(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010758239.0
(22)申请日 2020.07.31
(71)申请人 复旦大学附属中山医院
地址 200032 上海市徐汇区医学院路136号
(72)发明人 孙明明 任骏 张英梅 毕亚光
张文静 王翔
(74)专利代理机构 上海申汇专利代理有限公司
31001
代理人 徐俊
(51)Int.Cl.
G01N 33/68(2006.01)
G01N 33/53(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及一种Western blot多抗体整膜
自动孵育盒，属于分子生物学实验技术领域。包
的孵育盒中设有将孵育盒内部隔断的隔断板；隔
断板上设有用于不同液体输送和回收的流体管
道。本发明解决了Western blot实验中孵育盒中
的孵育体积可调整，可实现自动化操作和整张膜
可曝光多个不同蛋白的问题，同时也可以适用剪
膜后多张膜在同一孵育盒内孵育的问题，节约了
抗体和时间，为Western blot实验过程实现自动
化控制提供了基础装置。权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 111896746 A 2020.11.06
C N 111896746
A
1.一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，孵育盒一端设有开口，其特征在于：包括可分隔的孵育盒、隔断板和流体管道；所述可分隔的孵育盒中设有将孵育盒内部隔断的隔断板；隔断板上设有流体管道。
2.如权利要求1所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述可分隔的孵育盒内设有平行的用于隔断的隔断板。
3.如权利要求2所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述流体管道设为两端开口的管道。
4.如权利要求3所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述流体管道垂直于可分隔的孵育盒下端面。
5.如权利要求4所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述流体管道的一端开口设为与孵育盒下端面连接。
6.如权利要求5所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述流体管道的数量大于等于1。
7.如权利要求6所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述隔断板与可分隔的孵育盒设为插接连接。
8.如权利要求7所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述隔断板与可分隔的孵育盒的插接连接处和与多抗体整膜的接触连接处设有用于阻隔液体的密封装置。
9.如权利要求8所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述隔断板周边与可分隔的孵育盒的插接连接处和与多抗体整膜的接触连接处设有用于阻隔液体的密封条。
10.如权利要求9所述的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，其特征在于：所述隔断板上设有用于显示孵育盒中液体高度的刻度；所述可分隔的孵育盒的侧壁上设有用于测量显示隔断板之间距离的刻度。
权 利 要 求 书1/1页CN 111896746 A
一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒
技术领域
[0001]本发明涉及一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，属于分子生物学实验技术领域。
背景技术
[0002]蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着。通过分析着的位置和着深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
[0003]蛋白免疫印迹法(Western Blot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。在目前的实验过程中，本技术领域的技术人员往往感到孵育抗体的过程比较繁琐，等待时间长，为了同时孵育不同的抗体需要人工剪膜，导致最后曝光的条带不在同一张膜上，而不容易根据蛋白标记Marker判断所有目的蛋白条带的大小。目前的方法由于为人工操作，人和人之间的操作差异大，容易浪费抗体，导致实验成本增加；目前现有的一些自动孵育装置不能解决在同一张膜上同时孵育多个抗体的目的，而且现有的的孵育盒往往体积不能调整，不能达到实验人员节约抗体的目的。
发明内容
[0004]本发明的目的是为解决在同一张膜上同时孵育多个目标蛋白，孵育盒的孵育体积可以调整以及孵育过程自动化的技术问题。
[0005]为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供一种Westernblot 多抗体整膜自动孵育盒，孵育盒一端设有开口，包括可分隔的孵育盒、隔断板和流体管道；所述可分隔的孵育盒中设有将孵育盒内部隔断的隔断板；隔断板上设有流体管道。[0006]优选地，所述可分隔的孵育盒内设有平行的用于隔断的隔断板。
[0007]优选地，所述流体管道设为两端开口的管道。
[0008]优选地，所述流体管道垂直于可分隔的孵育盒下端面。
[0009]优选地，所述流体管道的一端开口设为与孵育盒下端面连接。
[0010]优选地，所述流体管道的数量大于等于1。
[0011]优选地，所述隔断板与可分隔的孵育盒设为插接连接。
[0012]优选地，所述隔断板与可分隔的孵育盒的插接连接处和与多抗体整膜的接触连接处设有用于阻隔液体的密封装置。
[0013]优选地，所述隔断板周边与可分隔的孵育盒的插接连接处和与多抗体整膜的接触连接处设有用于阻隔液体的密封条。
[0014]优选地，所述隔断板上设有用于显示孵育盒中液体高度的刻度；所述可分隔的孵
