第47卷第1期2019年1月广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol.47No.1Jan.2019
*
伍艳霞，谭翠容，娄 悦，郭 维，陈艺之，柯德森
(广州大学生命科学学院，广东 广州 510006)
摘 要：主要探究卵磷脂的抗氧化作用，通过采用水杨酸法㊁DPPH 法㊁连苯三酚自氧化法分别测定卵磷脂对羟基自由基 (㊃OH)㊁DPPH 自由基(DPPH㊃)㊁超氧阴离子(O -2㊃)的清除作用㊂结果表明：在2~20mg /mL 浓度范围内，随着卵磷脂样品含 量的增加，自由基清除率也增加㊂在20mg /mL 时，对㊃OH 和DPPH㊃的清除率高达93.38%和69.72%，
在10mg /mL 时，对O -2㊃
的清除率为65.3%㊂相同条件下，标准VC(1mg /mL)对㊃OH㊁DPPH㊃的清除率分别为91.20%㊁96.18%㊂由此可知：卵磷脂对㊃OH㊁DPPH㊃㊁O -2㊃都有良好的清除作用
关键词：卵磷脂；抗氧化性；自由基 中图分类号:Q545+.1
文献标志码:B 文章编号:1001-9677(2019)01-0046-03
*
基金项目:2017-2019级大学生创新训练项目 卵磷脂的酶法提取及其抗氧化性研究”(201711078046)；广东省自然科学基金项目
(2014A030313531)；广州市科技计划项目(201510010108)；广东省专业综合改革试点项目(生物工程，粤教高函[2013]113号)㊂
第一作者：伍艳霞(1997-)，本科生㊂
通讯作者：柯德森(1966-)，博士，教授㊂
Study on Antioxidant Properties of Lecithin *
WU Yan -xia ,TAN Cui -rong ,LOU Yue ,GUO Wei ,CHEN Yi -zhi ,KE De -sen (School of Life Sciences,Guangzhou University,Guangdong Guangzhou 510006,China)
Abstract :To appraise the antioxidant effect of lecithin,the removal effects of lecithin on hydroxyl radicals,DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)radicals and superoxide anionic radicals were detected respectively through salicylic acid method,DPPH and pyrogallol self -oxidation.It turned out that in the concentration from 2to 20mg /mL,free radical scavenging rate rose gradually as the lecithin sample content increased.The removal effects on hydroxyl radicals and DPPH radicals reached up to 93.38%and 69.72%at the concentration of 20mg /mL while superoxide anionic radicals was 65.3%at 10mg /mL.Under the same conditions,standard vitamin C (1mg /mL)reached 91.20%and 96.18%on hydroxyl radicals and DPPH radicals.Lecithin had the capability of scavenging against hydroxyl radicals,DPPH radicals and superoxide anionic radicals.
Key words :lecithin;antioxidant effect;radicals
自由基也称游离基，实际上自由基的产生和清除过程就是电子转移的过程，也就是一种氧化还原过程，因此清除自由基要从抗氧化做起㊂人体内自由基产生过多或清除自由基能力下降时，会导致各种
病变，因此寻求人体易于吸收的㊁能清除体内过量自由基的外源天然抗氧化剂具有重要的生理意义[1]㊂
