(10)申请公布号 CN 102329611 A
(43)申请公布日 2012.01.25C N 102329611 A
*CN102329611A*
(21)申请号 201010226676.4
(22)申请日 2010.07.13
C09K 11/07(2006.01)
G01N 33/53(2006.01)
G01N 21/76(2006.01)
(71)申请人深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公
司
地址518057 中国广东省深圳市南山区高新
技术产业园区科技南十二路迈瑞大厦
(72)发明人钱纯亘 张裕平
(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公
司 72001
代理人付磊 林毅斌
(54)发明名称
液
(57)摘要
合物化学发光作用的增强试剂以及使用该试
剂增强化学发光作用的方法，该增强试剂含有
开了以1，2-二氧杂环丁烷化合物为底物的化
学发光液及其试剂盒，
含有1，2-二氧杂环丁烷化合物和式I 的烷基双季铵盐类化合
物。(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 2 页 说明书 11 页 附图 1 页
1.一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂，其特征在于：所述增强试剂含有至少一种具有通式I 结构的烷基双季铵盐类化合物
其中
R 1选自C 10-20的烷基、C 10-20烯基、C 10-20炔基和C 3-8环烷基C 6-12烷基-；
n 各自独立选自2～15的整数；
m 各自独立选自1～6的整数；
R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7各自独立选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基和C 3-8环烷基；
X -为负离子。
2.根据权利要求1所述的增强试剂，其特征在于：R 1选自C 12-18的烷基。
3.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7各自独立选自甲基或乙基，优选R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7为甲基。
4.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7为相同的烷基。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的增强试剂，其特征在于：n 选自5～10的整数，或m 选自2或3。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的增强试剂，其特征在于：X -选自卤素离子，ClO 4-、PF 6-、CF 3SO 3-、BF 4-、乙酸根或对甲苯磺酸根负离子。
7.根据权利要求1-6任一项所述的增强试剂，其特征在于：所述烷基双季铵盐类化合物选自十二烷基胺聚氧乙烯醚双氯化铵、十八烷基胺聚氧乙烯醚双氯化铵、十二烷基胺聚氧乙烯醚双溴化铵、十八烷基胺聚氧乙烯醚双溴化铵和其组合。
8.根据权利要求1-7任一项所述的增强试剂，其特征在于：所述烷基双季铵盐类化合物的浓度为0.1g/L ～10g/L ，优选1g/L ～10g/L 。
9.根据权利要求1-8任一项所述的增强试剂，其特征在于：所述增强试剂还含有任选的荧光剂、任选的镁离子、任选的缓冲剂和任选的防腐剂，优选缓冲剂为2-氨基-2-甲基-1-丙醇。
10.一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用增强试剂的制备方法，其特征在于：将权利要求1-9所述任一种增强试剂的各组分溶解在水中。
11.一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1-9所述任一种增强试剂，所述增强试剂组分各自单独包装，或各成分任意混合包装。
12.一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的方法，其特征在于：包括在含
1，2-二氧杂环丁烷化合物溶液中添加权利要求1-9所述的任一种增强试剂或使用权利要求11所述的试剂盒。
13.一种化学发光液，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物，其特征在于：所述化学发光液还包括权利要求1-9所述的任一种增强试剂。
14.一种化学发光液的制备方法，其特征在于：将权利要求13的化学发光液的组分溶解在水中。
15.一种化学发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括权利要求13的化学发光液，所述发光液中的组分各自单独包装，或各成分任意混合包装。
16.具有通式I 结构的烷基双季铵盐类化合物在制备化学发光液中或1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用增强试剂中的应用，
其中
R 1选自C 10-20的烷基、C 10-20烯基、C 10-20炔基和C 3-8环烷基C 6-12烷基-；
n 各自独立选自2～15的整数；
m 各自独立选自1～6的整数；
R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7各自独立选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基和C 3-8环烷基；
X -为负离子。
化学发光增强试剂及其使用方法和化学发光液
技术领域
[0001] 本发明涉及化学发光免疫分析。更具体地讲，本发明涉及含有增强剂的化学发光液，制备方法及试剂盒；增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的试剂和方法，制备方法及试剂盒。
背景技术
[0002] 化学发光免疫分析是世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术。它具有灵敏度高、检测范围宽、操
作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点，是目前免疫定量分析最理想的方法。
