一种乳酸菌高密度发酵剂及其制备方法

1.本发明涉及食品发酵技术领域，更具体的说是涉及一种乳酸菌高密度发酵剂及其制备方法。

背景技术：

2.在社会不断发展的前提下，发酵行业得到了蓬勃的发展，发酵技术在食品生产中得到了广泛的应用，各式各样的发酵剂也应运而生，如天然发酵剂、传统发酵剂、冷冻干燥浓缩发酵剂等，可应用于酸奶、酒类、奶油和干酪等发酵产品的生产中。
3.乳酸菌是一类益生菌，能够充分利用坏境中的碳水化合物使其转化为乳酸，在发酵食品中应用极其广泛，常见的乳酸菌类发酵剂有嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌等。乳酸菌发酵剂在整个发酵过程中都有着关键的功能，目前国内对发酵食品的需求量不断增加，但传统发酵剂的发酵过程复杂且菌种质量不稳定，容易造成污染。
4.直投式乳酸菌高密度发酵剂是指由分离筛选的菌株，通过乳酸菌的增殖培养、浓缩分离、加入冻干保护剂混匀后，最终经干燥技术而制成的易操作和标准化的乳酸菌发酵剂。它是一种高效型发酵剂，主要应用于酸奶及乳制品的生产。现有的直投式乳酸菌发酵剂多存在活菌含量低，复活性能差，以及产品生产周期长等缺点，不利于工业化生产。
5.综上，如何提供一种活菌含量高、复活性能好的乳酸菌高密度发酵剂及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明提供了一种乳酸菌高密度发酵剂及其制备方法。与现有发酵剂相比，该发酵剂通过乳酸菌的增值培养、浓缩分离等步骤，提高了活菌数量，且活性高，易于保藏，能够缩短产品生产周期，不需要经过乳酸菌的活化直接用于酸奶及其制品的生产使用中去。
7.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
8.一种乳酸菌高密度发酵剂，包括鼠李糖乳杆菌zrx01和冷冻干燥保护剂；
9.所述鼠李糖乳杆菌zrx01(lactobacillus rhamnosus zrx01)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2017年12月18日；保藏编号是cgmcc no.15076。
10.进一步的，所述鼠李糖乳杆菌zrx01和冷冻干燥保护剂的质量比为1:3。
11.进一步的，所述冷冻干燥保护剂由脱脂乳、山梨醇和海藻糖组成，三者的质量比为10:3:10。
12.一种乳酸菌高密度发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
13.(1)菌种活化：将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基进行菌种活化，得鼠李糖乳杆菌活化液；
14.(2)菌悬液制备：将鼠李糖乳杆菌活化液离心分离保留沉淀，得乳酸菌菌泥，之后
加入冷冻干燥保护剂，得菌悬液；
15.保护剂配比为：脱脂乳10g/100ml，山梨醇3g/100ml，海藻糖5g/100ml(保护剂是溶液，溶剂是无菌水)；
16.(3)预冻：菌悬液经预冻处理得到预处理样品；
17.(4)真空冷冻干燥：将预处理样品经真空冷冻干燥得成品。
18.进一步的，所述步骤(1)的具体操作为：
19.(11)将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养24～28h，得到鼠李糖乳杆菌一次活化液；
20.(12)将鼠李糖乳杆菌一次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养18～22h，得到鼠李糖乳杆菌二次活化液；
21.(13)将鼠李糖乳杆菌二次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养18～22h，得到鼠李糖乳杆菌活化液。
22.进一步的，所述步骤(2)中离心分离的条件为：4000～6000r/min离心10～15min。
23.进一步的，所述步骤(3)中预冻处理的条件为：-80℃预冻4～8h。使样品在干燥容器底部均匀冻结，预冻后样品不能超过1cm的厚度，预冻后样品呈块状。
24.进一步的，所述步骤(4)中真空冷冻干燥的条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa，冻干时间24～48h。观察干燥容器底部没有水分出现，并且样品内部及表面有多孔和裂痕出现，表明样品已经干燥完成，取出样品。
25.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：本发明的乳酸菌高密度发酵剂相较传统发酵剂提高了活菌数量，发酵活性强，不需要经过活化即可直接用于酸奶及其制品的生产使用中去，能直投式添加并稳定发酵，且具有长期保持高活菌量的特点。
附图说明
26.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
27.图1附图为本发明实验2中不同浓度脱脂乳对冷冻干燥结果的影响；
28.图2附图为本发明实验3中不同浓度山梨醇对冷冻干燥结果的影响；
29.图3附图为本发明实验4中不同浓度海藻糖对冷冻干燥结果的影响。
具体实施方式