一般来说，人体自身有着β-胡萝卜素㊁维生素C 以及过氧化物酶等抗氧化剂来清除自由基，保持人体自由基处于平衡状态，但在许多情况下，例如生病，紫外线照射导致自由基产生增加而体内抗氧化剂不足，此时过多的自由基就会对人体的健康产生危害，尤其是加速机体的老化㊂自由基损伤会加速皮肤老化并且引起皮肤疾病，使用能够补充外源性抗氧化剂的化妆品自然就成了缓解皮肤老化的一个重要途径㊂卵磷脂是细胞磷脂双分子层的主要构成成份，具有良好的细胞相溶性，易于补人体皮肤吸收㊂如果能够证明其具有一定的抗氧化活力，则将有望提供一种生物相容性好㊁易于吸收的新型抗氧因子㊂由于动物卵磷脂来源丰富，价格适中，易加工处理，可塑性强,
能够满足开发新型化妆品的的需求[2]㊂
在保健品行业，我国人均保健品消费支出虽然远远低于发达国家，但人多基数大，保健品具有广阔的潜在市场[3]㊂市场上各式各样的保健品充斥人的眼球，其中动物卵磷脂因为其来源丰富和易于吸收成为后起之秀，它对身体炎症㊁肝脏疾病㊁保护神经系统㊁抑制肿瘤㊁提高免疫力㊁心脑血管疾病等方面均有帮助[4]㊂由此可见，卵磷脂在保健品市场还有很大的开发空间，其较强的可塑性给了保健品研发多种的可能性㊂
因此利用卵磷脂在清除自由基上的作用来研发抗衰老化妆品，保健品具有光明的前景㊂本研究试图从多角度证明卵磷脂的抗氧化能力，为动物卵磷脂新型化妆品㊁保健品的开发和进一步综合利用提供科学的理论依据㊂
1 实 验
1.1 仪器与试剂
第47卷第1期伍艳霞，等：卵磷脂的抗氧化性研究47
UV-1100型分光光度计，上海美谱达仪器有限公司; INFINITE200PRO酶标仪,Tecan Austria GmbH；卵磷脂，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；其他试剂均为生物试剂或分析纯；卵磷脂醇溶液：将2g卵磷脂溶于100mL无水乙醇中，配制成20mg/mL卵磷脂溶液，再用无水乙醇稀释成2㊁4㊁6㊁8㊁10㊁12㊁14㊁16㊁18㊁20mg/mL㊂密封保存㊁待用㊂
1.2 水杨酸法测定卵磷脂抗氧化性
水杨酸法的测定按文献方法[5-7]，并稍加改进㊂25℃㊂在酶标板的一个样孔中依次加入50μL蒸馏水㊁100μL FeSO4溶液(1.8mmol/mL)㊁75μL水杨酸-乙醇溶液(1.8mmol/mL)㊁最后5μL H2O2溶液(0.3%)启动反应，重复三个样孔㊂用酶标仪在波长510nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为空白实
验组㊂
在酶标板的一个样孔中依次加入50μL蒸馏水㊁100μL FeSO4溶液㊁75μL水杨酸-乙醇溶液㊁用5μL H2O代替5μL H2O2溶液，重复三个样孔㊂用酶标仪在波长510nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为空白对照组㊂
在酶标板的一个样孔中依次加入50μL不同浓度的卵磷脂醇溶液㊁100μL FeSO4溶液㊁75μL水杨酸-乙醇溶液㊁最后5μL H2O2溶液启动反应，每个浓度重复三个样孔㊂用酶标仪在波长510nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为加样实验组㊂
在酶标板的样孔中依次加入50μL不同浓度的卵磷脂醇溶液㊁100μL FeSO4溶液㊁75μL水杨酸-乙醇溶液㊁用5μL H2O代替5μL H2O2溶液，每个浓度重复三个样孔㊂用酶标仪在波长510nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为加样对照组㊂
自由基清除率计算公式为:
D={[(A1-A2)-(A3-A4)]/A1-A2}×100%
式中,A1为空白实验组的平均吸光值;A2为空白对照组的平均吸光值;A3为加样实验组的平均吸光值;A4为加样对照组的平均吸光值㊂
用相同体积的1mg/mL的标准VC溶液代替卵磷脂，重复加样实验组和加样对照组的实验步骤，同样按照以上公式计算标准VC溶液对羟基自由基的清除率㊂
1.3 DPPH法测定卵磷脂抗氧化性
DPPH法的测定按文献方法进行[8]，并稍加改进㊂25℃㊂在酶标板的样孔中依次加入75μL梯度卵磷脂溶液，最后75μL DPPH醇溶液(0.2mmol/L)启动反应，重复三个样孔㊂静置30min，用酶标仪在波长517nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为加样实验组，数据记作A i㊂在酶标板的一个样孔中加入75μL无水乙醇,DPPH醇溶液，重复三个样孔㊂用酶标仪在波长517nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为空白对照组1，数据记作A j㊂在酶标板的一个样孔中依次加入75μL不同浓度的卵磷脂醇溶液㊁最后加入75μL无水乙醇溶液启动反应，每个浓度重复三个样孔㊂用酶标仪在波长517nm处测吸光值，每个样孔测五次取平均值，作为空白对照组2，数据记作A c㊂
