韩利蓉１，宋江勤１，郭飞波１，张栋武２
△
（１．湖北省天门市第一人民医院，天门４３１７００；２．广东医科大学附属佛山高明医院，佛山５２８５００）
【摘要】 目的：探讨ｍｉＲ ２０３ａ靶向及其靶基因ＡＴＭ在乳腺癌组织中的表达及相关性，为乳腺癌的发病机制尤其是淋巴结转移机制提供理论依据。方法：收集３ ０例配对的乳腺癌和癌旁正常组织，对两组标本采用ＲＴ ｑＰＣＲ检测ｍｉＲ ２０３ａ及ＡＴＭ的相对表达量，对ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ进行相关分析，并对其与临床病理特征进行相关分析，比较ｍ
ｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ的表达在淋巴结转移和未转移之间是否有统计学差异。结果：与癌旁正常组织相比，乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ的表达显著升高（Ｐ＜０．０１），ＡＴＭ的表达显著降低（Ｐ＜０．０１），二者呈显著负相关（ｒ＝ ０．８４７，Ｐ＜０．０１）；ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ的表达均与淋巴结是否转移与不同临床分期显著相关（Ｐ＜０．０５）；ｍｉＲ ２０３ａ在淋巴结已转移组中的表达显著低于未转移组（Ｐ＜０．０５），ＡＴＭ在淋巴结已转移组中的表达显著高于未转
移组（Ｐ＜０．０１）。结论：乳腺癌早期ｍｉＲ ２０３ａ过表达抑制其靶基因ＡＴＭ的表达很可能是一种调节肿瘤细胞增殖、转移和侵袭性的保护机制，到中晚期下调ｍｉＲ ２０３ａ上调ＡＴＭ基因，可能参与淋巴结转移。【关键词】 ｍｉＲ ２０３ａ；ＡＴＭ；靶基因；乳腺癌；淋巴结转移
【中图分类号】Ｒ３４ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０６ ６００ ００５【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．６０４１．２０２０．１２６
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ ２０３ａｔａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄｉｔｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｏｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅ
ｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ
ＨＡＮＬｉ ｒｏｎｇ１，ＳＯＮＧＪｉａｎｇ ｑｉｎ１，ＧＵＯＦｅｉ ｂｏ１，ＺＨＡＮＧＤｏｎｇ ｗｕ
２△
（１．ＨｕｂｅｉＴｉａｎｍｅｎＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｍｅｎ４３１７００；２．ＦｏｓｈａｎＧａｏｍｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌａｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｆｏｓｈａｎ５２８５００，Ｃｈｉｎａ）
【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｍｉｒ ２０３ａａｎｄｉｔｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅＡＴＭｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｉｒｔｙｐａｉｒｅｄｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｎｄｐａｒａｃａｎｃｅｒｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄＲＴ ｑＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｍｉｒ ２０３ａａｎｄＡＴＭｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｏｆｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｆｏｒｍｉｒ ２０３ａａｎｄＡＴＭ，ａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃｏｎｄｕｃ ｔｅｄｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｓｏａｓｔｏｃｏｍｐａｒｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｍｉｒ ２０３ａａｎｄＡＴＭｉｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｎｏｎ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｐａｒａｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉｒ ２０３ａｉｎｂ
ｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＡＴＭｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１），ｓｈｏｗ ｉｎｇａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｔｉｓｓｕｅｓ（ｒ＝ ０．８４７，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉｒ ２０３ａａｎｄＡＴＭｗａｓｓｉｇ ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｇｅｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉｒ ２０３ａｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎｏｆＡＴＭｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉｒ ２０３ａｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｍａｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｔｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅＡＴＭ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｏｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｉ
ｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅａｎｄｌａｔｅｓｔａｇｅ，ｍｉｒ ２０３ａｉｓｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄｔｈｅＡＴＭｇｅｎｅｉｓｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】 ＭｉＲ ２０３ａ； ＡＴＭ； ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓ； ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ； ｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
【收稿日期】２０２０ ０３ １７【修回日期】２０２０ １１ ２５
△【通讯作者】Ｔｅｌ：１３０２６７７０５８５；Ｅ ｍａｉｌ：ｇｄｐｕｅｄｕｃｎ＠１２６．ｃｏｍ
微小核糖核酸（ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ）是一种长度为１８ ２２个核糖核苷酸的非编码ＲＮＡ分子，主要通过与ｍＲＮＡ的３’ ＵＴＲ结合，通过降解或抑制ｍＲＮＡ来抑制翻译，从而调节蛋白的表达，在肿瘤的
发生发展中发挥重要作用［１ ３］
ｍｉＲ ２０３ａ参与多种癌症的生物学功能，包括增殖、转移和浸润等，在不同的肿瘤组织中呈现不
同的表
达模式，在肝癌［４］、胃癌［２，５］、膀胱癌［６］、胶质瘤［３］
等
癌组织中ｍ
ｉＲ ２０３ａ呈显著低表达，在乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ显著高表达，且发现浸润性小叶癌组织
中，随着临床分级程度越高，ｍｉＲ ２０３ａ表达越低［７］
。ＤＮＡ损伤反应通路的改变是癌症的特征，ＤＮＡ损伤
的错误修复常常导致基因组不稳定［８］
。ＡＴＭ（ａｔａｘｉａ
００６ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（６）
ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａｍｕｔａｔｅｄ）是ＤＮＡ损伤修复系统的核心组成部分，在ＤＮＡ
双链断裂时被激活以增强同源重组修复通路，当ＡＴＭ基因沉默或缺失时，得不到及时修复的受损ＤＮＡ遗传给子代，增加了基因组的不稳定性，从而加大肿瘤的易感性［９，１０］。国内外研究均发现，ＡＴＭ基因的缺失或变异与肿瘤的发生发展密切相关［１１，１２］，但在不同癌症中表达各不相同：在乳腺癌中呈显著低表达［１３］，在卵巢癌中显著高表达［１４］。文献报道，在胃癌中ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ是直接的靶基因调节关系，二者呈显著负相关［２］。另一项研究也发现ｍｉＲ ２０３和ＡＴＭ在散发性乳腺癌中呈显著负相关［１３］。由此，我们推断在乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ很可能也是直接靶基因调节关系。乳腺癌是中国女性最常见的癌症，在大中城市，年轻女性中新发病例和死亡病例均有所上升［１５］。因此，对乳腺癌发病机制尤其是分子层面的研究具有重要的临床意义。目前，国内有关乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ及ＡＴＭ基因的靶向关系，以及在淋巴结已转移和未转移之间是否存在显著差异性的问题，均鲜见相关文献报道。本研究通过ＲＴ ｑＰＣＲ检测乳腺癌组织和癌旁正常组织中ｍｉＲ ２０３ａ及ＡＴＭ基因的表达情况，分析二者相关性（即对上述推断进行验证），分析其与临床病理特征的相关性，比较在淋巴结已转移组和未转移组之间是否存在显著差异性，旨在为乳腺癌的发病机制尤其是淋巴结转移机制提供医学依据。