30.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
31.具体实施方式中所用鼠李糖乳杆菌均为鼠李糖乳杆菌zrx01，保藏编号是cgmcc no.15076。
32.本发明所需药剂为常规实验药剂，采购自市售渠道；未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。
33.实施例1
34.(1)菌种活化：
35.(11)将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基中，接种量为1％，在37℃的摇床中180r/min培养24h，得到鼠李糖乳杆菌一次活化液；
36.(12)将鼠李糖乳杆菌一次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1％，在37℃的摇床中180r/min培养18h，得到鼠李糖乳杆菌二次活化液；
37.(13)将鼠李糖乳杆菌二次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1％，在37℃的摇床中180r/min培养18h，得到鼠李糖乳杆菌活化液。
38.(2)菌悬液制备：
39.将鼠李糖乳杆菌活化液经过离心分离得到乳酸菌菌泥，离心转速为4000r/min，离心时间为10min，添加配置好的冷冻干燥保护剂，冷冻干燥保护剂由10g/100ml脱脂乳、3g/100ml山梨醇和5g/100ml海藻糖组成，冷冻干燥保护剂与菌泥混合的质量比为3:1，将混合物充分摇匀，制备鼠李糖乳杆菌菌悬液，4℃冷藏备用。
40.(3)预冻：
41.将制备好的鼠李糖乳杆菌菌悬液置于培养皿中，用保鲜膜密封，迅速放入-80℃环境中预冻4h。预冻样品不能超过1cm的厚度，预冻后样品呈块状。
42.(4)真空冷冻干燥：
43.开启真空冷冻干燥机，设置冷冻条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa。放入样品，干燥24h，观察培养皿底部没有水分出现，并且样品内部及表面有多孔和裂痕出现，表明样品已经干燥完成，取出样品。
44.实施例2
45.(1)菌种活化：
46.(11)将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基中，接种量为2％，在37℃的摇床中200r/min培养28h，得到鼠李糖乳杆菌一次活化液；
47.(12)将鼠李糖乳杆菌一次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为2％，在37℃的摇床中200r/min培养22h，得到鼠李糖乳杆菌二次活化液；
48.(13)将鼠李糖乳杆菌二次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为2％，在37℃的摇床中200r/min培养22h，得到鼠李糖乳杆菌活化液。
49.(2)菌悬液制备：
50.将鼠李糖乳杆菌活化液经过离心分离得到乳酸菌菌泥，离心转速为6000r/min，离心时间为15min，添加配置好的冷冻干燥保护剂，冷冻干燥保护剂由10g/100ml脱脂乳、3g/100ml山梨醇和5g/100ml海藻糖组成，冷冻干燥保护剂与菌泥混合的质量比为3:1，将混合物充分摇匀，制备鼠李糖乳杆菌菌悬液，4℃冷藏备用。
51.(3)预冻：
52.将制备好的鼠李糖乳杆菌菌悬液置于培养皿中，用保鲜膜密封，迅速放入-80℃环境中预冻8h。预冻样品不能超过1cm的厚度，预冻后样品呈块状。
53.(4)真空冷冻干燥：
54.开启真空冷冻干燥机，设置冷冻条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa。放入样品，干燥48h，观察培养皿底部没有水分出现，并且样品内部及表面有多孔和裂痕出现，表明样品已经干燥完成，取出样品。
55.实施例3
56.(1)菌种活化：
57.(11)将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基中，接种量为1.5％，在37℃的摇床中190r/min培养26h，得到鼠李糖乳杆菌一次活化液；
58.(12)将鼠李糖乳杆菌一次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1.5％，在37℃的摇床中190r/min培养20h，得到鼠李糖乳杆菌二次活化液；
59.(13)将鼠李糖乳杆菌二次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1.5％，在37℃的摇床中190r/min培养20h，得到鼠李糖乳杆菌活化液。
60.(2)菌悬液制备：
61.将鼠李糖乳杆菌活化液经过离心分离得到乳酸菌菌泥，离心转速为5000r/min，离心时间为12min，添加配置好的冷冻干燥保护剂，冷冻干燥保护剂由10g/100ml脱脂乳、3g/100ml山梨醇和5g/100ml海藻糖组成，冷冻干燥保护剂与菌泥混合的质量比为3:1，将混合物充分摇匀，制备鼠李糖乳杆菌菌悬液，4℃冷藏备用。
62.(3)预冻：
63.将制备好的鼠李糖乳杆菌菌悬液置于培养皿中，用保鲜膜密封，迅速放入-80℃环境中预冻6h。预冻样品不能超过1cm的厚度，预冻后样品呈块状。
