苏 颖，李 竞
（西南大学药学院，重庆４００７１６
）摘 要：目的：建立人工蛹虫草药材的高效液相谱指纹图谱。方法：收集１１个不同产地的蛹虫草样
品，用ＨＰＬＣ法测定谱图，采用国家药典委员会颁布的“中药谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版”软件生成指纹图谱，并对其进行相似度评价。结果：所建立的指纹图谱检测方法操作简单，重现性、稳定性和精密度均良好，得到具有１４个共有峰的指纹图谱，各批样品图谱与对照指纹图谱的相似度均在０．９以上。结论：建立了准确、快速、简便的指纹图谱检测方法，所得到的指纹图谱适用于蛹虫草质量控制。
关键词：人工蛹虫草；ＨＰＬＣ；
指纹图谱中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０３－００１０－
０２收稿日期：２０１１－１１－
２８作者简介：苏颖（１９８５－）
，女，西南大学药学院硕士研究生，研究方向为化学与生物药物分析。通讯作者：李竞，女，西南大学药学院副教授，研究方向化学与生物药物分析。
蛹虫草，
又名蚕蛹虫草、北冬虫夏草、北虫草等，是国内外公认的食药用真菌。它具有补肺益肾、
抗疲劳耐缺氧、调节免疫功能、辅助抗肿瘤等作用［
１］
。蛹虫草中的主要活性成分为核苷类物质，包括虫草素（３＇－脱氧腺苷）、腺苷、尿苷、腺嘌呤、尿嘧啶、次黄嘌呤等，其中，虫草素是蛹虫草最具特的活性成分，它是第一个从蛹虫草中分离得到的核苷类抗生素，目前已被研究证实的药理活性有抗菌、抗病毒、干扰肿瘤细胞ＤＮＡ及ＲＮＡ合成等等。虫草素在蛹虫草中的
含量一般是冬虫夏草的１．５～１．７倍［２－５］
。蛹虫草因其易于
规模化人工栽培、
蚕蛹虫草主要药用成分与冬虫夏草相近等优势成为冬虫夏草的优良替代品，可以在一定程度上解决野生冬虫夏草资源稀缺的状况。目前蛹虫草的人工栽培技术已经成熟，
进入产业化生产阶段，但市场上的蛹虫草质量参差不齐，甚至常有假冒伪劣现象发生。中国药典至今也未收载蛹虫草质量控制标准。因此，建立蛹虫草质量标准，控制蛹虫草的品质，规范蛹虫草生产方式势在必行。指纹图谱可用于中药基源、品种和提取工艺的鉴别，在评价中药质量的均一性和稳定性方面发挥作用，是中药质量控制的有效手段。本实验利用１０批不同产地的人工栽培蛹虫草，建立起ＨＰＬＣ人工蛹虫草的指纹图谱， 为人工蛹虫草质量控制提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 样品来源
１０批蛹虫草样品采自中国６个省份１０个城市：
广东新会市、清远市，四川甘孜州、绵阳市，青海西宁市，福建三明市，辽宁大连市、盘锦市，山东菏泽市、泰安市。按以上列出
的城市顺序把蛹虫草样品编为Ｓ１→Ｓ１０。所有药材经西南大学药学院李竞副教授鉴定，药材粉碎后过５０目筛，５０℃鼓风干燥后，密闭遮光保存备用。
１．１．１ 设备与试剂
岛津高效液相谱仪，Ｅｃｏｓｉｌ ＡＱ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μ
ｍ）不锈钢柱，ＫＱ－３２００ＤＢ超声波清洗仪，ＤＥＮＶＥＲ电子分析天平，ＰＵＲＥＬＡＢ纯水系统，甲醇、乙腈均为谱纯（天津四友公司）。虫草素和腺苷对照品购自中国药品生物制品检定所。
１．２ 方法１．２．１ 供试品溶液的制备
精密称取蛹虫草粉末０．５ｇ于具塞锥形瓶中，
称定质量，精密加入２０％甲醇１０ｍＬ，超声提取（频率６０ｋＨｚ，温度４０℃）３０ｍｉｎ，放冷，再称定质量，用２０％甲醇补足减失重
量，摇匀，滤过，精密量取续滤液５ｍＬ，用２０％甲醇溶液定容至５０ｍＬ，０．２２μｍ滤膜滤过，取续滤液４℃保存作为供试品溶液。
１．２．２ 对照品溶液的制备
称取虫草素和腺苷标准品各２ｍｇ于１０ｍＬ容量瓶中，用２０％甲醇定容至刻度，摇匀，用０．２２μ
ｍ微孔滤膜滤过，备用［
９］
。１．２．３ 谱条件
谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μ
