(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010272611.7
(22)申请日 2020.04.09
(83)生物保藏信息
CCTCC M2016157 2016.03.29
CCTCC M2017813 2017.12.21
(71)申请人 善恩康生物科技（苏州）有限公司
地址 215000 江苏省苏州市昆山市张浦镇
三家路388号
(72)发明人 喻扬 郁雪平 吴婷婷
(74)专利代理机构 苏州智品专利代理事务所
(普通合伙) 32345
代理人 王利斌
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
A23L 33/135(2016.01)
A61K 35/742(2015.01)A61K 35/747(2015.01)A61P 37/04(2006.01)C12R 1/225(2006.01)C12R 1/07(2006.01)
(54)发明名称
应用
(57)摘要
本发明提供了有利于提高免疫力的益生菌
结芽孢杆菌BC01，鼠李糖乳杆菌NJ551菌株保藏
于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC
NO：M2016157，凝结芽孢杆菌BC01菌株保藏于中
国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:
M2017813。
本发明的这种益生菌组合物在较少摄入量的情况下就可以实现或者超越单菌在较大
细胞杀伤率以及血清γ‑干扰素（IFN ‑γ）、TNF ‑
α含量的恢复或者提高效果。本发明的益生菌组
合物有助于提高免疫力。权利要求书1页 说明书12页 附图5页CN 112029676 A 2020.12.04
C N 112029676
A
1.有利于提高免疫力的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物包含鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01，所述鼠李糖乳杆菌NJ551菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157，所述凝结芽孢杆菌BC01菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017813。
2.根据权利要求1所述的有利于提高免疫力的益生菌组合物，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NJ551具有如下特性：
在人工胃液中处理6小时存活率大于50%，在人工小肠液中处理1小时存活率大于26%；在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性 、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素、TNF -α含量；
由此菌株所制备的冻干粉，37℃破坏10天存活率大于50%，-18℃保存12个月存活率＞90%；
所述凝结芽孢杆菌BC01具有如下特性：
在人工胃液中处理6小时存活率大于75%，在人工小肠液中处理4小时存活率大于82%，连续通过人工胃液处理3小时和人工小肠液处理3小时存活率大于63%；
由此菌株制备的冻干粉或者喷干粉37℃破坏10天存活率大于98%，常温保存18个月存活率大于98%；
在其生命周期中存在营养态和芽孢态两种生命形态；
体外试验证实其对大肠杆菌和金黄葡萄球菌具有抑菌效果；
在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性 、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素、TNF -α含量。
3.根据权利要求1所述的有利于提高免疫力的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物中所述鼠李糖乳杆菌NJ551和所述凝结芽孢杆菌BC01单独保存或混合后保存。
4.根据权利要求3所述的有利于提高免疫力的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物为含有所述鼠李糖乳杆菌NJ551和所述凝结芽孢杆菌BC01的混合物，所述鼠李糖乳杆菌NJ551用量为2.0*105CFU/克（体重）/天；所述凝结芽孢杆菌BC01用量为6.0*104CFU/克（体重）/天。
5.一种鼠李糖乳杆菌NJ551，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NJ551，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157。
6.权利要求5所述的一种鼠李糖乳杆菌NJ551的应用，所述鼠李糖乳杆菌NJ551应用于制备有利于提高免疫力的益生菌组合物中。
7.权利要求1所述的有利于提高免疫力的益生菌组合物的制备方法，其特征在于，所述益生菌组合物的制备方法包含如下步骤：
利用所述鼠李糖乳杆菌NJ551的冻干粉和所述凝结芽孢杆菌BC01的活菌粉，稀释成混合菌液。
8.权利要求1所述的有利于提高免疫力的益生菌组合物的应用，所述益生菌组合物应用于制备提高免疫力的药品、食品或保健品中。