64.(4)真空冷冻干燥：
65.开启真空冷冻干燥机，设置冷冻条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa。放入样品，干燥36h，观察培养皿底部没有水分出现，并且样品内部及表面有多孔和裂痕出现，表明样品已经干燥完成，取出样品。
66.对比例1
67.不添加冷冻干燥保护剂，使用生理盐水按照质量比为3:1的比例与乳酸菌菌泥混合均匀制备鼠李糖乳杆菌菌悬液，预冻8h，真空冷冻干燥48h得到冻干鼠李糖乳杆菌菌粉。
68.实验1
69.按照1％接种剂量，先接种已活化好的鼠李糖乳杆菌活化液至锥形瓶中，37℃，180r/min培养18h至对数末期，收集鼠李糖乳杆菌菌液，并离心分离得到乳酸菌菌泥，离心转速为4000r/min，离心时间为10min。
70.将配置好的冷冻干燥保护剂(由10g/100ml脱脂乳、3g/100ml山梨醇和10g/100ml海藻糖组成)与菌泥按照质量比3:1的比例添加，对照组按照相同的比例加入无菌生理盐水，将混合物充分摇匀，制备鼠李糖乳杆菌菌悬液。
71.将鼠李糖乳杆菌菌悬液用保鲜膜密封，迅速放入-80℃环境中预冻4h，使样品在培养皿底部均匀冻结，预冻后样品不能超过1cm的厚度。开启真空冷冻干燥机，设置冷冻条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa，干燥24h，观察培养皿底部没有水分出现，并且样品内部及表面有多孔和裂痕出现，表明样品已经干燥完成，取出样品。
72.实验2
73.(1)测定样品：冷冻干燥保护剂由脱脂乳组成，且脱脂乳浓度分别为5、10、15、20、
25、0g
·
100ml-1
。
74.(2)测定指标：冻干完成后鼠李糖乳杆菌存活率。
75.(3)计算方法：
76.活菌数：平板计数法，参照国标gb 19302—2010进行活菌数的检验。
77.冻干存活率计算如下：
[0078][0079]
(4)实验结果：实验结果如图1所示。
[0080]
由图1可知，脱脂乳作为冷冻干燥保护剂添加时，随着浓度的不断增大，乳酸菌细胞存活率也随着升高，浓度在10g/100ml时活菌数最大，之后降低，这可能是由于随着保护剂浓度的增加，其渗透压升高导致菌体失水死亡，影响冻干存活率。实验结果表明，脱脂乳作为保护剂在真空冷冻干燥过程中对乳酸菌起到了明显的保护作用，当其浓度在10g/100ml时活菌数为78.68％。
[0081]
实验3
[0082]
(1)测定样品：冷冻干燥保护剂由山梨醇组成，且山梨醇浓度分别为1、3、5、7、9、0g
·
100ml-1
。
[0083]
(2)测定指标：冻干完成后鼠李糖乳杆菌存活率。
[0084]
(3)计算方法：
[0085]
活菌数：平板计数法，参照国标gb 19302—2010进行活菌数的检验。
[0086]
冻干存活率计算如下：
[0087][0088]
(4)实验结果：实验结果如图2所示。
[0089]
由图2可知，山梨醇作为冷冻干燥保护剂添加时，随着浓度的不断增大，乳酸菌细胞存活率也随着升高，浓度在3g/100ml时活菌数最大，之后降低，这可能是由于随着保护剂浓度的增加，其渗透压升高导致菌体失水死亡，影响冻干存活率。实验结果表明，山梨醇作为保护剂在真空冷冻干燥过程中对乳酸菌起到了明显的保护作用，当其浓度在3g/100ml时活菌数为52.76％。
[0090]
实验4
[0091]
(1)测定样品：冷冻干燥保护剂由海藻糖组成，且海藻糖浓度分别为5、10、15、20、25、0g
·
100ml-1
。
[0092]
(2)测定指标：冻干完成后鼠李糖乳杆菌存活率。
[0093]
(3)计算方法：
[0094]
活菌数：平板计数法，参照国标gb 19302—2010进行活菌数的检验。
[0095]
冻干存活率计算如下：
[0096][0097]
(4)实验结果：实验结果如图3所示。
[0098]
由图3可知，海藻糖作为冷冻干燥保护剂添加时，随着浓度的不断增大，乳酸菌细
胞存活率也随着升高，浓度在10g/100ml时活菌数最大，之后降低，这可能是由于随着保护剂浓度的增加，其渗透压升高导致菌体失水死亡，影响冻干存活率。实验结果表明，海藻糖作为保护剂在真空冷冻干燥过程中对乳酸菌起到了明显的保护作用，当其浓度在10g/100ml时活菌数为77.66％。
[0099]
实验5
[0100]
将脱脂乳、山梨醇和海藻糖复配使用，并优化三者复配时的使用浓度。
[0101]
(1)实验分组及方案：
[0102]
第一组：脱脂乳5g/100ml、山梨醇1g/100ml、海藻糖5g/100ml；
[0103]
第二组：脱脂乳5g/100ml、山梨醇3g/100ml、海藻糖15g/100ml；
[0104]
第三组：脱脂乳5g/100ml、山梨醇5g/100ml、海藻糖10g/100ml；
[0105]
第四组：脱脂乳10g/100ml、山梨醇1g/100ml、海藻糖10g/100ml；
[0106]
第五组：脱脂乳10g/100ml、山梨醇3g/100ml、海藻糖5g/100ml；
[0107]
第六组：脱脂乳10g/100ml、山梨醇5g/100ml、海藻糖15g/100ml；
[0108]
第七组：脱脂乳15g/100ml、山梨醇1g/100ml、海藻糖15g/100ml；