１ 材料与方法
１．１ 标本
自２０１６年１２月至２０１８年１２月，在天门市第一人民医院病理标本库里收集的３０例配对的乳腺癌组织和癌旁正常组织。所有标本均为病理活检标本，并经病理明确诊断。纳入标准：术前均未经任何药物、化疗和放疗等。诊断标准：参照乳腺癌诊疗规范（２０１１年版）［１６］，经病理确诊为乳腺癌。排除标准：合并其他肿瘤者；合并高血压、糖尿病、高血脂等慢性疾病者；合并心、肝、肾等慢性疾病患者。本研究经本院伦理委员会同意，并经患者知情同意并签字。其中，患者平均年龄（４７．２１±１３．２６）岁，平均体重（６２．５３±８．６４）ｋｇ。
１．２ 试剂与仪器
试剂：ＴＲＩＺＯＬ ＬＳ（英伟创津）；ｍｉＲＮＡ的ＲＴ ｑＰＣＲ试剂为丹麦ＥＸＩＱＯＮ的逆转录、引物和荧光定量ＰＣＲ试剂盒，包括ｍｉＲＣＵＲＹＬＮＡＴＭＵｎｉｖｅｒｓａｌｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ、ｍｉＲＣＵＲＹＬＮＡＴＭＰＣＲＰｒｉｍｅｒ、ＥｘｉＬＥＮＴＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎｍａｓｔｅｒｍｉｘ；ｍＲＮＡ荧光定量
ＰＣＲ试剂为Ｔａｋａｒａ，包括ＲＮａｓｅＦｒｅｅｄＨ
２
０、ＲＯＸＲｅｆｅｒｅｎｃｅＤｙｅＩＩ、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐＴＭＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔ
、ＳＹＢＲ ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭ、ｍＲＮＡｆｏｒｗａｒｄａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒｓ。仪器：分光光度计（ＡＭＥＲＳＨＡＭＵｌＲＴＲＯ ＳＰＥＣ２００１）；Ｂｉｏ Ｒａｄ电泳仪（英国，Ｂｉｏ Ｔｅｋ）；凝胶成像系统（ＧＥＮＥＧＥＮＩＵＳＧＥＬＤＯＣ２０００）；普通ＰＣＲ仪（美国，Ｂｉｏ Ｒａｄ）；荧光定量ＰＣＲ仪（美国，ＡＢＩ，ＶｉｉＡ７）；低温高速离心机（美国，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）等。引物序列如下：ｈｓａ ｍｉＲ ２０３ａ：ＭＩＭＡＴ０００００８９，ＧＵＧＡＡＡＵＧＵＵＵＡＧＧＡＣＣＡＣＵＡＧ（５’ ３）；ＧＡＰＤＨ：Ｆｏｒｗａｒｄ：ＣＡＧＴＡＧＡＧＧＣＡＧＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＴ；Ｒｅ ｖｅｒｓｅ：ＣＡＴＧＧＧＴＧＴＧＡＡＣＣＡＴＧＡＧＡＡＧＴＡ；ＡＴＭ：Ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＣＴＡＴＣＣＣＡＡＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＧＡ；Ｒｅ ｖｅｒｓｅ：ＴＴＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＣＴＧＧＣＡＡＡＣ。
１．３ 总ＲＮＡ抽提
按照试剂操作说明书操作，使用ＴＲＩＺＯＬ ＬＳ从乳腺癌和癌旁正常组织中提取总ＲＮＡ。使用分光
光度计检测ＲＮＡ含量、浓度和ＯＤ
２６０
／ＯＤ
２８０
值
（ＯＤ
２６０
／ＯＤ
２８０
值在１．９～２．１，说明纯度好），将纯度好的样品分装标记存放 ８０℃冰箱保存备用。使用电泳仪和凝胶成像系统进行ＲＮＡ鉴定。
１．４ ｍｉＲＮＡ的ＲＴ ｑＰＣＲ
按照ＥＸＩＱＯＮ的逆转录、引物和荧光定量ＰＣＲ试剂盒的操作说明书进行操作，选择１０μｌ的反应体系。逆转录在普通ＰＣＲ仪上进行，设置参数：输入２０μｍｏｌ／Ｌ；４２℃６０ｍｉｎ；９５℃５ｍｉｎ；４℃３０ｍｉｎ ２ｈ。将得到的ｃＤＮＡ存于 ２０℃备用。荧光定量ＰＣＲ检测在荧
光定量ＰＣＲ仪和专用的反应管中进行，设置参数：输入２０μｍｏｌ／Ｌ；９５℃１０ｍｉｎ预变性；４０个循环重复：９５℃１０ｓ；６０℃１ｍｉｎ；ｒａｍｐ ｒａｔｅ１．６℃／ｓ，即降温速度；６５ ９８℃，１℃／６ｓ，即溶解曲线。以Ｕ６为内参。手动调节基线得出ＣＴ值，复３孔取平均ＣＴ值用于计算相对表达量，采用２ △△ＣＴ公式计算。
１．５ ｍＲＮＡ荧光定量ＰＣＲ
按照ＴＡＫＡＲＡ的逆转录、引物和荧光定量ＰＣＲ试剂盒操作说明书进行操作，选择２０μｌ的反应体系。逆转录在普通ＰＣＲ仪上进行，设置参数：输入１０μｍｏｌ／Ｌ；３７℃１５ｍｉｎ；８５℃５ｓ；４℃３０ｍｉｎ ２ｈ。荧光定量ＰＣＲ在ＶｉｉＡ７（ＡＢＩ）荧光定量ＰＣＲ仪和专用的反应管中进行，设置参数：输入２０μｍｏｌ／Ｌ；９５℃３０ｓ预变性；４０个循环重复：９５℃３ｓ；６０℃３０ｓ；ＭｅｌｔＣｕｒｖｅｓｔａｇｅ（仪器默认，勿改）：９５℃１５ｓ；６０℃１ｍｉｎ。以ＧＡＰＤＨ为内参，数据处理同上面的
１
０
６
中国应用生理学杂志，２０２０，３６（６）
ｍｉＲＮＡ。
１．６ 统计学处理
采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行统计学分析。正态分布的计量资料采用均数±标准差（珋ｘ±ｓ）表示，两组均数比较采用独立或配对ｔ检验。计数资料用百分比（％）表示，组间比较采用χ２检验。ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ在乳腺癌组织中表达的相关性分析采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关分析，ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ与病理学特征分布的相关性分析采用χ２检验或秩和检验。
