(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011605192.0(22)申请日 2020.12.30
(71)申请人 南京杰运医药科技有限公司
地址 210000 江苏省南京市江北新区天圣
路22号F栋1305、1306、1307、1308室(72)发明人 华阳 刘足和 汪辉员 王旭凤 (74)专利代理机构 南京瑞华腾知识产权代理事
务所(普通合伙) 32368
代理人 邱欢欢(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)G01N 30/34(2006.01)G01N 30/86(2006.01)
(54)发明名称
本发明公开了一种液相谱测定法匹拉韦的方法，包括：S1：标准溶液配制；S2：样品溶液配制：称取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL 的溶液作为样品溶液；S3：进样分析：取空白溶液、标准品溶液、样品溶液各20μL注入液相谱仪进行测定，其中柱温35℃，流速1.0mL/min；S4：纪录峰面积，按外标法计算法匹拉韦的含量。本发明操作步骤简便，重现性好，灵敏度高，检测结果准确，可以有效地对研发生产部门做质量指导，也可以让质量部门对中控及成品检测放行有 据可依。权利要求书1页 说明书6页 附图3页
CN 112763622 A 2021.05.07
C N 112763622
A
1.一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤：S1：标准溶液配制：法匹拉韦成品或中间体标准品适量，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为标准品溶液；
S2：样品溶液配制：称取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为样品溶液；
S3：进样分析：取空白溶液、标准品溶液、样品溶液各20μL注入液相谱仪进行测定，其中柱温35℃，流速1.0mL/min；
S4：纪录峰面积，按外标法计算法匹拉韦的含量，
法匹拉韦样品中法匹拉韦含量按照以下公式计算：
所述设置液相谱检测条件为采用梯度洗脱条件，如下表：时间/min 流动相A％流动相B％08020155050168020208020
。2.根据权利要求1所述的一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：所述液相谱仪采用的流动相A为酸性水溶液加离子对试剂，且pH值为1‑3。
3.根据权利要求2所述的一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：所述酸性水溶液为磷酸、三氟乙酸、高氯酸中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：所述离子对试剂为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、壬烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、高氯酸钠中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：所述液相谱仪采用的流动相B为90％乙腈水溶液。
6.根据权利要求1所述的一种液相谱测定法匹拉韦的方法，其特征在于：所述液相谱仪包括含有紫外检测器的高效液相谱仪和十八烷基键合硅胶谱柱。
权 利 要 求 书
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CN 112763622 A
一种液相谱测定法匹拉韦的方法
技术领域
[0001]本发明属于法匹拉韦检测技术领域，具体涉及一种液相谱测定法匹拉韦的方法。
背景技术
[0002]法匹拉韦，是由日本富士胶卷富山化学研制，该药物于2014年3月在日本批准上市，用于甲型、
乙型流感的抗病毒。研究表明除流感病毒外，该药还对多种RNA病毒展现出良好的抗病毒作用，如埃博拉病毒、沙粒病毒、布尼亚病毒、狂犬病毒等。新型冠状病毒属于冠状病毒，是具有外套膜的正链单股RNA病毒，从机制上讲，法匹拉韦对新型冠状病毒也具有潜在的抗病毒作用。2020年3月17日，科技部生物中心主任张新民介绍，法匹拉韦已完成临床研究，显示出良好的2019‑nCoV临床疗效。基于化学合成过程中不可避免的使用各种原材料，会产生除目标产物外的其它副产物，而终产品在储存、制剂过程中也会降解，本发明法匹拉韦原料药及中间体的液相谱测定方法可以很好地控制产品的质量，包括含量、含中间体在内的固有杂质、降解产物等。
发明内容
[0003]本发明的目的在于提供一种液相谱测定法匹拉韦的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
[0004]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种液相谱测定法匹拉韦的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
[0005]S1：标准溶液配制：法匹拉韦成品或中间体标准品适量，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为标准品溶液；
[0006]S2：样品溶液配制：称取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为样品溶液；
[0007]S3：进样分析：以初始条件平衡仪器，等基线平衡后，取空白溶液、标准品溶液、样品溶液各20μL注入液相谱仪进行测定，其中柱温35℃，流速1.0mL/min；
[0008]S4：纪录峰面积，按外标法计算法匹拉韦的含量，
[0009]法匹拉韦样品中法匹拉韦含量按照以下公式计算：
[0010]
[0011]所述设置液相谱检测条件为采用梯度洗脱条件，如下表：
