一种肝纤维化的中药复方制剂及其制备方法

1.本发明涉及一种肝纤维化的中药复方制剂及其制备方法，属中药制药领域。

背景技术：

2.肝纤维化是慢性肝病的共同病理学基础，它既是病毒性肝炎、酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝病、药源性肝病等全球范围内常见高发的慢性肝病的共同病理过程，也是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段。随着对肝纤维化发病机制的不断深入，认为肝纤维化是可以被逆转的过程，因此，肝纤维化对肝硬化及肝癌防治具有很大意义。现有研究表明，不同病因引起的肝纤维化的核心环节是肝星状细胞(hepatic stellate cell，hsc)活化，转化为肌成纤维细胞，导致细胞外基质(extracellular matrix，ecm)过度沉积肝内从而破坏肝组织结构和肝脏生理功能。然而，目前尚无有效的抗肝纤维化西药，如何有效肝纤维化依旧是一项医学重大难题。中医药在肝纤维化方面有着显著的特和丰富的经验，早在先秦时期就有一定认识。中医理论表明，肝纤维化常见证候有湿热瘀阻、瘀血互结等，归肝、脾、胃经，中药结合辨证论治能够改善症状，提高患者的生存质量。因此，研发安全有效的抗肝纤维化中药具有极其重大的临床意义。
3.为解决上述问题，本发明旨在提供一种可用来肝纤维化的中药复方及其制备方法。

