(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811057674.X
(22)申请日 2018.09.11
(71)申请人 广州华玺生物科技有限公司
地址 510700 广东省广州市高新技术产业
开发区科学城开源大道11号科技企业
加速器A4栋第五层501B单元
申请人 浙江中医药大学
(72)发明人 钟晓明 许梦捷 刘祖望 汤丹
黄真
(74)专利代理机构 杭州求是专利事务所有限公
司 33200
代理人 忻明年
(51)Int.Cl.
A61K 8/9789(2017.01)
A61Q 19/02(2006.01)
(54)发明名称
品中的应用
(57)摘要
本发明公开了一种刺梨多酚提取物及制备
方法和在化妆品中的应用。本发明的刺梨多酚提
下：步骤1：取刺梨果实，干燥粉碎，过50目筛后，
加入乙醇水溶液加热至所需温度，在超声功率下
提取提取液；步骤2：取提取液，减压回收溶剂，旋
蒸浓缩，获得刺梨多酚粗提物；步骤3：取刺梨多
酚粗提物，用大孔树脂装柱，将用乙醇配成的一
定浓度的刺梨粗多酚溶液，用上样液上柱纯化，
再用解吸液洗脱得到洗脱液，再经过减压干燥浓
缩，真空干燥得到刺梨多酚提取物粉末。本发明
具有提取工艺简单，可操作性强，多酚纯度高等
优点。本发明还提供的刺梨多酚提取物作为酪氨
酸酶抑制剂能够作为美白化妆品的原料。权利要求书1页 说明书9页 附图3页CN 109091429 A 2018.12.28
C N 109091429
A
1.一种刺梨多酚提取物，其特征在于其中多酚含量不低于33％。
2.根据权利要求1所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：取刺梨果实，干燥粉碎，过50目筛后，加入一定量的乙醇水溶液加热至所需温度，在一定超声功率下提取提取液；
步骤2：取提取液，减压回收溶剂，一定温度旋蒸浓缩，获得刺梨多酚粗提物；
步骤3：取刺梨多酚粗提物，用大孔树脂装柱，将用乙醇配成的一定浓度的刺梨粗多酚溶液，以一定上样液浓度、上样液流速流速和上样液pH上柱纯化，再以一定解吸液流速、解吸液浓度、解吸液pH洗脱得到洗脱液，再经过减压干燥浓缩，真空干燥得到刺梨多酚提取物粉末。
3.根据权利要求2所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤1中乙醇水溶液中乙醇的体
积分数为0％-100％；刺梨果实与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1：5-1：150；加热温度为25℃-100℃；超声功率为80-400W；提取液的提取时间为0.5h -4h；提取液的提取次数为1-4次。
4.根据权利要求2所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤1中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为80％；刺梨果实与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1：100；加热温度为90℃；超声功率为250W；提取液的提取时间为80min、40min；提取液的提取次数为3次。
5.根据权利要求3或4所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤2的具体实现如下：将获得的提取液在40-60℃旋转蒸发，去除经过步骤1得到的提取液中的乙醇，得到刺梨多酚粗提取物。
6.根据权利要求5所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于所述的步骤3具体实现如下：将步骤2获得的刺梨多酚粗提物，以一定上样液浓度通过大孔吸附树脂吸附，先后用一定pH一定流速的水和低浓度乙醇洗脱到无后，依次用40-95％浓度的乙醇梯度洗脱，收集40-95％的乙醇洗脱液。
7.根据权利要求6所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤3中所述的大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，包括ADS -17、HPD -600、AB -8和NKA -9。
8.根据权利要求7所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤3中的所述上样液流速为1-5mL/min；上样液浓度为0.6-1.0mg/mL；上样液pH值为4-8。
9.根据权利要求6或7或8所述的一种刺梨多酚提取物的制备方法，其特征在于步骤3中的所述解吸液流速为1-5mL/min；解吸液浓度为50％-90％；解吸液pH值为4-8。
10.根据权利要求1所述的刺梨多酚提取物在化妆品中的应用，其特征在于：刺梨多酚提取物能够作为美白化妆品的原料。
权 利 要 求 书1/1页CN 109091429 A
一种刺梨多酚提取物及制备方法和在化妆品中的应用
技术领域