权 利 要 求 书1/1页CN 112029676 A
一种有利于提高免疫力的益生菌组合及其应用
技术领域
[0001]本发明属于微生物，特别涉及益生菌组合物。
背景技术
[0002]免疫力是人体抵抗疾病和维护自身健康的能力。而在人体内执行这一功能的是免疫系统。免疫系统包括免疫器官、免疫组织、免疫分子，它们交互作用构成了一张巨大的身体防御网络。尽管人类对免
疫系统还未完全掌握理解，但现有的知识已经证明了人体有70％的免疫细胞聚集于肠道，而免疫系统的发育与肠道菌息息相关。
[0003]在人体的肠道黏膜上，栖居着上千种数量达到1000亿的肠道菌。这些肠道菌与人体的黏膜免疫系统达到了一个动态的平衡，一方面人体的黏膜系统调整和维护着肠道菌的数量和种类，另一方面肠道菌也在“训练”我们的免疫系统，帮助我们的免疫系统成熟。
[0004]正常的肠道菌对免疫系统的影响至少可以体现在3个方面：(1)刺激肠道上皮细胞分泌黏液，加强黏膜层厚度；(2)参与肠道上皮细胞间的机械锁紧机制，维护肠道黏膜的通透性，避免病原体通过肠道黏膜入侵人体；(3)与肠道黏膜免疫系统的免疫细胞交流，提高免疫细胞的活力。而如果免疫系统受损，它也可能反过来影响肠道上皮细胞的通透性，黏膜的厚度以及最终影响到肠道菌的组成[1]。肠道黏膜免疫系统与肠道菌的相互作用是维护身体抗感染和自身健康的第一道防线。
[0005][1]Josie Libertucci and Vincent B.Yong.The role of the microbiota in infectious disease.Nature microbiology,2019,vol4:35-45
[0006]因此，通过益生菌干预肠道菌组成来达到提高免疫力(包括提高肠道黏膜系统的机械屏障)是一个现实可行的方法。而这种干预的效果取决于具体的益生菌菌株[2]，同一菌种的不同菌株对于免疫力可能有着完全不同的效果。筛选能够提高肠粘膜屏障作用和免疫响应的菌株及建立其对免疫力影响的评价方
法对利用益生菌干预提高免疫力具有重要的意义。
[0007][2]Cai,M.,Jolley etc.Animal studies on enhancement of immune function by dietary probiotic supplementation of Lactobacillus acidophilus NCFM and Bifidobaterium latics Bi-07.Chinese Journal of Microbiology,2008,20，(1):17-19 [0008]现在已经有一些专利已经申请或者正在申请与免疫相关的益生菌运用，比如专利申请号01816819.1等。但这些专利主要是利用过敏模型来评估益生菌干预的效果，对利用免疫抑制模型来评估益生菌干预较少，而且几乎没有评估益生菌对肠道黏膜的通透性的影响。而且这些专利在形成菌株组合物的时候，并没有评估组合物和单菌单独效果的对比。
发明内容
[0009]为了解决上述存在的问题本发明提供了有利于提高免疫力的益生菌组合物，该有利于提高免疫力的益生菌组合物包含鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01，鼠李糖乳
杆菌NJ551菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157，凝结芽孢杆菌BC01菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017813。[0010]本发明的鼠李糖乳杆菌NJ551具有如下特性：
[0011]1在人工胃液中处理6小时存活率大于50％，在人工小肠液中处理1小时存活率大于26％。
[0012]2在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(本发明中指TNF-α)含量。
[0013]3由此菌株所制备的冻干粉，37℃破坏10天存活率大于50％，-18℃保存12个月存活率＞90％。
[0014]本发明的凝结芽孢杆菌BC01具有如下特性：
[0015]1在人工胃液中处理6小时存活率大于75％，在人工小肠液中处理4小时存活率大于82％，连续通过人工胃液处理3小时和人工小肠液处理3小时存活率大于63％。[0016]2由此菌株制备的冻干粉(或者喷干粉)37℃破坏10天存活率大于98％，常温保存18个月存活率大于98％。
[0017]3在其生命周期中存在营养态和芽孢态两种生命形态。
[0018]4体外试验证实其对大肠杆菌和金黄葡萄球菌具有抑菌效果。
[0019]5在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素(IFN-γ)、TNF-α含量。
[0020]本发明还提供了由鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01组成的益生菌组合物，这种益生菌组合物在较少摄入量的情况下就可以实现或者超越单菌在较大摄入量时才能实现的对小鼠肠道黏膜通透性、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素(IFN-γ)、TNF-α含量的恢复或者提高效果。
[0021]根据本发明技术的一方面，提供了有利于提高免疫力的益生菌组合物中鼠李糖乳杆菌NJ551具有如下特性：