技术实现要素：

4.本发明的目的在于充分发挥中医药在肝纤维化方面的优势，提供一种肝纤维化的中药复方制剂，具有缓解肝纤维化症状，清热燥湿、活血散瘀的功效。本发明的另一目的在于提供该中药复方制剂的制备方法。
5.本发明所述一种肝纤维化的中药复方制剂，由以下重量配比的原料药制成：黄芩20～30份、虎刺10～20份、毕澄茄8～12份、五蕊寄生3～7份。
6.所述一种肝纤维化的中药复方制剂，由以下重量配比的原料药制成：黄芩25份，虎刺15份，毕澄茄10份，五蕊寄生5份。
7.所述一种肝纤维化的中药复方制剂，制备方法为：将所述原料药炮制预处理并提取后添加适宜的辅料，用常规的制备方法制成口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或蜜丸等。
8.所述一种肝纤维化的中药复方制剂，制备方法为：取黄芩、虎刺、毕澄茄、五蕊寄生，将上述原料除去杂质，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h。合并滤液，减压回收乙醇至尽。减压浓缩后，真空干燥，条件为：温度为60-70℃，压力为0.08mpa，粉碎成细粉，加淀粉，制粒，压片即得片剂。
9.所述一种肝纤维化的中药复方制剂在制备肝纤维化药物中的应用。
10.本发明所述中药复方制剂来源于南京中医药大学科研配方，从黄芩、虎刺、毕澄茄、五蕊寄生四种传统中草药通过严格标准筛选而来，具有配伍用药、整体调治、标本兼治等特点，对肝纤维化疾病具有明显的疗效。肝纤维化的中医病机以正气不足为内在因素，湿
热困阻、肝郁脾虚为病机关键，肝郁脾虚、气滞血瘀贯穿肝纤维化发病的全过程。如果肝病的急性期未彻底治愈，湿热邪毒未能根除，余邪未尽，蕴积于肝胆脾胃，导致脏腑功能失调，肝郁脾虚，肝木横逆犯脾，运化失职，痰浊内生，日久化热。因此，在肝纤维化的形成和发展过程中，常常表现出一派湿热的病理变化。本发明基于这一病证特点，运用清热化湿、健脾调肝的临证方法，制备一种慢性肝病的中药复方制剂。本发明在使用清热化湿，活血化瘀药物基础上，加用益气健脾、养阴柔肝、健胃止泻之品，在重视补益扶正法之时，同时关注调补脏腑。
11.君药：黄芩，是唇形科黄芩属多年生草本植物，性寒，味苦，平。归肺、心、肝、胆、大肠经。清热泻火，燥湿解毒，主治肺热咳嗽、高热神昏、肝火头痛、目赤肿痛、湿热黄疸、泻痢、热淋等。《本草经疏》记载：“黄芩，其性清肃，所以除邪，味苦所以燥湿，阴寒所以胜热，故主诸热，诸热者邪热与湿热也。”黄芩作为君药，可清热燥湿，用治肝郁脾虚，对肝纤维化起到主要的作用。
12.臣药：虎刺，味微苦，性平，无毒。归其功效为祛风利湿，活血消肿。主治风湿痹痛、黄疸、跌打损伤、痰饮咳嗽等。虎刺在我国多地草药手册及《中药大辞典》中均有收录记载，《浙江名家草药》记载：“根及花：活血，利关节，治风气。”《江西民间草药验方》中有以虎刺治黄疸、急性肝炎的配方。《福建药物志》中记载：“根：健脾益肾，化痰止咳。主治咳嗽、黄疸、肝脾肿大、水肿、风湿关节痛。”现代研究也有发现虎刺提取物可对ccl4致肝损伤起保护作用。再者，血瘀存在于慢性肝炎肝纤维化的全部阶段是普遍认知，虎刺可从活血化瘀的角度减缓肝纤维化。虎刺作为臣药，辅助君药祛风利湿，二者相须为用，可加强疗效。且虎刺有风湿关节疼痛和咳嗽的功效，有未病先防之义。
13.佐药：毕澄茄，味辛，性温，无毒。归脾、胃、肾、膀胱经。具有温中降气、健胃消食的功效。《本草大明》记载：“毕澄茄治一切冷气痰澼，并吐泻，肚腹痛，肾气膀胱冷。”时珍所言：毕澄茄暖脾胃，止呕吐哕逆；主要用于温胃散寒，可脘腹冷痛，寒湿郁滞，小便混浊，不进饮食。另据考证，刘松庵老先生在温通疏肝方中曾使用过毕澄茄，可见毕澄茄亦有疏肝理气的功效。所选君药黄芩，脾胃虚寒、食少便溏者忌服，选用毕澄茄为佐药，既可助患者健脾养胃使君药发挥良效，又可辅佐君、臣两药保肝。
14.使药：五蕊寄生，味苦、甘，性平。归肝、肾、脾经。具有祛风湿、补肝肾的功效。《中药大辞典》中记载，五蕊寄生具有祛风通络、养血平肝、健脾化湿的功效，主治风湿麻痹、脾虚食滞、腹泻、湿疹等。五蕊寄生养血平肝的作用可从活血的角度肝纤维化。且此方中，君药黄芩不适宜于脾胃虚寒的患者使用，五蕊寄生可健脾化湿，协同发挥祛风除湿的作用，辅助黄芩加强药效并健脾保肝。五蕊寄生性平，和中缓急，调和诸药，用以为使。
15.总之，该中药复方制剂依托于中医药传统理论，“辨证论治”与“整体观念”是本制剂研发的重要理论基础和有效的物质来源，同时也是本发明的独特优势。本制剂不仅安全无毒，而且肝纤维化效果显著，本制剂的研发将会给肝纤维化疾病患者带来福祉，同时给相关企业带来巨大的经济效益，也将推动相关产业的迅速发展。
附图说明
16.图1为本发明对纤维化小鼠血清肝损伤指标的影响(血清alt水平)
17.图2为本发明对纤维化小鼠血清肝损伤指标的影响(血清ast水平)
18.图3为本发明对纤维化小鼠血清肝损伤指标的影响(血清alp水平)
19.图4为本发明对纤维化小鼠血清肝损伤指标的影响(血清hyp水平)
20.图5为本发明对纤维化小鼠血清肝纤维化指标的影响(血清ln水平)
21.图6为本发明对纤维化小鼠血清肝纤维化指标的影响(血清ha水平)
22.图7为本发明对纤维化小鼠血清肝纤维化指标的影响(血清iv-c水平)