[0001]本发明涉及刺梨多酚提取物及其制备方法与应用，尤其是在美白化妆品方面的应用。
背景技术
[0002]刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)为蔷薇科蔷薇属植物缫丝花的果实，又名茨梨、木梨子、文光果、送春归，为云贵高原特有的野生植物资源，有消食健脾，收敛止泻的功效。刺梨中含有丰富的维生素、多酚、黄酮、有机酸、多糖、氨基酸以及微量元素等物质，具有很高的营养价值。研究发现，刺梨中多种活性成分，如刺梨多酚、刺梨黄酮、刺梨多糖等均具有抗衰老、抗氧化以及清除自由基的作
用，提示在美白化妆品开发领域具有潜在的应用前景。然而目前关于刺梨美白领域的研究处于起步阶段，刺梨多酚的提取技术和效率尚没有系统研究，对酪氨酸酶活性的影响和美白功效评价未见研究报道，限制了刺梨作为美白添加剂的后续研究。本发明以民族特药材刺梨为原料，系统制备了刺梨多酚提取物，并研究其对B16的细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响，以期为刺梨在美白化妆品中的应用提供理论依据。随着生活水品的提高，化妆品已经成为人们日常生活的必需品，对化妆品的品质要求也越来越高。“崇尚自然”成为世界各国化妆品的主要发展趋势，力求在化妆品中使用天然植物原料。
[0003]公开号为CN102028780A的专利提供了一种刺梨黄酮的电离辐射防护新用途，通过水提醇沉的方法，制备刺梨黄酮，应用于细胞及动物的电离辐射防护实验；公开号为CN107802543A的专利提供了一种刺梨素焕肤生物纤维面膜及其制备方法，采用刺梨果匀浆后超声提取，收集上清液，滤渣继续发酵，合并上清液和发酵液，进行自由基清除实验、超氧岐化酶活性及抑菌活性；公开号为CN107028818A提供了制备美白肌肤刺梨颗粒的方法。公开号为CN105663496A的专利提供了一种含有芦荟和刺梨果提取物的烫伤、烧伤药组合物及其应用，采用蔗糖浸渍后压榨与芦荟提取物混合，但未研究刺梨提取物中成分及烫伤机理；公开号为CN 201710633848的专利公布了一种刺梨原液面膜的配方及制作方法，公开号为CN 104523535A的专利公布了一种美白保湿化妆品及其方法，但未说明提取刺梨根方法、有效成分和美白作用机理；公开号为CN106309629A的专利公布了一种刺梨、葎草、桑叶混合提取物，但未测定其中有效成分含量和美白作用机理。公开号为CN101062002的专利公
布了含刺梨提取物的护肤组合物，有保湿、抗衰老作用；目前的关于刺梨研究的专利、文献均未说明刺梨提取物的美白有效成分和作用机理。综合现有专利和文献资料，现有的制备技术获得的刺梨提多酚取物多酚含量低，刺梨多酚提取物在美白化妆品中的应用也未见相关的研究报道。
发明内容
[0004]本发明的目的是针对上述问题，提供一种刺梨多酚提取物及制备方法和在化妆品中的应用。通过该方法制备获得的刺梨多酚提取物与现有的技术相比，具有提取工艺简单，
可操作性强，多酚纯度高等优点。
[0005]一种刺梨多酚提取物，其中多酚含量不低于33％。
[0006]一种刺梨多酚提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0007]步骤1：取刺梨果实，干燥粉碎，过50目筛后，加入一定量的乙醇水溶液加热至所需温度，在一定超声功率下提取提取液；
[0008]步骤2：取提取液，减压回收溶剂，一定温度旋蒸浓缩，获得刺梨多酚粗提物。[0009]步骤3：取刺梨多酚粗提物，用大孔树脂装柱，将用乙醇配成的一定浓度的刺梨粗多酚溶液，以一定上样液浓度
、上样液流速流速和上样液pH上柱纯化，再以一定解吸液流速、解吸液浓度、解吸液pH洗脱得到洗脱液，再经过减压干燥浓缩，真空干燥得到刺梨多酚提取物粉末。
[0010]作为优选，步骤1中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为0％-100％。
[0011]作为优选，步骤1中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为80％。
[0012]作为优选，步骤1中刺梨果实与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1：5-1：150。[0013]作为优选，步骤1中刺梨果实与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1：100。[0014]作为优选，步骤1中所述的加热温度为25℃-100℃。
[0015]作为优选，步骤1中所述的加热温度为90℃。
[0016]作为优选，步骤1中所述的超声功率为80-400W。
[0017]作为优选，步骤1中所述的超声功率为250W。
[0018]作为优选，步骤1中所述的提取液的提取时间为0.5h-4h。
[0019]作为优选，步骤1中所述的提取液的提取时间为80min、40min。
[0020]作为优选，步骤1中所述提取液的提取次数为1-4次。
[0021]作为优选，步骤1中所述提取液的提取次数为3次。