自由基清除率计算公式为:
D=[1-(A i-A j)÷A c]×100%
式中:A i为加样实验组的平均吸光值;A j为空白对照组1的平均吸光值;A c为空白对照组2的平均吸光值㊂
用相同体积的1mg/mL的标准VC溶液代替卵磷脂，重复加样实验组和加样对照组的实验步骤，同样按
照以上公式计算标准VC溶液对羟基自由基的清除率㊂
1.4 连苯三酚自氧化法测定卵磷脂抗氧化性
连苯三酚自氧化法的测定按文献方法进行[9-10]，并稍加改进㊂
25℃，向试管内加入3mL pH=8.30mmol/L Tris-HCl缓冲液，加入65μL50mmol/L连苯三酚(具体加入量应每次测量前校正，加入的原则是使325nm的吸光值A325变化控制在0.07/min左右)，迅速摇匀，倒入光径1cm的比杯中，每60s测一次A325值，测得ΔA㊂向另外干净试管中加入3mL pH=8.30mmol/L Tris-HCl缓冲液,65μL50mmol/L连苯三酚，再依次加入100㊁200㊁300㊁400㊁500㊁600㊁700㊁800㊁900㊁1000μL的磷脂溶液，迅速摇匀，倒入光径1cm的比杯中，每60s测一次A325值，测得ΔA′㊂
按下式公式计算不同体积卵磷脂对超氧阴离子自由基清除能力:
SA=[(ΔA-ΔA′)/ΔA]×100%
2 结果与讨论
2.1 对㊃OH
的清除作用羟基自由基
图1 卵磷脂对㊃OH的清除率随卵磷脂含量增加的变化
Fig.1 The scavenging rate against hydroxyl radicals varies
with increasing lecithin
由图1可以看出：在卵磷脂浓度在2~20mg/mL浓度范围内，卵磷脂的用量与羟基自由基清除率总体上呈正相关的线性关系，清除率随着卵磷脂用量增大而增大，卵磷脂浓度为20mg/mL时清除率达到93.38%，且未达到最高清除率㊂说明卵磷脂对羟基自由基有清除作用，且随着卵磷脂的用量增加而清除作用增强㊂在相同条件下,20mg/mL标准VC溶液对羟基自由基的清除率为91.20%，与20mg/mL的清除率相近㊂说明高浓度的卵磷脂具有较好的清除羟基自由基效果㊂
2.2 对DPPH㊃
的清除作用
图2 卵磷脂对DPPH㊃的清除率随卵磷脂
含量增加的变化
Fig.2 The scavenging rate against DPPH radicals
varies with increasing lecithin
由图2可以看出：在卵磷脂浓度在2~20mg/mL浓度范围内，卵磷脂的用量与DPPH㊃清除率总体上呈正相关的线性关系，清除率随着卵磷脂用量增大而增大，卵磷脂浓度为20mg/mL
48 广 州 化 工2019年1月
时清除率达到69.72%，且未达到最高清除率㊂在相同条件下，标准VC(1mg /mL)溶液对DPPH㊃的清除率为96.18%㊂标准VE(1mg/mL)溶液对DPPH㊃基的清除率为61.91%，与16mg/mL 的卵磷脂醇溶液清除率相近㊂
2.3 对O -2㊃
的清除作用
图3 卵磷脂对O -2㊃的清除率随卵磷脂含量增加的变化
Fig.3 The scavenging rate against superoxide anionic
radicals varies with increasing lecithin
由图3可以看出：在0~1.2mL 体积范围内，卵磷脂的用量与超氧阴离子自由基清除率总体上呈正相关的线性关系，清除率随着卵磷脂用量增大而增大，说明卵磷脂对O -2㊃有清除作
用，且随着卵磷脂的用量增加而清除作用增强㊂在卵磷脂量为0.4mL 时，清除率有第一个峰值，但是随着卵磷脂量继续增大，清除率也继续增大，说明在0.4mL 时，清除效果较好，但是并未达到最大值㊂在1mL 时，清除率达65.3%，与标准VC(0.061mg /mL)的清除率相当㊂
3 结 论
(1)卵磷脂不溶于水，在溶液中会进行自氧化㊂因而要测定卵磷脂清除自由基能力，首先要将卵磷脂溶于有机溶剂，而且要现配现用㊂本次试验选择价格较为低廉的乙醇作为溶剂，不仅降低试验成本，而且在一定程度上能抑制卵磷脂的自氧化㊂
(2)卵磷脂在反应体系中容易出现浑浊，这是由于反应体系中含有水，卵磷脂在水中的溶解度低，易析出㊂因此在实验中要多设置一组加了各个浓度卵磷脂的对照组来排除干扰㊂
(3)本小组曾经尝试制作测定卵磷脂含量的标准曲线，传