23.图8为本发明对纤维化小鼠血清肝纤维化指标的影响(血清pc-iii水平)
24.图9为本发明对肝纤维化小鼠肝脏结构的影响
25.图10为本发明对肝纤维化小鼠肝组织中胶原沉积的影响
具体实施方式
26.下面通过实施例进一步说明本发明所述中药复方制剂的制备以及肝纤维化的功效。
27.实施例1：口服液制备
28.取黄芩25g，虎刺15g，毕澄茄10g，五蕊寄生5g，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏真空干燥(条件为：温度为70℃，压力为0.08mpa)至相对密度1.05
±
0.02(温度为60℃)，加入4％甜叶菊苷，搅匀，高速离心除杂净化，冷却静置24h，取上清液，纸浆饼过滤后，浓缩至相对密度1.15～1.20(温度为60℃)，分装，灭菌，即得。
29.实施例2：胶囊剂制备
30.取黄芩20g，虎刺20g，毕澄茄8g，五蕊寄生7g，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏真空干燥(温度为60℃，压力为0.08mpa)，粉碎成细粉，加乙醇制粒，干燥，装入胶囊，即得。
31.实施例3：颗粒剂制备
32.取黄芩30g，虎刺10g，毕澄茄12g，五蕊寄生3g，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏真空干燥(温度为70℃，压力为0.08mpa)至相对密度1.05
±
0.02(温度为60℃)，高速离心除杂净化，冷却静置24h，取上清液，纸浆饼过滤后，浓缩至相对密度1.15～1.20(温度为60℃)，加入4％甜叶菊苷，搅匀，喷雾干燥，干式制粒，以铝塑复合膜分装，即得。
33.实施例4：片剂制备
34.取黄芩25g，虎刺15g，毕澄茄10g，五蕊寄生5g，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏真空干燥(温度为60℃，压力为0.08mpa)，粉碎成细粉，加淀粉，制粒，压片即得片剂。
35.实施例5：蜜丸制备
36.取黄芩25g，虎刺15g，毕澄茄10g，五蕊寄生5g，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h。合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏真空干燥(温度为60℃，压力为0.08mpa)，粉碎成细粉，加炼制蜂蜜，将蜂蜜和药粉按照1.5:1的比例进行搅拌，制备成蜜丸。
37.本发明中虎刺(学名：damnacanthus indicus gaertn.)是茜草科虎刺属植物，毕澄茄属木姜子属，拉丁学名为litsea mollis hemsl；五蕊寄生属五蕊寄生属，拉丁学名为
dendrophthoe pentandra(l.)miq，其余药材符合药典标准。
38.实施例6：本发明肝纤维化药理作用研究
39.为验证上述中药复方组合物的活性，采用上述实施例1制得的中药复方组合物作用于小鼠。
40.6.1动物模型制备：spf级雄性icr小鼠(8周龄)，体重20～25g，随机分为：正常对照组，模型组，中药复方制剂低、中、高剂量组(300mg/kg、600mg/kg、1200mg/kg)。实验前将小鼠送至glp动物中心进行一周的适应性饲养，小鼠饲料符合中国标准(lad1000)，小鼠饮水满足《实验动物环境与设施》(gb14925-2010)要求。适应性饲养中，给予小鼠14h光照与10h黑夜标准光照周期，室温控制在20
±
2℃之间，相对湿度维持在40
±
5％之间，噪音控制在60分贝以下，氨浓度维持在14ppm以下，通风换气8～12次/h。适应性饲养结束后将ccl4与橄榄油按体积1:10(v/v)配制成10％ccl4溶液，腹腔注射小鼠(0.05ml/10g体重)，每周两次，连续六周，建立肝纤维化小鼠模型。
41.6.2给药方案：根据实施例1所述制备300mg/kg、600mg/kg、1200mg/kg中药复方制剂口服液用于药物。除正常对照组之外，其余4组小鼠按照0.05ml/10g剂量腹腔注射10％ccl4溶液；正常对照组小鼠在相同时间点、相似位置、腹腔注射相同体积橄榄油作为空白对照。在注射10％ccl4溶液六周之后，中药复方制剂低、中、高剂量组分别按照300mg/kg、600mg/kg、1200mg/kg剂量灌胃给药，空白对照组给予生理盐水灌胃。本发明所述中药复方制剂，每天1次，持续4周。所有实验结束之后，严格按照实验动物处死(鼠、兔类)标准操作规程(sop)，剖开腹腔分离肝脏，使用相机采集每只小鼠完整肝脏图片，利用电子天平对每个肝脏进行称重并记录。收集的血液样本室温静置2h后，使用离心机于3500r/min下离心15min，吸取上清，-20℃条件下保存，用于后续血清学指标检测。每个小鼠肝脏选取一小部分固定于10％福尔马林溶液用于后续的组织病理学检查。
42.6.3实验结果
43.6.3.1中药复方制剂对纤维化小鼠血清肝损伤指标的影响
44.我们利用生化仪对纤维化小鼠血清肝损伤指标进行了检测。结果显示：正常对照组小鼠血清alt水平是208
±
5.1u/l，ast水平是228
