(10)申请公布号
(43)申请公布日 (21)申请号 201510603386.X
(22)申请日 2015.09.21
A61D 1/00(2006.01)
(71)申请人四川康城生物科技有限公司
地址610000 四川省成都市高新区高朋大道
28号1栋309室
(72)发明人钟治晖 王欣 张印兵 叶雪飞
(74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务
所(普通合伙) 51222
代理人
李高峡 张娟
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种血栓的制备方法，它包括
如下步骤：(1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量
为血液的10～50/3倍U/mL，得混合液；(2)将步
骤(1)的混合液注入内径为1mm 的毛细塑料管中，
封口，37℃放置30min，再置于2～8℃放置12-16
小时，即可。本发明方法制备的血栓凝固性好、成
高，更方便实时观测及评判堵塞面积，应用前景良
好。(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 105326577 A 2016.02.17
C N 105326577
A
1.一种血栓的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量为血液的10～50/3倍U/mL，得混合液；
(2)将步骤(1)的混合液注入内径为1mm的毛细塑料管中，封口，37℃放置30min，再置于2～8℃放置12-16小时，即可。
2.权利要求1的方法制备的血栓。
3.权利要求2所述血栓在制备动物栓塞模型中的用途。
4.一种肺动脉栓塞模型的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
1)在动物股静脉穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导管，在导丝导引下超选入左肺动脉； 2)选择左肺动脉主干，将权利要求2所述血栓经5F导引导管注入，每次注入3mL血栓，注射三次，造成肺动脉栓塞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述穿刺的方法是Seldinger 法。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述1)，所述导丝时超硬亲水导丝。
一种血栓的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种血栓的制备方法。
背景技术
[0002] 随着人们生活水平的不断提高，心脑血管病的发病率正在不断提高，而造成心脑血管病的重要原因是由于血栓的形成，因此攻克血栓是国家的一项重大攻关课题。而血栓机制的研究、血栓性疾病的、溶栓物的研制和开发，都需要有一个可靠的动物模型的支持，因此，建立动物血栓模型是必要的前提，而建立动物血栓模型时，制备得到凝固效果好、成型效果好、稳定性好的血栓是前提。
[0003] 目前，制备血栓的方法有如下六种：
[0004] 一、用5支20mL注射器抽取新鲜动脉血100mL，顺导管推注生理盐水150mL加青霉素80万u，(每支注射器内与1.2mL氨基己酸混匀)；室温下静置30min，待其自凝后，放入70℃水浴箱内水浴10min，然后放入冰箱冷藏。将冷藏的血栓切成大小约为10mm*10mm*40mm长条状，弃除血清后装入10mL注射器。注射器注射乳头用剪刀修剪后，把乳头内径扩大至3mm左右，经修剪后的注射器注射出的血栓呈圆柱状。此方法制备的血栓无法有效成型，还需要人工切成长条状，再手工修剪注射器，繁琐耗时。
[0005] 二、动脉采血60～100mL，加入含凝血酶2000U的玻璃平皿中，静置凝固2hr；用刀片将血栓纵横切成小块，大小约有10*10*5mm3(长*宽*厚)；弃血清后装入50mL注射器中备用。此方法的成型效果也不佳，手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形状规则一致，且繁琐耗时。
[0006] 三、动物自体静脉采血20mL；注入3段长7cm，内径约4.5mm及2段长约5cm，内径约5.5cm的无菌塑胶管中；室温静置8小时后，将管内血栓柱冲出，生理盐水冲洗3遍；将上述3段或5段血栓柱吸入另一根长约25cm，内径约5.5mm的塑胶导管；将导管置于生理盐水中备用。此方法制备的血栓柱凝集不完全，成形较差，用生理盐水冲洗过程中，血栓柱容易被分散，血栓形状不易维持。
[0007] 四、取自体动脉血50mL；常温下置于试管中2小时；将血栓置于玻璃平皿中，切成直径为1-2mm大小的栓块；用生理盐水反复冲洗后，放入10mL生理盐水中备用。此方法的凝固效果较差；手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形状规则一致；用生理盐水冲洗过程中，血栓柱容易被分散，血栓形状不易维持。
