(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910440702.4
(22)申请日 2019.05.24
(71)申请人 韶关学院
地址 512005 广东省韶关市浈江区大学路
288号韶关学院
申请人 韶关市绿沃农业科技有限公司
(72)发明人 郑秋桦 郑翼泽 许启晓 陈曼丽
贝淑琴 吴志鸿
(74)专利代理机构 西安铭泽知识产权代理事务
所(普通合伙) 61223
代理人 俞晓明
(51)Int.Cl.
A01H 4/00(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及蝴蝶兰种苗繁育技术领域，具体
涉及一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，具体包括
以下步骤：选取健壮、带病毒的蝴蝶兰植株，消毒
后用壳聚糖溶液浸泡，再进行初代培养，挑选出
初代培养获得的病毒阴性丛生芽进行继代培养，
最后选择继代培养后获得的长势好的小苗继续
进行壮苗培养、生根培养和移栽。本发明提供的
蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，获得的蝴蝶兰苗株
品质好、脱毒率高且长势健壮，实现蝴蝶兰的无
病毒栽培。权利要求书2页 说明书6页CN 110050700 A 2019.07.26
C N 110050700
A
1.一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)材料选取
选用生长健壮、经检测后携带病毒的蝴蝶兰植株，除去叶片留取茎；
(2)材料消毒
将步骤(1)中留取的蝴蝶兰茎用水冲洗后，用质量分数为70％的酒精溶液浸泡，再用质量分数为1.0％次氯酸钠溶液消毒10-30分钟后，用无菌水冲洗；最后用质量分数为0.1％的溶液浸泡5-15min，用无菌水冲洗；
所述溶液中加有吐温，吐温在溶液中的质量分数为0.08％-0.12％；
(3)材料预处理
将消毒后的蝴蝶兰茎浸泡在1-2g/L壳聚糖溶液中20-30min；
(4)初代培养
将步骤(3)中处理过的蝴蝶兰茎切取茎尖，切取大小为0.2-1mm，留取1个叶原基；接种于初代培养基上培养，培养温度24-26℃，先暗培养2周，再置于光照为1500-5000LX的环境下培养2个月，光照时间为10-16h/日，待两片真叶展开形成丛生芽；
所述初代培养基组分为：1/3MS+3.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.3mg/L GA3+15g/L蔗糖+100mL/L椰汁+4.5-5.5g/L琼脂+0.1g/L VC+20mg/L PVP，pH为5.4-5.8；
(5)继代培养
将步骤(4)中生长出的丛生芽进行病毒检测，挑选出病毒阴性丛生芽转入继代培养基继代培养1个月，培养温度24-26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；
所述继代培养基组分为：1/3MS+5mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.3mg/L GA3+20g/L蔗糖+50mL/L柠檬汁+0.1g/L VC+1-2g/L壳聚糖，pH为5.4-5.8；
(6)壮苗培养：
继代培养后，选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养10-15天，培养温度24-26℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500-8000lx；
所述壮苗培养基为：1/2MS+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA3+30-35g/L蔗糖+0.1g/L VC+ 100mL/L柠檬汁，pH为5.4-5.8；
(7)生根培养：
将步骤(6)获得的壮苗植株新梢基部浸入50-100mg/L的IBA中4-8h，然后转入生根培养基中进行生根培养，培养温度24-26℃，光照时间为13h/d，光照强度为5000-15000lx；
所述生根培养基组分为：1/2MS+100mL/L椰汁+40g/L土豆泥+20g/L蔗糖+30mg/L活性炭，pH5.4-5.8；
(8)移栽
待步骤(7)中的壮苗生长至4-5cm高、根系3条以上、叶1-2片时，将壮苗放在自然光下炼苗5-7天；然后取出培养苗，用无菌水清洗根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75-85％，温度为20-25℃，光照5000-20000lx。
2.根据权利要求1中的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，步骤(2)中所述无菌水冲洗次数为5-10次。
3.根据权利要求1中的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，步骤(2)中酒精浸泡时间为10-30s。
4.根据权利要求1中的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，步骤(3)中蝴蝶兰茎用自来水冲洗时间为0.5-2h。
5.根据权利要求1中的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，所述吐温为吐温-20或吐温-80。
6.根据权利要求1中的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，所述茎尖的切取大小为0.2-0.4mm。
一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法
技术领域
[0001]本发明涉及蝴蝶兰种苗繁育技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法。
背景技术
[0002]蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。新春时节，蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞舞般的花朵，深受花迷们的青睐，素有“洋兰王后”之称。
