m i RＧ３１Ｇ５p靶向N o t c h１调节
文良华１，陈世华１，寿折星２
(１．荆州市公安县中医院骨科，湖北荆州㊀４３４３００;２．华中科技大学同济医学院附属协和医院中医科，湖北武汉㊀４３００２２)㊀㊀摘要：目的㊀明确m i RＧ３１Ｇ５p在骨关节炎软骨细胞中的作用.方法㊀采用H u l t h法进行大鼠骨关节炎造模，并分离原代软骨细胞，白细胞介素(i n t e r l e u k i n,I L)Ｇ１β诱导体外模型，检测m i RＧ３１Ｇ５p的表达变化；进一步通过在线数据库预测m i RＧ３１Ｇ５p靶点并验证，细胞增殖检测试剂盒(c e l l c o u n t i n g k i tＧ８,C C KＧ８)和流式细胞术检测m i RＧ３１Ｇ５p对原代软骨细胞增殖和凋亡的影响.结果㊀骨关节炎大鼠中m i RＧ３１Ｇ５p表达下调;m i RＧ３１Ｇ５p m i m i c s促进软骨细胞增殖，而m i RＧ３１Ｇ５p i n h i b i t o r诱导软骨细胞凋亡增加；此外,m i RＧ３１Ｇ５p i n h i b i t o r促进I LＧ６和基质金属蛋白酶１３(m a t r i xm e t a lＧl o p r o t e i n,MM PＧ１３)表达增加；荧光素酶报告基因实验证实N o t c h１是m i RＧ３１Ｇ５p的直接靶点,N o t c h１过表达质粒会部分抵消m i RＧ３１Ｇ５p m i m i c s对软骨细胞的增殖保护作用.结论㊀m i RＧ３１Ｇ５p下调表达介导骨关节炎软骨细胞增殖受限和凋亡发生，可能参与骨关节炎的发病.
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关键词：骨关节炎；软骨细胞;m i RＧ３１Ｇ５p;N o t c h１
E f f e c t so f m i RＧ３１Ｇ５p o n P r o l i f e r a t i o n a n d A p o p t o s i so f O s t e o a r t h r i t i s C h o n d r o c y t e sb y T a r g e t i n g N o t c h１
W e nL i a n g h u a１,C h e nS h i h u a１,S h o uZ h e x i n g２
(１．D e p a r t m e n t o fO r t h o p a e d i c s,G o n g a nC o u n t y H o s p i t a l o fT r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n e,J i n g z h o u㊀４３４３００,C h i n a;２．D e p a r t m e n t o fT r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n e,U n i o nM e d i c a l C o l l e g eA f f i l i a t e d t oT o n g j iM e d i c a l C o l l e g e,H u a z h o n g UＧn i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,W u h a n㊀４３００２２,C h i n a)
A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T o i d e n t i f y t h ee f f e c t so fm i RＧ３１Ｇ５p o no s t e o a r t h r i t i sc h o n d r o c y t e s．M e t h o d s㊀O s t e o a r t h r i t i s m o d e l s o f r a t sw e r e e s t a b l i s h e da c c o r d i n g t oH u l t hm e t h o d,a n d p r i m a r y c h o n d r o c y t e sw e r e i s o l a t e da n d t r e a t e db y i nＧt e r l e u k i n１β(I LＧ１β)．T h e e x p r e s s i o no fm i RＧ３１Ｇ５p w a s e v a l u a t e db yq R TＧP C R．T h e p o t e n t i a l t a r g e t o fm i RＧ３１Ｇ５p w a s p r e d i c t e db y T a r g e t S c a n H u m a n d a t a b a s e,a n d v e r i f i e db y l u c i f e r a s e r e p o r t
e r a s s a y．E f f e c t s o fm i RＧ３１Ｇ５p o n p r o l i f e r a t i o n a n da p o p t o s i s o f p r i m a r y c h o n d r o c y t e sw e r e d e t e r m i n e db y C e l lC o u n t i n g K i tＧ８(C C KＧ８)a n dF l o w C y t o m e t r y．R e s u l t s ㊀T h e e x p r e s s i o no fm i RＧ３１Ｇ５p w a s d o w n r e g u l a t e d i n o s t e o a r t h r i t i sm o d e l s o f r a t s．m i RＧ３１Ｇ５p m i m i c s p r o m o t e d p r o l i fＧe r a t i o no f c h o n d r o c y t e s,a n dm i RＧ３１Ｇ５p i n h i b i t o r l e dt oa p o p t o s i so f c h o n d r o c y t e s．M o r e o v e r,m i RＧ３１Ｇ５p i n h i b i t o r p r oＧm o t e de x p r e s s i o n o f I LＧ６a n dm a t r i xm e t a l l o p r o t e i n１３(MM PＧ１３)．F u r t h e r i n v e s t i g a t i o n r e v e a l e dN o t c h１w a s t h e d i r e c t t a r g e t o fm i RＧ３１Ｇ５p,a n dN o t c h１o v e r e x p r e s s i o n p a r t i a l l y l i m i t e d t h e p r o t e c t i v e r o l eo fm i RＧ３１Ｇ５p m i m i c s i nc h o n d r oＧc y t e s．C o n c l u s i o n㊀T h e d o w n r e g u l a t e dm i RＧ３１Ｇ５p m e d i a t e d a p o p t o s i s a n d l i m i t e d p r o l i f e r a t i o n o f c h o n d r o c y t e s i n o s t e oＧa r t h r i t i s,w h i c hm i g h t c o n t r i b u t e t o p a t h o g e n e s i s o f o s t e o a r t h r i t i s．
K e y w o r d s:o s t e o a r t h r i t i s;c h o n d r o c y t e s;m i RＧ３１Ｇ５p;N o t c h１
㊀㊀骨关节炎(o s t e o a r t h r i t i s,O A)是一种常见的退行性疾病，常伴随疼痛㊁短暂晨僵和骨擦音，严重影响患者工作和生活[１Ｇ２].目前的研究显示，多种因素参与骨关节炎的发病，如遗传㊁生物学紊乱和生物力学等，但具体机制尚不明确[２Ｇ３].临床中，骨关节炎的药物主要针对症状进行消
炎镇痛等，缓解疾病进展.因此，明确其具体机制有助于针对性.
微小核糖核酸(m i c r o r i b o n u c l e i c a c i d s,m i R N A s)是一组存在于生物体的非编码R N A分子，其长度约２２个核苷酸[４].m i R N A s通过结合m R N A s的３＇端非翻译区，调节蛋白表达，进而在多种生理和病理过程中发挥作用[５].研究表明,m i R N A s在骨关节炎中存在差异表达，既有上调表达，又有下调表达.最近一项研究显示,m i RＧ３１Ｇ５p在骨关节炎患者分离的软骨间充质干细胞中显著下调[６].然而,m i RＧ３１Ｇ５p
基金项目：中医药科研项目(Z Y２０１９Q００２)
文良华，陈世华，寿折星．m i RＧ３１Ｇ５p靶向N o t c h１调节骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的作用[J]．实用骨科杂志,２０２０,２６(５):４２１Ｇ４２６． １２４
㊀实用骨科杂志㊀第２６卷，第５期,２０２０年５月㊀
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