[0003] 在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、1，2-二氧杂环丁烷化合物(1，2-dioxetane compound)。其中异鲁米诺和吖啶酯作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应。鲁米诺和1，2-二氧杂环丁烷化合物依靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应。1，2-二氧杂环丁烷化合物是最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，在适宜的缓冲液中，随着碱性磷酸酶的催化水解作用，1，2-二氧杂环丁烷化合物分解发出强度很高的光信号，信号可持续20个小时以上，是理想的化学发光物质。国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物，1，2-二氧杂环丁烷化合物为底物的试剂盒，与之相匹配的有DPC、Beckman、BioMerieux、Olympus全自动化学发光系统。
[0004] 1，2-二氧杂环丁烷化合物中的CSPD，CDP，CDP-Star，BZPD及其发光液，多数为国外公司Tropix，Lumigen等的专利产品，价格昂贵，大大限制了该项技术在国内的应用。国内能够提供的1，2-二氧杂环丁烷化合物——3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(AMPPD)，其发光信号强度大大弱于上述国外产品。[0005] AMPPD的分子结构中存在一个-O-O-键很弱的四元杂环和一个磷酸根基团。磷酸根基团维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定，5℃下保存的固体AMPPD几乎不分解。当有碱性磷酸酶催化作用时，AMPPD发生磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解，-O-O-四元环释放出大量能量，激发化学发光反应，发射光子。
[0006] 1989年，Schaap报道了利用十六烷基三甲基溴化铵和5-(N-十四酰)-氨基荧光素对1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学发光增强的技术(Clin.Chem.，35)。在美国专利US4959182和US5004565及中国专利CN89106249.1中，Schaap描述了在十六烷基三甲基溴化铵形成的胶束条件下，1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学和酶触发而导致的化学发光增强。
[0007] 美国专利US5145772公开了聚乙烯苄基二甲基苄基氯化铵(BDMQ)、血清白蛋白等大分子物质对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效应。美国专利US5547836公开了聚乙烯苄基三甲基氯化铵(TMQ)及聚乙烯苄基三丁基氯化铵(TBQ)可作为1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂。
[0008] 美国专利US5393469公开了聚合季膦盐对酶催化1，2-二氧杂环丁烷化合物所产生的发光增强作用。
[0009] 美国专利US5650099及中国专利CN1208399A 公开了依靠双阳离子表面活性剂——三辛膦甲基-4-三丁基膦甲基苯二氯化物和荧光物——荧光素、羟基芘磺酸对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效应。
[0010]
中国专利CN1719254A 公开了一种以CSPD 为底物，氯化十六烷三甲基铵、肉蔻酰甘
油磷酸二钠、牛血清白蛋白、十八烷氨基荧光素为增强剂的化学发光液。
[0011] 上述专利中公开的1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂所使用的聚合物和长链烷基荧光物，价格昂贵，不易购买。
[0012] 因此，本领域需要开发更经济的化学发光液和增强1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的试剂和方法。发明内容
[0013]
本发明一方面提供了一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂和试剂盒，该增强试剂或试剂盒含有至少一种具有通式I 结构的烷基双季铵盐类化合物，[0014]
[0015]
其中，R 1选自C 10-20的烷基、C 10-20烯基、C 10-20炔基和C 3-8环烷基C 6-12烷基-；n 各自
独立选自2～15的整数；m 各自独立选自1～6的整数；R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7各自独立选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基和C 3-8环烷基；X -为负离子。
[0016] 本发明另一方面还提供了一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂的制备方法，包括将本发明公开的增强试剂的组分溶解在水中。
[0017] 本发明还提供了一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的方法，包括在含1，2-二氧杂环丁烷化合物溶液中添加本发明公开的增强试剂或使用本发明的试剂盒。
[0018] 本发明又一方面提供了一种化学发光液和试剂盒，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物和本发明公开的增强试剂。
[0019] 本方面还一方面提供了具有通式I 结构的烷基双季铵盐类化合物在制备化学发光液中的应用。
[0020] 本发明所公开的化学发光增强试剂和方法，组分简单，简便易行，对1，2-二氧杂环丁烷化合物的增强发光效果明显。本发明公开的化学发光液，发光信号大大增强，且发光信号稳定，持续时间长，具有与进口产品相似的发光效果，可应用于化学发光免疫检测和
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