5页CN 109125334 A 2019.01.04
C N 109125334
A
1.毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述
毛蕊花糖苷的结构式如式(1)所示：
2.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述缺氧缺血性脑损伤为急性期或修复期的新生儿缺氧缺血性脑损伤。
3.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述毛蕊花糖苷单次应用剂量仅限于不引起中枢抑制的剂量。
4.根据权利要求3所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为60-240mg/kg。
5.根据权利要求4所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为120-240mg/kg。
6.根据权利要求5所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为240mg/kg。
7.根据权利要求1-6任一项所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述的药物被配制为通过胃肠道或肠胃外给予的剂型。
8.根据权利要求7所述的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其特征在于：所述药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型、注射液剂型或粉针剂。
权 利 要 求 书1/1页CN 109125334 A
毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑病药物中的用途
技术领域
[0001]本发明涉及毛蕊花糖苷的应用，特别涉及毛蕊花糖苷在制备新 生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途。
背景技术
[0002]新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD) 是由于围产期窒息、羊水污染等各种因素导致的缺氧与脑血流量减少或 暂停，引起胎儿及新生儿脑功能障碍的疾病。HIBD是导致新生儿神经系 统疾病的主要原因，也是全球儿童死亡率和发病率的主要因素，其发病 率为1-6‰，约40％的幸存儿也深受其害，会产生运动、情感和认知功能 障碍，重者引起新生儿死亡或神经系统后遗症，如脑瘫、癫痫、智力低 下、记忆力及视听障碍，严重影响了新生儿的生活质量，也产生了很大 的家庭和社会负担。新生儿HIBD的发病机制复杂，对新生儿围产期窒息 中度至重度患者来说，迄今为止最有效的神经保护干预措施是亚低温治 疗，目前已被许多发达国家纳入新生儿重症监护病房。然而，患有HIBD 的婴儿中只有六分之一会受益于低温疗法，许多婴儿仍有严重的不良后 果。因此及早恢复脑组织血氧的供应、促进损伤后的修复、减少其损伤 后遗症、寻安全有效的神经保护剂一直是围产医学和神经医学领域研 究的重点，具有重要的理论意义及积极的临床应用前景。[0003]毛蕊花糖苷(Verbascoside)是从肉苁蓉中分离纯化的一种苯乙醇苷 类化合物，也是药典记载的肉苁蓉主要活性成分之一，经纯化提取后为白 无定型粉末，目前主要被用于人类的医疗保健。毛蕊花糖苷能够通过 血脑屏障，无毒性且代谢迅速，其具有抗氧化、抗炎杀菌、免疫调节、 舒张血管等多种药理作用。已有学者研究证明肉苁蓉总苷对脑缺血具有 保护作用，但关于毛蕊花糖苷对新生儿缺氧缺血性脑损伤的保护作用目
发明内容
[0004]本发明的目的是通过对毛蕊花糖苷的药理作用研究，提供毛蕊花糖 苷在制备新生儿缺氧缺血
性脑损伤药物中的用途。
[0005]本发明提供毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中 的用途，所述毛蕊花糖苷的结构式如式(1)所示：
[0006]
[0007]本发明所用的毛蕊花糖苷均可经商购获得。
[0008]具体地，所述新生儿缺氧缺血性脑损伤为急性期或修复期的新生儿 缺氧缺血性脑损伤。
[0009]具体地，所述毛蕊花糖苷单次应用剂量仅限于不引起中枢抑制的剂 量。[0010]具体地，所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为60-240mg/kg。
[0011]优选地，所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为120-240mg/kg。
[0012]优选地，所述毛蕊花糖苷单次应用剂量为240mg/kg。
[0013]具体地，所述药物被配制为通过胃肠道或肠胃外给予的剂型。
[0014]优选地，所述药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型、注射液剂型 或粉针剂。[0015]具体地，所述的毛蕊花糖苷作为唯一活性成分在制备新生儿缺 氧缺血性脑损伤药物中的用途。
[0016]本发明提供的毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物 中的用途具有以下有益效果：
[0017](1)毛蕊花糖苷在不降低血糖的剂量下能显著减少脑梗死体积和细 胞坏死率；[0018](2)毛蕊花糖苷能减弱过度自噬引起的损伤作用，显著抑制缺氧缺 血后脑组织Beclin-1，LC3-Ⅱ蛋白的表达以及促进P62蛋白的表达。
[0019]本发明首次证实，毛蕊花糖苷具有新生儿缺氧缺血性脑损伤所 致神经元损伤的作用，可用于制备新生儿缺氧缺血性脑损伤的药物。
附图说明
[0020]图1为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤早期神经功能作用 统计图；(Righting reflex times：翻正反射时间；Negative geotaxis times：被动趋地时间；VB：毛蕊花糖苷组)。