±
11.6u/l，alp水平是219
±
27.2u/l，hyp水平是24
±
3.1u/l，肝损伤指标均处于较低水平；相比较，模型组小鼠血清alt水平是627
±
37.6u/l，ast水平是370
±
30.0u/l，alp水平是372
±
24.9u/l，hyp水平是91
±
5.3u/l，肝损伤指标均显著升高；中药复方制剂能够剂量依赖性地降低纤维化小鼠血清肝损伤指标alt、ast、alp、hyp水平，高剂量组小鼠血清alt水平是359
±
43.7u/l，ast水平是252
±
35.1u/l，alp水平是221
±
4.6u/l，hyp水平是38
±
4.9u/l，提示中药复方制剂能够有效改善肝损伤(见表1及图1～4)。
45.表1：各组小鼠血清肝损伤指标alt、ast、alp、hyp检测结果(x
±
s)
[0046][0047]
(与正常对照组相比，***p《0.001；与模型组相比
#
p《0.05，
##
p《0.001)
[0048]
6.3.2中药复方制剂对纤维化小鼠血清肝纤维化指标的影响
[0049]
我们利用试剂盒对纤维化小鼠血清肝纤维化标进行了检测。结果显示：正常对照组小鼠血清ln水平是52
±
10.0μg/l，ha水平是69
±
15.1μg/l，iv-c水平是58
±
21.8μg/l，pc-iii水平是53
±
20.7μg/l，肝纤维化指标均处于较低水平；相比较，模型组小鼠血清ln水平是170
±
5.1μg/l，ha水平是179
±
37.8μg/l，iv-c水平是238
±
6.6μg/l，pc-iii水平是250
±
22.9μg/l，肝纤维化指标均显著升高；中药复方制剂能够剂量依赖性地降低纤维化小鼠血清肝纤维化指标ln、ha、iv-c、pc-iii水平，高剂量组小鼠血清ln水平是80
±
13.7μg/l，ha水平是91
±
25.2μg/l，iv-c水平是115
±
19.8μg/l，pc-iii水平是99
±
18.8μg/l，提示中药复方制剂能够有效改善肝纤维化病理损伤(见表2及图5～8)。
[0050]
表2：各组小鼠血清肝纤维化指标ln、ha、iv-c、pc-iii检测结果(x
±
s)
[0051][0052]
(与正常对照组相比，***p《0.001；与模型组相比，
#
p《0.05，
##
p《0.01，
###
p《0.001)
[0053]
6.3.3中药复方制剂对肝纤维化小鼠肝脏结构的影响
[0054]
经肉眼观察可以发现，正常组小鼠肝脏颜鲜红、质地光泽、无组织病变现象；而模型组小鼠肝脏颜暗沉发白、有严重的纤维化组织病变；中药复方制剂能够改善ccl4致小鼠肝脏组织的病变，且其改善程度呈现剂量依赖性，即中药复方制剂给药剂量越高，其对肝组织纤维化病变的改善越显著。再对各组小鼠肝脏进行组织病理学检查，he染结果显示，正常对照组小鼠肝脏肝小叶结构完整，肝细胞分布整齐，无炎细胞浸润现象；而模型组小鼠肝脏出现明显的假小叶结构，肝细胞分布紊乱，纤维结缔组织大量增生，炎细胞浸润严重；中药复方制剂组随给药剂量增加，小鼠肝脏中假小叶逐渐减少至消失，肝细胞分布逐渐趋于整齐，纤维结缔组织逐渐减少，炎细胞浸润趋近于无，证明中药复方制剂能够显著
改善肝纤维化小鼠的肝脏结构(见图9)。
[0055]
6.3.4中药复方制剂对肝纤维化小鼠肝组织中胶原沉积的影响
[0056]
我们使用masson染和sirius red染考察中药复方制剂对纤维化肝脏胶原沉积的改善作用。将小鼠肝组织用10％福尔马林溶液固定，在通风橱中用手术刀小心仔细地分离适宜大小组织块，放入脱水机依次梯度酒精进行脱水，将脱水后的组织块放入包埋机进行石蜡包埋，接着将蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。用载玻片将组织固定，并放进60℃烘箱内烤片，待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。在masson染中，将肝组织用小鼠肝组织切片在bouin或zenker溶液固定过夜，流水冲洗至无；天青石蓝染5min；苏木素染5～10min；1％稀盐酸分化；流水蓝化；丽春红酸性品红液染5～8min；蒸馏水冲洗；1％磷钼酸溶液染1～3min；直接用苯胺蓝或亮绿染5min；水速洗，置烘箱烘干；二甲苯透明，中性树胶封固；光学显微镜下观察并拍照，染后胶原呈现蓝。在sirius red染中，用小鼠肝组织以10％中性福尔马林缓冲溶液固定，常规脱水包埋切片；天青石蓝溶液染10min，蒸馏水清洗；天狼星红饱和染30min；无水乙醇直接分化与脱水；二甲苯透明中性树胶封固；光学显微镜下观察并拍照，染后胶原呈现红。结果显示，正常组小鼠肝脏基本没有胶原沉积，而模型组小鼠肝脏胶原沉积严重，不同剂量中药复方制剂能够不同程度地减轻胶原沉积，提示中药复方制剂能够剂量依赖性地减轻纤维化肝脏胶原沉积(见图10)。
[0057]
综上所述，我们发现本发明所述中药复方制剂可以显著降低肝纤维化模型小鼠血清肝损伤指标水平，减轻纤维化肝脏胶原沉积，改善纤维化肝脏病理损伤。
[0058]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