统丙酮溶解的方法因实验操作引起的误差大，而且实验步骤复杂㊂在进行DPPH㊃的清除率实验中发现，卵磷脂对DPPH㊃的清除率与浓度有较好的正相关性，且从2~40mg /mL 梯度范围内均有较好的线性关系㊂因此，这种方法可以用作卵磷脂的含量测定方法㊂
(4)本文通过三种方法综合衡量了卵磷脂的抗氧化活力，研究结果证明了卵磷脂具有很好的抗氧化能力㊂目前系统性研究并证明动物卵磷脂的抗氧化活力尚未见报道，本研究首次证明了卵磷脂具有广泛的抗化活力，为卵磷脂在化妆品添加剂中的应用奠定了基础㊂
参考文献
[1] Vladimiro C,Thaddao W,Maria.Antioxidant and prooxidant activity
behavior of phospholipids in stripped soybean oil-in-water emuLsions [J].Journal of the American Oil Chemists Society,2011,88(9):1409-1416.
[2] 波，潘凤，杨深鹏，等.氢化卵磷脂在化妆品中的应用[J].广
东化工,2018,45(367):152-153,138.
[3] 梁旭荣.我国保健品行业现状及发展趋势分析[J].中国盐业,
2018,7(3):31-35.
[4] 王兆明，贺稚非，余力，等.动物源卵磷脂功效作用及其分析方法
[J].食品工业科技,2014,35(19):362-367.
[5] 王宁，薛源，孙体健.苋菜红素对羟基自由基和超氧阴离子自由
基的清除作用[J].山西医科大学学报,2009,40(5):458-459.
[6] 徐建国，田呈瑞，胡青平.天然桑葚红素体外清除自由基活性研
究[J].食品科学,2005,26(12):77-80.
[7] 苟小军，邹全付，纪小明，等.分光光度法测定Fenton 反应产生的
羟基自由基[J].成都大学学报(自然科学版),2009,28(2):91-93.
[8] 颜军，陈平，樊瑞胜，等.橙皮苷磺酸钠对自由基清除能力的研究
[J].食品工业科技,2007,28(9):64-66.
[9] 陈宗保，郑大贵，余衍文，等.环己酮V C 缩酮和环己酮异Vc 缩酮
清除自由基能力的研究[J].食品工业科技,2009,30(4):107-108.
[10]谢卫华.连苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的改进[J].
医药工业,1988,19(5):218-219.
[11]陈玫，张海德，陈敏，等.几种中药不同溶剂组分的抗氧化活性研
究[J].中山大学学报(自然科学版),2006,45(6):
131-132.
(上接第34页)
[6] Song L,Pang Y,Zheng Y,et al.Design,preparation and enhanced
photocalytic activity of porous BiOCl /BiVO 4microspheres via a coprecipition -hydrothermal method [J ].Journal of Alloys and Compounds,2017,283(3):375-382.
[7] 赫荣安，曹少文，余家国.碘氧化铋光催化材料的研究进展[J].中
国材料进展,2017,36(1):17-24.
[8] Intaphong P,Phuruangrat A,Thongtem S,et al.Sonochemical
synthesis and characterization of BiOI nanoplates for using as visible -light-driven photocatalyst[J].Materials Letters,2017,213(1):88-91.
[9] 张国强，刘碧玉，贾密英，等.纳米片状BiOI 的制备及可见光催化
性能研究[J].河北师范大学学报(自然科学版),2017,41(5):413-418.
[10]Zhou C,Cao J,Lin H,et al.Controllable synthesis and photocatalytic
activity of Ag /BiOI based on the morphology effect of BiOI substrate [J].Surface &Coatings Technology,2015,272(4):213-220.
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议