ｍ）；流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长２６０ｎｍ，进样体积２０μ
Ｌ；柱温３０℃。流动相Ａ：甲醇，流动相Ｂ：超纯水。梯度洗脱程序：０ｍｉｎ（９０％Ｂ）→５ｍｉｎ（８５％Ｂ）→１０ｍｉｎ（８０％Ｂ）→２０ｍｉｎ（７３％Ｂ）→
２４ｍｉｎ（７１％Ｂ）。—
０１
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１．２．４数据分析
由“中药谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版”
（国家药典委员会）完成。
２ 结果与分析
２．１ 蛹虫草样品的ＨＰＬＣ谱分析
分析显示，得到的谱图基线平稳、响应值高、分离度好，共检测到１４个信号较强的峰，全部出峰时间在３０ｍｉｎ
以内，符合《中药注射剂指纹图谱的技术要求》（暂行）［１０］
的
要求。通过对照品保留时间比对，确定了图谱中的１２号峰为腺苷，１３号峰为虫草素，
见图１
。图１ 对照品与蛹虫草谱
注：Ｓ１：虫草素标准品－ｃｏｒｄｙｃｅｐ
ｉｎ；Ｓ２：腺苷标准品－ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；Ｓ３：
供试品。２．２ 标准指纹图谱的建立２．２．１ 标准指纹图谱的生成
１０批蛹虫草样品的谱图经“
中药谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版”进行多点校正、自动匹配、生成对照后，自动生成共有模式，导出标准指纹图谱，见图２
。
图２ 蛹虫草标准指纹图谱
３ 讨论
３．１ 提取溶剂的选择
由于蛹虫草中的主要活性成分为核苷类物质，极性较大，因此本实验比较了甲醇、乙醇、水三种极性溶剂对蛹虫草药材的提取效果，结果发现甲醇提取的谱峰最多，且各峰含量相对较高，因此选择甲醇作为提取溶剂。
３．１．１ 甲醇体积分数的考察
分别考察２０％甲醇、５０％甲醇、７０％甲醇对蛹虫草的提取效率，结果发现，２０％甲醇提取的谱峰最多，且峰形和分离度都较好，因此选择２０％甲醇作为蛹虫草提取溶剂。３．１．２ 提取溶剂用量的考察
分别比较２０倍、３０倍、５０倍、１００倍溶剂对蛹虫草的提取效率，结果发现２０倍溶剂和３０倍溶剂用量组的各谱峰含量接近，且明显高于５０倍和１００倍溶剂用量组，本着节省溶剂的原则，选择２０倍甲醇溶剂用量。本实验确定的最佳供试品提取条件为：将蛹虫草药材用２０倍２０％甲醇超声提取３０ｍｉｎ制得。３．２ 谱条件的优化３．２．１ 检测波长的选择
对蛹虫草谱图进行１００～８００ｎｍ波长范围内的扫描，发现在２５０～２８０ｎｍ范围内，
基线最平稳、获得谱峰最多，且虫草素和腺苷的最大吸收波长都在２６０ｎｍ，因此选择２６０ｎｍ作为检测波长。３．２．２ 流动相的选择
比较了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－０．１％磷酸盐、
乙腈－０．１％磷酸盐四种二元流动相组成的谱效果，
结果发现，甲醇－水系统所得谱峰基线最平稳，峰分离度最好，因此选择甲醇－水作为流动相。采用梯度洗脱方式，可以较好地分离蛹虫草中中高极性的化合物。
４ 结论
人工蛹虫草作为冬虫夏草的优良替代品，具有很高的
药用价值，导致蛹虫草商品市场充斥着假冒伪劣现象。本实验建立的指纹图谱，可在蛹虫草产地识别方面发挥一定的作用，反映不同产地的蛹虫草药材的整体化学信息，从宏观上控制不同产地蛹虫草药材的质量，有利于蛹虫草质量控制和规范化生产。参考文献：
［１］ 马吴伟，
潘苏华．蛹虫草研究进展［Ｊ］．亚太传统医药，２００８，４（１１）：１４８－１５０．［２］ 林英，
宋斌，李泰辉．蛹虫草研究进展［Ｊ］．微生物学通报，２００６，３３（４）：１５４－
１５７．［３］ 钟石，
计东风，陈诗，等．人工蛹虫草研究进展［Ｊ］．蚕桑通报，２００６，３７（４）：６－
１０．（责任编辑：陈涌涛）
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