技术特征：

1.一种肝纤维化的复方中药制剂，其特征在于，由下列重量配比的原料药制成：黄芩20～30份、虎刺10～20份、毕澄茄8～12份、五蕊寄生3～7份。2.如权利要求1所述肝纤维化的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量配比的原料药制成：黄芩25份，虎刺15份，毕澄茄10份，五蕊寄生5份。3.如权利要求1或2所述肝纤维化的中药复方制剂，其特征在于，制备方法为：将所述原料药炮制预处理并提取后添加适宜的辅料，用常规的制备方法制成口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或蜜丸。4.如权利要求3所述肝纤维化的中药复方制剂，其特征在于，制备方法为：取黄芩、虎刺、毕澄茄、五蕊寄生，将上述原料除去杂质，于沸水中煮10min，取出，闷透，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩后浸膏，真空干燥，条件为：温度为60-70℃，压力为0.08mpa，粉碎成细粉，加淀粉，制粒，压片即得片剂。5.如权利要求1所述肝纤维化的中药复方制剂在制备肝纤维化药物中的应用。

技术总结

本发明公开了一种肝纤维化的中药复方制剂，它是由下列重量配比的原料制成：黄芩20～30份、虎刺10～20份、毕澄茄10～12份、五蕊寄生3～7份。其制备方法是：将上述原料药分别进行预处理炮制后，加10倍量50％乙醇，加热回流提取3次，每次1h；合并滤液，减压回收乙醇，浸膏60℃真空干燥；加入不同剂型相应的适量辅料，用常规的制剂方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液剂或蜜丸等。本发明所述中药复方制剂经药效学试验表明对肝纤维化具有良好效果，具有较好的市场推广价值和潜力。具有较好的市场推广价值和潜力。具有较好的市场推广价值和潜力。