[0022]所述的步骤2的具体实现如下：将获得的提取液在40-60℃旋转蒸发，去除经过步骤1得到的提取液中的乙醇，得到刺梨多酚粗提取物。
[0023]作为优选，步骤2中的提取液在40℃旋转蒸发，去除经过步骤1得到的提取液中的乙醇，得到刺梨多酚粗提取物。
[0024]所述的步骤3具体为将步骤2获得的刺梨多酚粗提物，以一定上样液浓度通过大孔吸附树脂吸附，先后用一定pH一定流速的水和低浓度乙醇洗脱到无后，依次用40-95％浓度的乙醇梯度洗脱，收集40-95％的乙醇洗脱液。
[0025]作为优选，步骤3中所述的大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，
[0026]作为优选，步骤3中大孔树脂为ADS-17、HPD-600、AB-8和NKA-9中的一种或多种。[0027]作为优选，步骤3中的大孔树脂选用AB-8树脂。
[0028]作为优选，步骤3中的所述上样液流速为1-5mL/min。
[0029]作为优选，步骤3中的所述上样液流速为3mL/min。
[0030]作为优选，步骤3中的所述上样液浓度为0.6-1.0mg/mL。
[0031]作为优选，步骤3中的所述上样液浓度为0.72mg/mL。
[0032]作为优选，步骤3中的所述上样液pH值为4-8。
[0033]作为优选，步骤3中的所述上样液pH值为5.59。
[0034]作为优选，步骤3中的解吸液流速为1-5mL/min。
[0035]作为优选，步骤3中的解吸液流速为2.69mL/min。
[0036]作为优选，步骤3中的解吸液浓度为50％-90％。
[0037]作为优选，步骤3中的解吸液浓度为69.4％。
[0038]作为优选，步骤3中的解吸液pH值为4-8。
[0039]作为优选，步骤3中的解吸液pH值为6.3。
[0040]所述的步骤3的减压干燥步骤具体为：将获得的提取液在40-60℃旋转蒸发，去除脱液中的乙醇，再经真空干燥或低温冷冻干燥后，得到刺梨多酚提取物。
[0041]优选的，刺梨多酚提取物的干燥方法为真空干燥。
[0042]制备刺梨多酚提取物，检测其纯度后，检测不同浓度的刺梨多酚提取物对小鼠黑素瘤B16细胞的影响，MTT法检测刺梨多酚提取物对小鼠黑素瘤B16细胞增殖活性的影响，倒置显微镜观察其对细胞形态和数量的影响，多巴氧化法检测其对酪氨酸酶活性的影响。不同浓度的刺梨多酚提取物对B16细胞增殖和酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用，且呈现显著的浓度依赖性(P＜0.5)，高剂量刺梨多酚提取物可明显减少B16细胞的数量，增加细胞碎片；药物处理48h后，刺梨多酚提取物对抑制小鼠黑素瘤B16细胞增殖的IC50分别为134.16μg/mL，对抑制酪氨酸酶活性的IC50分别为82.42μg/mL，且刺梨多酚提取物对小鼠黑素瘤B16细胞酪氨酸酶的抑制作用优于阳性对照VC。
[0043]本发明还提供的刺梨多酚提取物对小鼠黑素瘤B16细胞增殖和酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用，因此本发明还提供了刺梨多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂在美白化妆品中的应用。本发明提供的实验数据表明，本发明提供的刺梨多酚提取物对酪氨酸酶有着良好的抑制作用，作用48h时抑制酪氨酸酶活性的IC50值为134.16μg/mL，显著优于阳性对照品VC。刺梨多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂具有潜在的开发前景。
[0044]本发明的优点和有益效果如下：
[0045](1)本发明以刺梨果实为原料，通过乙醇加热浸提法和大孔树脂纯化法获得刺梨多酚提取物。本发明所述的刺梨多酚提取物的制备方法工艺合理，简便易行，生产成本低，多酚类化合物的得率和纯度高，可用于大批量的工业化生产，具有广阔的市场应用前景。[0046](2)本发明制得的刺梨多酚提取物对小鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性具有良好的抑制作用，其酪氨酸酶抑制活性优于阳性对照品VC，本发明提供的刺梨多酚提取物可用于制备美白化妆品。
附图说明
[0047]图1(a)：四种大孔吸附树脂对刺梨粗多酚提取物的吸附曲线，其中大孔树脂的类型包括AB-8、HPD-600、ADS-17和NKA-9。
[0048]图1(b)：四种大孔吸附树脂对刺梨粗多酚提取物的解吸曲线，其中大孔树脂的类型包括AB-8、HPD-600、ADS-17和NKA-9。
[0049]图2(a)上样液流速对刺梨粗多酚吸附效果的影响，其中上样液流速1-5mL/min。[0050]图2(b)上样液浓度对刺梨粗多酚吸附效果的影响，其中上样液浓度为0.6-1.0mg/ mL。
[0051]图2(c)上样液pH对刺梨粗多酚吸附效果的影响，其中上样液pH为4-8。
[0052]图3(a)解吸液流速对刺梨粗多酚解吸效果的影响。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议