育盒的侧壁上设有用于测量显示隔断板之间距离的刻度。
[0015]相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
[0016]本发明解决了Western blot实验中孵育盒中的孵育体积可以调整，可以实现自动化操作和整张膜可以曝光多个不同蛋白的问题(或者可以选择性孵育某一蛋白，同时保留所有蛋白marker)，同时也可以适用剪膜后多张膜在一孵育盒内孵育的问题，节约了抗体和时间。
[0017]本发明实现了不需要裁剪PVDF或NC膜，同时的直接在不同位置孵育不同抗体。如果裁剪PVDF或NC膜也可以实现同一个抗体孵育盒子孵育多个条带蛋白的效果。
附图说明
[0018]图1为本发明提供的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒的结构示意图；[0019]图2为本发明提供的一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒俯视结构示意图；[0020]附图标记：1.孵育盒；2.隔断板；3.流体管道；4.膜；5.蠕动泵；6.标记Marker；7.目标蛋白；
具体实施方式
[0021]为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下：[0022]如图1-2所示，本发明提供一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒，孵育盒1一端设有开口，包括可分隔的孵育盒1、隔断板2和流体管道3；可分隔的孵育盒1中设有将孵育盒1内部隔断的隔断板2；隔断板2上设有流体管道3。可分隔的孵育盒1内设有平行的用于隔断的隔断板2；流体管道3设为两端开口的管道；流体管道3垂
直于可分隔的孵育盒1下端面；流体管道3的一端开口设为与孵育盒1下端面连接。流体管道3的数量大于等于1。隔断板2与可分隔的孵育盒1设为插接连接。隔断板2与可分隔的孵育盒1的插接连接处和与多抗体整膜4的接触连接处设有用于阻隔液体的密封装置。隔断板2周边与可分隔的孵育盒1的插接连接处和与多抗体整膜4的接触连接处设有用于阻隔液体的密封条。隔断板2上设有用于显示孵育盒1中液体高度的刻度；可分隔的孵育盒1的侧壁上设有用于测量显示隔断板之间距离的刻度。
[0023]实施例
[0024]如图1-2所示，本发明的孵育盒1在进行Western blot实验时，放置在一个底座可以制冷的底座上，底座可以倾斜摇动，并且在蠕动泵5的作用下输送和回收液体(牛奶，抗体，TBST等)时，当一个阶段的孵育工作完成时，底座可以倾斜，方便流体管道3将液体彻底排出。底座上可以放置多个孵育盒；底座上配有盖子，底座边缘有蓄水池，保持一定的湿度，防止抗体的蒸发。
[0025]孵育盒1配套有多个隔断板2，隔断板2上标有标记，分别对应不同的抗体蠕动管；孵育盒1的盒底部和隔断板2下端之间放置多抗体整膜4；根据多抗体整膜4上已经显示的代表蛋白分子量大小的标记Marker6的位置，判断每个目标蛋白7在多抗体整膜4上大概的位置，此时由于隔断板2已经将孵育盒1分隔为不同的孵育空间，每个目标蛋白7也处在不同的孵育空间中；孵育盒1侧壁上和隔断板2上刻有刻度，根据刻度可以计算出每个孵育空间的体积，即可以推算出每个孵育空间中需要的抗体液的体积；通过蠕动泵5将所需要的孵育液
经过流体管道3输送到不同的孵育空间中，最终一张膜上可以同时孵育多个目标蛋白7，并且在一个整膜上可以曝光多个目标蛋白7的条带。
[0026]每个隔断板2一侧连接有5个流体管道3，一个用于一抗的加入与回收(一抗流体管道)，一个用于二抗的加入与回收(二抗流体管道)，一个用于TBST的加入(TBST流体管道)，一个用于牛奶的加入(牛奶流体管道)，一个用于废液的回收(废液流体管道)。
[0027]设置四路手机远程遥控装置，控制每个蠕动泵的开关时间或者正/反转，达到加入或者吸出液体的目的。通过手机远程操作，或者和天猫精灵等语音助手联动达到自动控制输送孵育液和排出孵育液的过程；达到自动控制实验过程的目的。
[0028]本发明一种Western blot多抗体整膜自动孵育盒使用方法：
[0029]通过手机对应的App，操控牛奶，TBST，一抗，二抗的孵育时间和清洗时间。下面以一次一张膜多个目标蛋白操作为例：如图2所示；
[0030] 1.Western blot转膜后将PVDF/NC膜放入孵育盒1内，根据目标蛋白7的分子量对应的蛋白marker6的相对位置，把对应的隔断板2插入孵育盒1中；
[0031] 2.隔断板2上的TBST流体管道，牛奶流体管道，废液流体管道长期和TBST，牛奶，废液存储容
器联通，根据每个隔断板2隔断的孵育空间所对应的不同蛋白分别通过不同的流体管道3接入不同的一抗液，和二抗液。隔断板2之间的刻度差和孵育盒上的显示液体高度的刻度可以帮助判断所需加入抗体的体积大小。
[0032] 3.用手机设置程序(设置好后可以保存为场景)，提前开启底座制冷，准备好5％牛奶，TBST，不同的一抗，不同的二抗到对应的储存容器里。
[0033]实验开始，先通过蠕动泵5经牛奶流体管道加入孵育空间5％的牛奶孵育1小时，开启废液蠕动泵吸出牛奶；通过蠕动泵5经TBST流体管道加入TBST，孵育15分钟后，开启废液蠕动泵吸出TBST，重复3次；通过蠕动泵5经一抗流体管道加入一抗(根据隔板间距，对应加入的体积；不同的孵育空间对应的不同蛋白分别通过流体管道3接入不同的一抗液)，孵育12小时后开启废液蠕动泵吸出一抗；通过蠕动泵5经TBST流体管道加入TBST，15分钟后，开启废液蠕动泵吸出TBST，重复3次；通过蠕动泵5经二抗流体管道加入二抗(根据隔板间距，准备对应的加入体积；每个孵育空间所对应的不同蛋白分别通过流体管道3接入不同的二抗液)，孵育1小时后开启废液蠕动泵吸出二抗；通过蠕动泵5经TBST流体管道加入TBST，15分钟后，开启废液蠕动泵吸出TBST，重复3次；最后人工加入显影液，准备曝光目标蛋白；实验完成。
[0034]以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对
于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
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