[0109]
第八组：脱脂乳15g/100ml、山梨醇3g/100ml、海藻糖10g/100ml；
[0110]
第九组：脱脂乳15g/100ml、山梨醇5g/100ml、海藻糖5g/100ml。
[0111]
(2)测定指标：冻干完成后鼠李糖乳杆菌存活率。
[0112]
(3)计算方法：
[0113]
活菌数：平板计数法，参照国标gb 19302—2010进行活菌数的检验。
[0114]
冻干存活率计算如下：
[0115][0116]
(4)实验结果：实验结果如表1所示。
[0117]
表1冷冻干燥保护剂配比筛选结果
[0118][0119][0120]
从结果分析可知，第五组的效果最好，其冻干存活率达到了86.03％；故最终确定
了冷冻干燥保护剂的最佳配比：10g/100ml脱脂乳、3g/100ml山梨醇和5g/100ml海藻糖。
[0121]
由此条件下获得的乳酸菌高密度发酵剂经平板计数法测得其密度为1.2
×
10
11
cfu/g，可直接用于酸奶及其乳制品的发酵。
[0122]
实验6乳酸菌高密度发酵剂的应用
[0123]
(1)测定样品：由普通市售安琪酸奶发酵剂发酵而成的酸牛乳diy1.1、diy1.2、diy1.3；由实施例1中制得的乳酸菌高密度发酵剂发酵而成的酸牛乳diy2.1、diy2.2、diy2.3。
[0124]
(2)制作流程：纯牛奶
→
加入6～8％白砂糖
→
灭菌
→
冷却
→
加入3％的乳酸菌高密度发酵剂
→
42℃发酵16～20h
→
凝固
→
4℃后熟。
[0125]
(3)测定指标：发酵酸奶酸度、乳酸菌总数和感官评定。
[0126]
(4)测定方法：乳酸菌总数的测定参照gb 4789.35—2016中的方法；感官评定参照gb 19302—2010中的评价标准；发酵酸奶酸度测定采用酸碱中和滴定-酚酞指示剂法。
[0127]
发酵酸奶中酸度测定方法如下：取10ml酸奶，采用0.1mol
·
l-1
naoh溶液滴定法测定酸奶的酸度。当滴入酸奶中的0.1mol naoh溶液(0.1mol
·
l-1
)被乳酸中和后多余的0.1mol
·
l-1
naoh就使先加入乳中的酚酞指示剂变红，根据此时滴定的消耗的0.1mol
·
l-1
naoh标准溶液的体积(ml)可得到滴定酸度。
[0128]
(5)测定结果：
[0129]
(51)酸奶酸度：使用制备的乳酸菌高密度发酵剂样品进行牛奶的发酵，其ph变化如表2所示。国家标准中对酸奶酸度的要求是大于70
°
t，安琪酸奶发酵剂发酵而得的酸奶酸度最高为84.83，由实施例1中直投式发酵剂发酵而得的酸奶酸度略高，最高为88.00，两种酸奶酸度相差不大，都符合国标要求。
[0130]
表2不同发酵剂类型发酵酸奶的酸度测定结果
[0131][0132]
(52)乳酸菌活菌数：牛乳发酵完成后，经过活菌计数，不同发酵剂类型发酵酸奶的乳酸菌总数结果如表3所示。由实施例1酸奶发酵剂制得的酸奶中乳酸菌含量略高于安琪酸奶发酵剂制得的酸奶，在酸奶的发酵中具有优良的复活能力。两种发酵剂发酵而成的酸奶中乳酸菌含量均能达到107cfu/ml，符合国标gb 19302—2010中对乳酸菌活菌数的规定。
[0133]
表3不同发酵剂类型发酵酸奶的乳酸菌总数
[0134][0135]
(53)感官指标：
[0136]
以3％接种量接种，经过16h的发酵，乳酸菌高密度发酵剂制作的酸牛乳感官评分
如表4。由实施例1酸奶发酵剂制备的酸牛乳呈淡黄凝状，具有发酵乳特有的风味，加入6％的蔗糖，酸奶的口味酸甜可口，组织状态细腻圆润、均匀，感官评分在80分以上，比安琪酸奶发酵剂制备的酸牛乳综合评分高4～7分，符合国标gb 19302—2010中对酸奶的感官要求。
[0137]
表4不同发酵剂类型发酵酸奶的感官评分结果
[0138][0139]
实验7
[0140]
(1)测定样品：由实施例1制备的直投式乳酸菌发酵剂。
[0141]
(2)测定指标：活菌数。
[0142]
(3)测定方法：平板计数法，参照国标gb 19302—2010进行活菌数的检验。将冻干菌粉用真空铝箔袋包装后，分别置于4℃和常温条件下储藏3个月，每间隔一个月计算单位菌粉中活菌数。
[0143]
(4)实验结果：实验结果如表5所示。随着储藏时间的延长，冻干菌粉的单位菌粉活菌数逐渐减少。冻干菌粉4℃储藏三个月的条件下仍能达到9.3
×
10
10
cfu/g，常温储存三个月条件下冻干菌粉的活菌数为8.4
×
10
10
cfu/g。在常温储藏和4℃储藏环境中，储藏三个月的冻干菌粉与0个月活菌数相比，其储藏存活率均能达到70％以上，表明该菌种在储藏过程中仍具有高活菌性的特点。
[0144]
表5不同储藏条件下冻干菌粉活菌数
[0145][0146]
从酸度、感官评分、活菌数及储藏性能得到的试验结果表明：使用乳酸菌高密度发酵剂进行酸奶的发酵，测定酸奶的各个质量指标，均符合要求，乳酸菌高密度发酵剂作为一种直投式乳酸菌发酵剂，具有高效稳定、活性高、用量少、易于保藏等特点，可用于酸奶及其乳制品的发酵。
[0147]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0148]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