[0008] 五、无菌条件下动脉插管取血0.5mL，迅速推入细聚乙烯导管中；室温静置25-30min凝固，推入生理盐水，制成直径约为0.6-0.8mm自体血栓；无菌手术刀切成长3-4mm栓块，生理盐水反复冲洗后备用。此方法的凝固效果较差；手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形状规则一致；用生理盐水冲洗过程中，血栓柱容易被分散，血栓形状不易维持，稳定性差。
[0009] 六、自体静脉采血1mL，注入无菌试管中；室温静置20-30min，凝固后，60-70℃水浴10-15min，再静置冰箱中冷藏；用手术刀将血凝块切成直径为1-2mm，长为4-5mm的柱形
血栓块备用。此方法的成型不好，手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形状规则一
致，且繁琐耗时。
[0010] 因此，需要提供一种新的凝固效果好、成型效果好、稳定性好的血栓制备方法。
发明内容
[0011] 本发明的目的在于提供一种新的凝固效果好、成型效果好、稳定性好的血栓的制备方法。
[0012] 本发明血栓的制备方法，它包括如下步骤：
[0013] (1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量为血液的10～50/3倍U/mL，得混合液；[0014] (2)将步骤(1)的混合液注入内径为1mm的毛细塑料管中，封口，37℃放置30min，再置于2～8℃放置12-16小时，即可。
[0015] 本发明还提供了前述方法制备的血栓。
[0016] 本发明还提供了前述血栓在制备动物血栓模型中的用途。
[0017] 本发明还提供了一种肺动脉栓塞模型的制备方法，它包括如下步骤：
[0018] 1)在动物股静脉穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导管，在导丝导引下超选入左肺动脉；
[0019] 2)选择左肺动脉主干，将权利要求2所述血栓经5F导引导管注入，每次注入3mL 血栓，注射三次，造成肺动脉栓塞。
[0020] 步骤1)中，所述穿刺的方法是Seldinger法。
[0021] 所述1)，所述导丝时超硬亲水导丝。
[0022] 与现有方法相比，本发明通过选择特定直径的毛细塑料管，在特定条件下制备血栓的方法，具备以下优势：
[0023] 1、方便易行，可以形成柱状规则的血栓条块，成型效果好；
[0024] 2、通过37℃放置30min，再置于2～8℃放置12～16h的方式，使得血栓充分凝集成形，凝固效果好。
[0025] 3、血栓栓块注入动物血管后，不易崩解，能较长时间维持规则的血栓条块，稳定性好。
[0026] 本发明方法制备的血栓凝固性好、成型佳、稳定性好，用于肺动脉造影时，可视化程度高，更方便实时观测及评判堵塞面积，应用前景良好。
[0027] 下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
[0028] 图1血栓形成DSA照影结果比较，A：本发明方法制备血栓肺动脉血栓DSA照影(犬)；B：文献(陈永利等，“实验性急性血栓性肺栓塞动物模型的建立”，天津医科大学学报2003第9卷第1期)报道的方法制备血栓肺动脉血栓DSA照影(兔)；
[0029] 图2犬肺动脉照影结果。
具体实施方式
[0030] 实验材料和仪器
[0031] 实验材料和仪器：
[0032]
[0033] 实验例1本发明血栓制备方法
[0034] 1)动物自体静脉采血30-50mL；
[0035] 2)吸入含500U凝血酶的注射器中；
[0036] 3)用注射器注入无菌毛细塑料管(内径为1mm)中，制备长度5cm，直径1mm的血栓；
[0037] 4)封口后，37℃水浴放置30min；
[0038] 5)再置于2～8℃过夜(12-16小时)；
[0039] 6)吸入注射器(20mL)备用。
[0040] 实施例2犬肺动脉栓塞模型的建立和评价
[0041] 1、犬肺动脉栓塞模型的建立
[0042] 1)使用丙泊酚经静脉对犬进行全身麻醉；
[0043] 2)麻醉后在犬右(或左)股动脉通过留置针置入压力传感器导管，监测循环动脉压；
[0044] 3)在犬右(或左)股静脉以Seldinger法穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导管，在超硬亲水导丝导引下超选入左肺动脉。确定5F导引导管到达位置后，接入压力传感器；
[0045] 4)选择单侧左肺动脉主干，将实施例1制备的血栓经5F导引导管注入，每次注入3mL大小的血栓，共注射三次，总体积9mL，造成单侧肺动脉栓塞。
[0046] 2、犬肺动脉栓塞模型的评价
[0047] 1)栓塞部位肺动脉造影：注栓后1小时、给药后2小时进行肺动脉造影，评价肺动脉堵塞面积百分比；
[0048] 2)肺动脉收缩压：注栓后1小时、给药后2小时检测肺动脉收缩压。
[0049] 3、评价结果
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