放线菌是一类广泛分布于土壤中的革兰氏阳性细菌,具有许多生物活性物质的合成能力,因此在医药和农业领域具有广泛的应用前景。而对于放线菌的分离与纯化,则是研究数字多样性、发掘新生物活性成分和开发新型药物的必要工作。
在进行放线菌的分离与纯化之前,需要先采集土壤样品。首先对采样是否合理、样品储存条件等要求进行评估。然后在采样地的不同位置取样,每个样品之间要有足够距离,避免重复或低效地采集。 将采集到的样品分别按照一定的方式进行处理,常用的包括罗氏囊和加热处理。可采用直接接种法和制备菌液法进行分离,直接接种法是将样品直接接种在寡速生菌平板上,不需要进行任何处理,制备菌液法先经过一定的处理如筛选、振荡等操作,然后再加入培养基中进行培养,优选后再进行接种。
三、放线菌的筛选
分离后的放线菌种中还包含其他微生物如生物体、细菌等,因此需要进行放线菌的筛选。常用的筛选方法有颜、形态、抗性和特异反应等多种选择,通过筛选后得到单个纯种放线菌株。
对于已经得到的放线菌菌株,进行菌株的鉴定是必要的。鉴定的标准包括形态学特征如形状、大小、生长习性等、生化特性如酶系统、代谢途径等、分子生物学特性如16S rDNA序列等。二氧化碳生成实验、酸碱性度测定、化学分析等,常用于进行放线菌菌株鉴定的方法。
对于分离和鉴定过的放线菌菌株,为了防止失活和污染,需要进行保存,并被录入保藏室中,应该根据放线菌不同的保存要求,选取合适的保存方式。例如,低温保存的方法如短期保存冰箱法和长期保存冷冻物质保存法等。通常选择液氮冷冻法则能够保证最长的保存时效。 总之,放线菌的分离与纯化是进行放线菌不同研究的基础,只有在得到了高纯度的菌株后,才能进一步进行后续的研究和开发工作,发掘其潜在的生物活性特性。