[0003]蝴蝶兰是单茎性气生兰，侧枝发育非常少，因此很难常规进行分株繁殖，而且很少形成种子，种子发育也比较困难，基本上在自然条件下萌发的难度比较大，因此蝴蝶兰新品种的培育方法基本上都是经过杂交得来，大部分品种都带病毒，有记录显示，截至目前，至少有28种病毒曾经感染兰科植物。据调查，中国兰科植物感染的病毒以东亚兰嵌纹病毒(Cymbidiummosaicvirus，简称CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odontoglossumringspotvirus，简称ORSV)这两种病毒复合感染为多数。病毒传播严重制约了兰花产业化发展，病毒可造成植株叶斑、坏死以及花朵变、畸形等症状，严重影响其品质，目前尚无确切的药物能有效防治病毒的危害与传播，因此繁殖蝴蝶兰无毒苗是产业化发展的必经之路，但是其他兰花品种的方法又不能直接运用到蝴蝶兰身上，因此需要独立开发一种针对蝴蝶兰培养无毒苗的方法。
发明内容
[0004]本发明提供一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，使培养后的蝴蝶兰苗株品质好、脱毒率高且长势健壮，实现蝴蝶兰的无病毒栽培。
[0005]为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0006]一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，包括以下步骤：
[0007](1)材料选取
[0008]选用生长健壮、经检测后携带病毒的蝴蝶兰植株，除去叶片留取茎；
[0009](2)材料消毒
[0010]将步骤(1)中留取的蝴蝶兰茎用水冲洗后，用质量分数为70％的酒精溶液浸泡，再用质量分数为1.0％次氯酸钠溶液消毒10-30分钟后，用无菌水冲洗；最后用质量分数为0.1％溶液浸泡5-15min，用无菌水冲洗；所述0.1％溶液中加入吐温，使溶液中吐温的质量分数为0.08％-0.12％；
[0011](3)材料预处理
[0012]将消毒后的蝴蝶兰茎浸泡在1-2g/L壳聚糖溶液中20-30min；
[0013](4)初代培养
[0014]将步骤(3)中处理过的蝴蝶兰茎切取茎尖，切取大小为0.2-1mm，留取1个叶原基；
接种于初代培养基上培养，培养温度24-26℃，先暗培养2周，再置于光照为1500-5000LX的环境下培养2个月，光照时间为10-16h/日，待两片真叶展开形成丛生芽；所述初代培养基组分为：1/3MS+3.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.3mg/L GA3+15g/L蔗糖+100mL/L椰汁+4.5-5.5g/L琼脂+0.1g/L VC+20mg/L PVP，pH为5.4-5.8；
[0015](5)继代培养
[0016]将步骤(4)中生长出的丛生芽进行病毒检测，挑选出病毒阴性丛生芽转入继代培养基继代培养1个月，培养温度24-26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；所述继代培养基组分为：1/3MS+5mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.3mg/L GA3+20g/L蔗糖+50mL/ L柠檬汁+0.1g/L VC+1-2g/L壳聚糖，pH为5.4-5.8；
[0017](6)壮苗培养：
[0018]继代培养后，选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养10-15天，培养温度24-26℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500-8000lx；所述壮苗培养基为：1/2MS+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA3+30-35g/L蔗糖+0.1g/L VC+100mL/L柠檬汁，pH为5.4-5.8；
[0019](7)生根培养：
[0020]将步骤(6)获得的壮苗植株新梢基部浸入50-100mg/L的IBA中4-8h，然后转入生根培养基中进行生根培养，培养温度24-26℃，光照时间为13h/d，光照强度为5000-15000lx；所述生根培养基组分为：1/2MS+100mL/L椰汁+40g/L土豆泥+20g/L蔗糖+30mg/L活性炭，pH5.4-5.8；
[0021](8)移栽
[0022]待步骤(7)中的壮苗生长至4-5cm高、根系3条以上、叶1-2片时，将壮苗放在自然光下炼苗5-7天；然后取出培养苗，用无菌水清洗根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75-85％，温度为20-25℃，光照5000～20000lx。
[0023]优选地，步骤(2)中所述无菌水冲洗次数为5-10次。
[0024]优选地，步骤(2)中70％酒精浸泡时间为10-30s。
[0025]优选地，步骤(3)中蝴蝶兰茎用自来水冲洗时间为0.5-2h。
[0026]优选地，所述吐温为吐温-20或吐温-80。
[0027]优选地，所述茎尖的切取大小为0.2-0.4mm。
[0028]对比现有技术，本发明的有益效果为：
[0029]本发明提供的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，能使培养后的蝴蝶兰苗株脱毒率高、发病率低、成苗率高，栽培后适应性强，苗株长势良好，大大提高了蝴蝶兰苗株的品质。
具体实施方式
[0030]为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0031]本发明各实施例中所用MS、6-BA、NAA、GA3、蔗糖、琼脂、椰汁、VC、PVP、壳聚糖、活性炭、吐温、70％酒精、0.1％溶液、1.0％次氯酸钠均为市售，所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0032]实施例1
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