1.目的
1.1本规程规定了用于层析柱的清洗与保存的方法和步骤，以提高柱子在蛋白纯化过程中的分离效果，实现良好的重现性； 1.2处理后可以减少蛋白间的交差污染和内毒素污染。
2.范围
2.1本规程适用于所有的预装柱和个别内部填充的层析柱。
3.职责
3.1在开始操作前，操作人员必须阅读并理解本规程规定的内容。 3.2本操作中，会使用到危险化学品，应采取相应的保护措施。 4.定义
4.1CV: 柱体积(Column Volume)
5.相关文件和记录
5.1N/A
6.规程
清洁在线
6.1通用操作
6.1.1所有的柱子在每次使用完后（一个循环）都应进行再生处理。在位清洁（CIP）是为了除去上一个纯化循环中残留的已变性或是被牢牢吸附的沉淀物质。
6.1.2所有的柱子都应在每次使用完后或是下面情况下立即进行清洁：
●在进行下一批蛋白纯化前；
●发现柱压异常升高；
●5天以上不会使用。
6.1.3按照层析柱的类型选择合适的清洁
● 以下操作中规定的都是最小清洁使用的体积，深度清洁可以增加清洁用体积；
● 相同类型的柱子可以串联起来一起进行整批清洁；
6.1.4每一步清洁结束后的UV 280nm就小于100mAU(如果有在线紫外检测装置的话)，否则，需要重复该步骤；
6.1.5发现以下情况，应将柱子或是树酯作废：
● 树酯颜已变化
● 柱子反压力特别大
● 柱塞和胶之间出现空隙
6.2离子交换树酯葡聚糖凝胶柱的清洁（Q、SP Sepharose）
6.2.1将柱子反方向接到AKTA系统上；
6.2.2以2 CV 1M NaOH和2CV水冲洗，除去牢结在柱上的疏水蛋白或脂蛋白；
6.2.3以2 CV 2 M或更高浓度的NaCl溶液冲洗，除去强离子结合蛋白；
6.2.4最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.3肝素（葡聚糖凝胶柱Heparin Sepharose）
6.3.1将柱子反方向接到AKTA系统上；
6.3.2以2 CV 0.1M NaOH和2CV水冲洗；
6.3.3以2 CV 2 M的NaCl溶液冲洗；
6.3.4最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.4苯基葡聚糖凝胶柱（Phenyl Sepharose）
6.4.1将柱子反方向接到AKTA系统上；
6.4.2以3 CV 20 % 乙醇溶液和2CV水冲洗，使用梯度以防止产生气泡；
6.4.3以2 CV 1M NaOH冲洗，紧接着以2CV水冲洗 ；
6.4.4最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.5聚苯乙烯/二乙烯苯反相层析柱（RPC）
6.5.1将柱子接到AKTA系统上；
6.5.2以2 CV 1M NaOH和2CV水冲洗；
6.5.3以2 CV 100%乙腈溶液冲洗；
6.5.4最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.6凝胶过滤层析柱（Gel-filtration Superdex）
6.6.1将柱子接到AKTA系统上；
6.6.2以0.5 CV 0.1M NaOH和3 CV水冲洗；
6.6.3最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.7亲和层析柱（ Protein A Sepharose）
6.7.1将柱子反方向接到AKTA系统上；
6.7.2以0.5 CV 0.1M NaOH和3 CV水冲洗；
6.7.3最后，以5 CV 20 % 乙醇溶液清洗。
6.8保存
6.8.1用柱塞将柱子两端密封；
6.8.2将凝胶过滤柱保存在盒中，垂直放置在15~30 ºC；
6.8.3亲和层析柱（Protein A）保存在4ºC；
6.8.4其他层析柱可保存在4~30 ºC。
6.9记录
6.9.1使用表格记录清洁操作；
6.9.2记录与层析柱放在一起。
7.变更记录
新版文件号 | 生效日期 | 变更内容 | 代替文件 |
PD/EUM001/1 | 2014.01.22 | 第一版 | N/A |
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