[0022]在人工胃液中处理6小时存活率大于50％，在人工小肠液中处理1小时存活率大于26％；
[0023]在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素(IFN-γ)、TNF-α含量；
[0024]由此菌株所制备的冻干粉，37℃破坏10天存活率大于50％，-18℃保存12个月存活率＞90％；
[0025]凝结芽孢杆菌BC01具有如下特性：
[0026]在人工胃液中处理6小时存活率大于75％，在人工小肠液中处理4小时存活率大于82％，连续通过人工胃液处理3小时和人工小肠液处理3小时存活率大于63％：
[0027]由此菌株制备的冻干粉或者喷干粉37℃破坏10天存活率大于98％，常温保存18个月存活率大于98％；
[0028]在其生命周期中存在营养态和芽孢态两种生命形态；
[0029]体外试验证实其对大肠杆菌和金黄葡萄球菌具有抑菌效果；
[0030]在免疫抑制小鼠模型中能有效恢复或者提高小鼠肠道黏膜通透性、NK细胞杀伤率以及血清γ-干扰素(IFN-γ)、TNF-α含量。
[0031]根据本发明技术的一方面，提供了有利于提高免疫力的益生菌组合物，上述益生菌组合物中鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01可以单独保存或混合后保存。[0032]根据本发明技术的一方面，提供了有利于提高免疫力的益生菌组合物，有利于提高免疫力的益生菌组合物为含有鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01的混合物，本发明提供的一种益生菌组合物，组合物可以以粉末或者液体的形式提供。这种组合物可以有效提高摄入者的免疫力。该组合物里活菌浓度(用量)可以按满足摄入者按照体重计算，一种优选的方案为：鼠李糖乳杆菌NJ551单菌的摄入浓度(用量)：2.0*105CFU/克(体重)/天；凝结芽孢杆菌BC01单菌的摄入浓度(用量)：6.0*104CFU/克(体重)/天。实际摄入的时候可以根据自身敏感性在合理范围内调整。
[0033]根据本发明技术的一方面，提供了一种提高免疫力的益生菌组合方法，该提高免疫力的益生菌组合方法为将鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01组合使用，鼠李糖乳杆菌NJ551，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157，凝结芽孢杆菌BC01，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017813。[0034]根据本发明技术的一方面，提供了一种鼠李糖乳杆菌NJ551的制备方法，将内蒙古奶酪按1％接种量接种到10％脱脂乳培养基中于37℃培养，待其凝乳后进行10倍梯度稀释，依次稀释至10-8梯度。选择4个适宜稀释度分别取1mL按照倾注法
与MRS固体培养基混合倒平板。37℃厌氧罐培养48h，观测菌落形态，挑选不同形态的菌落再次在MRS固体培养基上划线分离，如此重复划线分离3代，得到纯化后的菌株用革兰氏染法和显微镜观测，挑选出革兰氏染阳性，显微镜观测呈球状、杆状、多形状的菌株；用MRS培养基将这8株菌厌氧增殖扩培，然后收集菌泥做16s rDNA测试，挑选出鼠李糖乳杆菌NJ551，该鼠李糖乳杆菌NJ551菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157。该方法亦可作为筛选方法。
[0035]根据本发明技术的一方面，提供了一种鼠李糖乳杆菌NJ551，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157。
[0036]根据本发明技术的一方面，提供了一种上述鼠李糖乳杆菌NJ551的应用，上述鼠李糖乳杆菌NJ551应用于制备有利于提高免疫力的益生菌组合物中。
[0037]根据本发明技术的一方面，提供了上述有利于提高免疫力的益生菌组合物的制备方法，上述有利于提高免疫力的益生菌组合物包含上述的鼠李糖乳杆菌NJ551和凝结芽孢杆菌BC01，上述鼠李糖乳杆菌NJ551菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157，上述凝结芽孢杆菌BC01菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017813，上述有利于提高免疫力的益生菌组合物的制备方法包含如下步骤：
[0038]利用上述鼠李糖乳杆菌NJ551的冻干粉和上述凝结芽孢杆菌BC01的活菌粉，稀释成含凝结芽孢杆
菌BC01和鼠李糖乳杆菌NJ551的混合菌液。上述两种菌可以干粉冲饮，也可以加到液体饮料里一起，也可以用于发酵后饮用。
[0039]根据本发明技术的一方面，提供了上述有利于提高免疫力的益生菌组合物的应用，上述有利于提高免疫力的益生菌组合物应用于制备提高免疫力的药品、食品或保健品中。该应用中涉及的鼠李糖乳杆菌NJ551菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016157，涉及的凝结芽孢杆菌BC01菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏
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