技术特征：

1.一种乳酸菌高密度发酵剂，其特征在于，包括鼠李糖乳杆菌zrx01和冷冻干燥保护剂；所述鼠李糖乳杆菌zrx01保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2017年12月18日；保藏编号是cgmcc no.15076。2.如权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵剂，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌zrx01和冷冻干燥保护剂的质量比为1:3。3.如权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵剂，其特征在于，所述冷冻干燥保护剂由脱脂乳、山梨醇和海藻糖组成，三者的质量比为10:3:10。4.如权利要求1～3任一所述的乳酸菌高密度发酵剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌种活化：将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基进行菌种活化，得鼠李糖乳杆菌活化液；(2)菌悬液制备：将鼠李糖乳杆菌活化液离心分离保留沉淀，得乳酸菌菌泥，之后加入冷冻干燥保护剂，得菌悬液；(3)预冻：菌悬液经预冻处理得到预处理样品；(4)真空冷冻干燥：将预处理样品经真空冷冻干燥得成品。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作为：(11)将鼠李糖乳杆菌zrx01接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养24～28h，得到鼠李糖乳杆菌一次活化液；(12)将鼠李糖乳杆菌一次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养18～22h，得到鼠李糖乳杆菌二次活化液；(13)将鼠李糖乳杆菌二次活化液接种到mrs液体培养基中，接种量为1～2％，在37
±
1℃的摇床中180～200r/min培养18～22h，得到鼠李糖乳杆菌活化液。6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心分离的条件为：4000～6000r/min离心10～15min。7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中预冻处理的条件为：-80℃预冻4～8h。8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中真空冷冻干燥的条件为：冷阱温度-55℃，真空度1pa，冻干时间24～48h。

技术总结

本发明公开了一种乳酸菌高密度发酵剂及其制备方法。属于食品发酵技术领域。本发明的乳酸菌高密度发酵剂，包括鼠李糖乳杆菌zrx01和冷冻干燥保护剂。制备方法包括如下步骤：鼠李糖乳杆菌zrx01的活化

技术研发人员：

冉军舰 杜晗笑 于江傲 王婷婷 刘冰 赵宁宁 赵瑞香 焦凌霞 梁新红

受保护的技术使用者：

河南科技学院

技术研发日：

2022.10.17

技术公布日：

2022/12/19