２ 结果
２．１ ｍｉＲ ２０３ａ与ＡＭＴ在乳腺癌及癌旁组织中的表达
ｍｉＲ ２０３ａ在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常组织，ＡＴＭ在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常组织，两组比较均有显著差异（Ｐ＜０．０１，表１）。
Ｔａｂ．１ ＭｉＲ ２０３ａａｎｄＡＴＭｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｕｍｏｒａｎｄａｄｊａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３０）
ＧｒｏｕｐｍｉＲ ２０３ａＡＭＴ
Ｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅ０．０６６±０．０３０１．０２３±０．１２８
Ｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅ０．１１３±０．０３２ ０．５７７±０．１９４
Ｐ＜０．０１ｖｓｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅ
２．２ ｍｉＲ ２０３ａ与ＡＴＭ在乳腺癌组织中的相关性采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关分析表明，ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ在乳腺癌组织中的表达呈负相关（ｒ＝ ０．８４７，Ｐ＝０．０００）。２．３ ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ分别与乳腺癌病理特征相关性分析
根据ｍｉＲ ２０３ａ相对表达量的中位数（０．１１４）将乳腺癌组分为低表达组（＜０．１１４）和高表达组（≥０．１１４），根据ＡＴＭ相对表达量的中位数（０．５６５）将乳腺癌组分为低表达组（＜０．５６５）和高表达组（≥０．５６５），结果表明ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ表达与淋巴结是否转移与不同临床分期的相关分析均显著相关（Ｐ＜０．０５），而与诊断时的年龄均无相关（Ｐ＞０．０５，表２）。
２．４ ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ在乳腺癌淋巴结是否转移中的表达差异
ｍｉＲ ２０３ａ在淋巴结未转移组中的表达高于已转移组，ＡＴＭ在淋巴结已转移组中的表达显著高于未转移组，两组比较均有显著差异（Ｐ＜０．０５，表３）。
３ 讨论
乳腺癌是目前我国大中城市女性发病率最高的癌症。国内外学者均致力于研究乳腺癌的发病机制尤其是分子层面如ｍｉＲＮＡ及其靶基因调控在乳腺癌发生发展中可能发生的作用，结果发现ｍｉＲ ２０３ａ及其靶基因ＡＴＭ有可能参与其中。ｍｉＲ ２０３ａ参与多种肿瘤的生物学功能，包括增殖、转移和浸润等［４］，ＡＴＭ主要参与ＤＮＡ双链断裂引起的损伤修复反应，在维持基因组稳定性方面起到重要作
Ｔａｂ．２ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｍｉｒ ２０３ａ，ＡＴＭａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
Ｖａｒｉａｂｌｅｓｎ
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ ２０３ａmirna靶基因分析
Ｌｏｗ（ｎ＝１２）Ｈｉｇｈ（ｎ＝１８）
Ｐ
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＴＭ
Ｌｏｗ（ｎ＝１６）Ｈｉｇｈ（ｎ＝１４）
Ｐ
Ａｇｅａｔｄｉａｇｎｏｓｉｓ（ｙｅａｒｓ）０．８２１０．４５０３０ ３９８３５４４
４０ ４９１３５８６７
５０ ５９８３５６２
≥６０１１００１
Ｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓ０．００７ ０．００９ ＮＯ１４２１２１１３
ＹＥＳ１６１０６５１１
Ｓｔａｇｅ０．０００ ０．００１ Ｉ１４１１３１２２
ＩＩ１３８５４９
ＩＩＩ３３００３
Ｐ＜０．０１ｖｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ ２０３ａａｎｄＡＴＭ
Ｔａｂ．３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍｉｒ ２０３ａａｎｄＡＴＭｉｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅ ｔａｓｔａｓｉｓｏｒｗｉｔｈｏｕｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（珋ｘ±ｓ）
ＧｒｏｕｐｎｍｉＲ ２０３ａＡＭＴ
Ｎｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ１４０．１２７±０．０２７０．４２５±０．１１７
Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ１６０．１０１±０．０３２ ０．７１０±０．１４３
Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１ｖｓｎｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
用［９］。文献报道，ｍｉＲ ２０３ａ在乳腺癌组织中高表达［７，１７］，ＡＴＭ基因在散发性乳腺癌中呈低表达［１３，１８］，ｍｉＲ ２０３的高表达和ＡＴＭ的低表达呈显著负相关［１３］。有研究已证实，在胃癌中ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ是直接的靶基因调节关系［２］。因此，本研究推测在乳腺癌中ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ也很可能是直接的靶基因调节关系。
ｍｉＲ ２０３ａ与ＡＭＴ在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况：本研究结果显示，ｍｉＲ ２０３ａ在乳腺癌组织
２
０
６ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（６）
中的表达显著高于癌旁正常组织，ＡＴＭ在乳腺癌组织中表达显著低于癌旁正常组织，二者呈显著负相关，验证了上述推测，提示ｍｉＲ ２０３ａ的高表达和ＡＴＭ的低表达共同参与了乳腺癌的发生发展，ｍｉＲ ２０３ａ很可能通过负性调节抑制或沉默其靶基因 ＡＴＭ基因的表达，在乳腺癌分子层面的发病机制中发挥重要调节作用，结论与文献报道相近［７，１７］。
ｍｉＲ ２０３ａ与ＡＴＭ在乳腺癌组织中的相关性：乳腺癌转移是影响乳腺癌诊断、、预后及复发的关键因素，因此对乳腺肿瘤细胞的侵袭和迁移方面的机制研究是乳腺癌发病机制研究中的重中之重。研究表明，乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ表达水平与部分临床病理特征如诊断年龄、有无淋巴结转移、肿瘤类别和肿瘤直径等因素有关［７］，ｍｉＲ ２０３ａ在侵袭性小叶癌中随着分期的增加而显著下调［７］，ＡＴＭ蛋白的表达随着乳腺癌临床分期的增加而增强［１９］。本研究结果显示乳
腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ的表达高低与不同临床分期与淋巴结是否转移显著相关，随着乳腺癌临床分期越高，淋巴结发生转移，ｍｉＲ ２０３ａ高表达者占总人数的百分率逐渐下降，ＡＴＭ高表达者占总人数的百分率逐渐升高，提示ｍｉＲ ２０３ａ和ＡＴＭ可能参与了乳腺癌的发展进程，随着病程进展，淋巴结发生转移，二者的表达水平发生了改变。有研究发现在无淋巴结转移的乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ高表达［７］，在乳腺癌非转移性细胞系中ｍｉＲ ２０３上调，在转移性细胞系中ｍｉＲ ２０３显著下调［２０］。另一项研究发现，随着乳腺癌迁移侵袭能力的增强，ｐ ＡＴＭ表达量相应增加，晚期淋巴结转移的乳腺肿瘤组织中ＡＴＭ激酶的表达非常活跃［２１］，当ＡＴＭ基因被敲除或抑制后，乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力明显下降［１９］。本研究结果发现ｍｉＲ ２０３ａ在淋巴结未转移组中的表达显著高于已转移组，ＡＴＭ在淋巴结已转移组中的表达显著高于未转移组，证实了作者前文推断且与上述学者的研究结果一致，提示在乳腺癌中晚期，可能通过表观遗传机制下调ｍｉＲ ２０３ａ上调ＡＴＭ基因表达，促进乳腺癌细胞侵袭迁移和淋巴结转移，推动病程进展。由上述结果推测，ｍｉＲ ２０３ａ的过表达通过靶基因负性调节关系沉默或抑制ＡＴＭ基因的表达在乳腺癌早期其实际上很可能是一种调节肿瘤细胞增殖、转移和侵袭性的保护机制，随着病程进展，很可能通过表观遗传机制抑制ｍｉＲ ２０３ａ的表达且增强ＡＴＭ基因的表达促进乳腺癌细胞的淋巴结转移。
综上所述，ｍｉＲ ２０３ａ及其靶基因ＡＴＭ均可能参与了乳腺癌的发生发展过程，在乳腺癌早期ｍ
ｉＲ ２０３ａ过表达抑制其靶基因ＡＴＭ的表达很可能是一种调节肿瘤细胞增殖、转移和侵袭性的保护机制，到中晚期下调ｍｉＲ ２０３ａ上调ＡＴＭ基因，可能参与淋巴结转移。目前国内有关乳腺癌组织中ｍｉＲ ２０３ａ及其靶基因ＡＴＭ的表达及其在淋巴结转移方面的机制研究鲜有报道，本研究样本量较少，需要大样本多中心试验，并在基因层面进行进一步研究确定，为乳腺癌的发病机制尤其是淋巴结转移机制提供更多医学依据。
【参考文献】
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２．专著文献：［序号］作者．题名［文献类型标志］（Ｍ图书、Ｓ标准、Ｃ会议论文集、Ｄ学位论文等）．版本项（第１版可省略）．出版地：出版者，出版年：引文页码．
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３．专利文献：［序号］专利申请者或所有者．专利题名：专利国别，专利号［Ｐ］．公告日期或公开日期．例：［１］西安电子科技大学．光折变自适应光外差探测方法：中国，０１２８７７７．２［Ｐ］．２００２ ０３ ０６．
本刊编辑部
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０６ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（６）
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