[0012]时间/min流动相A％流动相B％
08020
155050
168020
208020
。[0013]优选的是，所述液相谱仪采用的流动相A为酸性水溶液加离子对试剂，且pH值为1‑3，流动相A的最佳组成为1mL/L磷酸加1g/L辛烷磺酸钠，操作简便，误差可控。
[0014]优选的是，所述酸性水溶液为磷酸、三氟乙酸、高氯酸中的一种。
[0015]优选的是，所述离子对试剂为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、壬烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、高氯酸钠中的一种，浓度5‑25mmol/L。
[0016]优选的是，所述液相谱仪采用的流动相B为90％乙腈水溶液。
[0017]优选的是，所述液相谱仪包括含有紫外检测器的高效液相谱仪和十八烷基键合硅胶谱柱，紫外检测器为紫外全波长扫描检测器(DAD222nm)。
[0018]本发明好包括纯度的测定，在纯度测定过程中测定方法相同，不同的是：[0019]样品溶液的配制为：取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液适量，加稀释液配制成目标物质浓度约0.5mg/mL的溶液作为样品溶液，
[0020]以面积归一法读取纯度。
[0021]本发明的技术效果和优点：1、本发明操作步骤简便，重现性好，灵敏度高，检测结果准确，可以有效地对研发生产部门做质量指导，也可以让质量部门对中控及成品检测放行有据可依；
[0022]2、本发明适用于法匹拉韦研发、生产的全周期，该方法适用于法匹拉韦研发生产过程中的中控、中间体及成品放行的检测，也适用于法匹拉韦相关制剂各剂型的检测，如含量、有关物质、溶出度等，对生产过程作有效指导，操作简便结果准确；
[0023]3、本发明使用的仪器、检测器、谱柱、试剂耗材都是普及型易获得，不同实验室可操作性高，稳定性。
附图说明
[0024]图1为本发明纯度检测样品图谱；
[0025]图2为本发明纯度检测1％自身对照图谱；
[0026]图3为本发明保留时间在8.7min的杂质的定量限图；
[0027]图4为本发明杂质线性范围图；
[0028]图5为本发明含量检测样品图谱；
[0029]图6为本发明杂质的分离度图谱。
具体实施方式
[0030]下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0031]一种液相谱测定法匹拉韦的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
[0032]S1：标准溶液配制：法匹拉韦成品或中间体标准品适量，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为标准品溶液；
[0033]S2：样品溶液配制：称取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成法匹拉韦浓度为0.1mg/mL的溶液作为样品溶液；
[0034]S3：进样分析：以初始条件平衡仪器，等基线平衡后，取空白溶液、标准品溶液、样品溶液各20μL注入液相谱仪进行测定，其中柱温35℃，流速1.0mL/min；
[0035]S4：纪录峰面积，按外标法计算法匹拉韦的含量，
[0036]法匹拉韦样品中法匹拉韦含量按照以下公式计算：
[0037]
[0038]所述设置液相谱检测条件为采用梯度洗脱条件，如下表：
[0039]时间/min流动相A％流动相B％
08020
155050
168020
208020
。[0040]具体的，液相谱仪采用的流动相A为酸性水溶液加离子对试剂，且pH值为1‑3，流动相A的最佳组成为1mL/L磷酸加1g/L辛烷磺酸钠，操作简便，误差可控。
[0041]具体的，酸性水溶液为磷酸、三氟乙酸、高氯酸中的一种。
[0042]具体的，离子对试剂为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、壬烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、高氯酸钠中的一种，浓度5‑25mmol/L。
[0043]具体的，液相谱仪采用的流动相B为90％乙腈水溶液。
[0044]具体的，液相谱仪包括含有紫外检测器的高效液相谱仪和十八烷基键合硅胶谱柱，紫外检测器为紫外全波长扫描检测器(DAD222nm)。
[0045]本发明好包括纯度的测定，在纯度测定过程中测定方法相同，不同的是：[0046]样品溶液的配制为：取法匹拉韦制剂、原料药、中间体或中控反应液适量，加稀释液配制成目标物质浓度约0.5mg/mL的溶液作为样品溶液，
[0047]以面积归一法读取纯度。
[0048]实施例1：
[0049]1、谱条件摸索
[0050]仪器：安捷伦1260(四元单泵)，检测器采用全波长扫描(DAD)、蒸发光散射(ELSD)、电喷雾(CAD)等检测器，最终选择DAD检测器，最佳波长222nm。
[0051]谱柱：安捷伦公司研制改良型十八烷基键合硅胶为固定相，型号：SB‑Aq，250×4.6mm，粒径3μm。
[0052]流动相是以酸性水溶液加离子对试剂(流动相A)‑乙腈溶液(流动相B)为流动相，其中流动相A应用的酸试剂为磷酸、三氟乙酸、高氯酸等，调节流动相A的pH值为1‑3，离子对试剂为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、壬烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、高氯酸钠等，浓度5‑25mmol/L，流动相A的最佳组成为1mL/L磷酸加1g/L辛烷磺酸钠；流动相B为90％乙腈水溶液。[0053]柱温35℃，流速1.0mL/min，进样量20μL。梯度洗脱程序如下表：
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