[0021]图2为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的TTC染 图。[0022]图3为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺氧缺血后脑组织病理变化影响的大 脑海马CA3区和皮层病理变化HE染图。
[0023]图4为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺氧缺血后脑组织病理变化影响大脑 海马CA3区和皮层病理变化尼氏染图。
[0024]图5为毛蕊花糖苷对新生大鼠大脑缺血侧海马CA3区和皮层Beclin- 1免疫阳性细胞表达的免疫荧光图；(DAPI：4',6-二脒基-2-苯基吲哚； Merge：Beclin-1和DAPI的合成)。[0025]图6为毛蕊花糖苷对新生大鼠大脑缺血侧海马CA3区和皮层LC3免 疫阳性细胞表达的免疫荧光图；(DAPI：4',6-二脒基-2-苯基吲哚； Merge：LC3和DAPI的合成)。
[0026]图7为毛蕊花糖苷对新生大鼠大脑缺血侧海马CA3区和皮层p62免 疫阳性细胞表达的免疫荧光图；(DAPI：4',6-二脒基-2-苯基吲哚； Merge：p62和DAPI的合成)。
[0027]图8为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺血侧脑组织Beclin-1蛋白表达水平 的影响(sham：假手术组；HI：模型组；VB：毛蕊花糖苷组；ratio of Beclin-1：Beclin-1蛋白表达率；与假手术组比较：##P<0.01，与模型 组比较：＊＊P<0.01(n＝6))。
[0028]图9为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺血侧脑组织LC3-Ⅱ蛋白表达水平的 影响(sham：假手术组；HI：
模型组；VB：毛蕊花糖苷组；ratio of LC3-Ⅱ：LC3-Ⅱ蛋白表达率；与假手术组比较：##P<0.01，与模型组比 较：＊＊P<0.01(n＝6))。
[0029]图10为毛蕊花糖苷对新生大鼠缺血侧脑组织P62蛋白表达水平的影 响(sham：假手术组；HI：模型组；VB：毛蕊花糖苷组；ratio of P62： P62蛋白表达率；与假手术组比较：## P<0.01，与模型组比较：＊＊P<0.01 (n＝6))。
具体实施方式
[0030]下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例中使用 的毛蕊花糖苷均为式(1)所示的结构。毛蕊花糖苷(纯度＞98.84％，分 子量624.59)
[0031]实施例1
[0032]毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其 中，新生儿缺氧缺血为急性期缺血缺氧性脑损伤，毛蕊花糖苷单次应用 剂量为新生大鼠60mg/Kg，药物的剂型为注射液剂型。
[0033]实施例2
[0034]毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其 中，新生儿缺氧缺血为修复期缺血缺氧性脑损伤，毛蕊花糖苷单次应用 剂量为新生大鼠120mg/Kg，药物的剂型为粉针剂型。
[0035]实施例3
[0036]毛蕊花糖苷在制备新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的用途，其 中，新生儿缺氧缺血为修复期缺血缺氧性脑损伤，毛蕊花糖苷单次应用 剂量为新生大鼠240mg/Kg，药物的剂型为粉针剂型。
[0037]下面的动物实验进一步说明了上述实施例1至3的效果：
[0038]一、实验材料
[0039] 1.1动物处理
[0040]7日龄，新生SD大鼠，12-18g，购自宁夏医科大学实验动物中心，动 物生产许可证号：SCXK(宁)2015-0001。喂养条件包括标准饲料，自 来水，室温保持在(24±2)℃，湿度50-60％，每日光照与黑暗时间各 12h。实验前，将动物置于实验环境适应3天。
[0041] 1.2实验药品及仪器
[0042]毛蕊花糖苷(北京中科质检生物技术有限公司)，以生理盐水配制， 母液浓度240m g/K g，-20℃贮存。2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5- triphenyltetrazoliumchloride，TTC，购自sigma公司)，苏木精-尹 红(美国Sigma公司)，Nissl染液(北京索莱宝科技有限公司)，荧 光染料DAPI(ZSGB-BIO公司)，兔
抗Beclin-1、LC3、P62(protein公 司)，酶标仪(1510，Thermo Fisher公司)，激光共聚焦显微镜(TCS- SP，德国公司)，电泳仪、电转仪(Powerpac basic，美国Bio-Rad公 司)，凝胶成像分析仪(JS-860B，上海培清公司)。
[0043] 1.3实验动物分组及给药
[0044]新生SD大鼠，12-18g，随机分为假手术组，缺氧缺血(HIBD)模型 组，毛蕊花糖苷不同剂量组(60mg/Kg、120mg/Kg、240mg/Kg)。新生大 鼠在手术造模后，毛蕊花糖苷各剂量组给药(给药量0.1ml/10g体重，腹 腔给药，每隔12小时一次)。假手术组和模型组同法给予等量的生理盐 水。在新生大鼠缺氧缺血48h后进行早期神经功能反射，脑梗死体积、组 织病理与形态学改变、分子生物学表达变化等药效学评价。
[0045] 1.4新生大鼠缺氧缺血(HIBD)模型建立
[0046]参照Rice法，将7日龄SD大鼠放入含乙醚的密闭玻璃缸内进行吸入麻 醉，60-90s 麻醉后固定于操作台上。在颈部自甲状软骨下缘正中作一长 约1.0cm皮肤切口，钝性分离皮下组织和肌肉，分离左侧颈总动脉，穿过 4.0号丝线，双线结扎血管，中间剪断，用无损伤
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