miR -503-5p 靶向VEGFA 基因通过PI3K /AKT 信号通路调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭 谢迎春
邓
丹①
张玉梅②
王
琴③（贵州中医药大学第一附属医院妇科检查室，贵阳550001）
中图分类号R737.33文献标志码
A
文章编号
1000-484X （2021）06-0655-06
［摘
要］目的：探讨微小RNA -503-5p （miR -503-5p ）对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法：培
养滋养层细胞HTR8/Svneo 和人绒毛膜癌细胞系JEG -3、BeWo 和JAR ，实时荧光定量PCR （qRT -PCR ）检测miR -503-5p 和血管内皮生长因子A （VEGFA ）mRNA 表达水平，Western blot 法检测VEGFA 蛋白表达水平。以JEG -3细胞为研究对象，构建过表达miR -503-5p 或敲低VEGFA 的JEG -3细胞，MTT 检测细胞增殖，Transwell 检测细胞的迁移和侵袭能力，Western blot 检测细胞周 期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（p -PI3K ）、磷酸化的蛋白激酶B （p -AKT ）蛋白水平。生物信息学软件预测VEGFA 的3'非翻译区（3'UTR ）中含有与miR -503-5p 互补的核苷酸序列，双荧光素酶报告基因实验验证miR -503-5p 与VEGFA 调控关系。结果：与HTR8/Svneo 细胞比较，人绒毛膜癌细胞系JEG -3、BeWo 和JAR 中miR -503-5p 水平均降低（P <0.05），VEGFA mRNA 和蛋白水平均升高（P <0.05）。过表达miR -503-5p 或敲低VEGFA 可降低JEG -3细胞OD 值、迁移数和侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9、p -PI3K 和p -AKT 蛋白表达水平（P <0.05）。miR -503-5p 靶向负调控VEGFA 表达。VEGFA 过表达逆转了miR -503-5p 对JEG -3增殖、迁移和侵袭及PI3K /AKT 信号通路的影响。结论：
过表达miR -503-5p 通过靶向负调控VEGFA 表达和抑制PI3K /AKT 信号通路抑制人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭。
［关键词］绒毛膜癌；miR -503-5p ；血管内皮生长因子A ；PI3K /AKT 信号通路；细胞增殖；迁移和侵袭
miR -503-5p targets VEGFA gene to regulate proliferation ，migration and invasion of human choriocarcinoma cells through PI3K /AKT signaling pathway
pgl3XIE Ying -Chun ，DENG Dan ，ZHANG Yu -Mei ，WANG Qin.Department of Gynecology ，the First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine ，Guiyang 550001，China
［Abstract ］Objective ：To investigate the effects of miR -503-5p on proliferation ，migration and invasion of human choriocarci⁃
noma cells and its mechanism.Methods ：The trophoblast cells HTR8/Svneo and human choriocarcinoma cell lines JEG -3，BeWo and JAR were cultured.qRT -PCR was used to detect the expression levels of miR -503-5p and VEGFA mRNA.The expression level of
VEGFA protein was detected by Western blot.JEG -3cells were used to construct JEG -3cells with miR -503-5p overexpression or VEG⁃FA knockdown.Cell proliferation was detected by MTT assay ，and migration and invasion ability of cells were detected by Transwell.Western blot was used to detect the levels of CyclinD1，MMP2，MMP9，p -PI3K and p -AKT protein.The bioinformatics software pre⁃
dicted that the 3'UTR of VEGFA contained a nucleotide sequence complementary to miR -503-5p ，and the dual luciferase reporter gene assay verified the relationship between miR -503-5p and VEGFA.Results ：Compared with HTR8/Svneo cells ，the levels of miR -503-5p in human choriocarcinoma cell lines JEG -3，BeWo and JAR were decreased （P <0.05），and VEGFA mRNA and protein levels were increased （P <0.05）.Overexpression of miR -503-5p or knockdown of VEGFA reduced the OD value ，migration number and inva⁃sion number of JEG -3cells ，and the protein expression levels of CyclinD1，MMP2，MMP9，p -PI3K and p -AKT in the cells （P <0.05）.miR -503-5p targets negative regulation of VEGFA expression.VEGFA overexpression reversed the effect of miR -503-5p on JEG -3pro⁃liferation ，migration and invasion ，and PI3K /AKT signaling pathway.Conclusion ：Overexpression of miR -503-5p inhibits prolifera⁃tion ，migration and invasion of human choriocarcinoma cells by targeting negative regulation of VEGFA expression and inhibition of PI3K /AKT signaling pathway.
［Key words ］Choriocarcinoma ；miR -503-5p ；VEGFA ；PI3K /AKT signaling pathway ；Cell proliferation ；Migration and invasion 绒毛膜癌是女性常见的恶性肿瘤，多继发于葡萄胎、流产以后，少数发生于妊娠后［1］。绒毛膜癌的主要采用手术切除和化疗，但手术创伤大，而化疗副作用多［2］。寻绒毛膜癌的新型分子
doi ：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.06.004
①贵州中医药大学第一附属医院产科，贵阳550001。②贵州省职工医院产科，贵阳550025。③通信作者，贵州省职工医院妇科，贵阳550025，E -mail ：lbayftbs@163 。作者简介：谢迎春，女，副主任医师，主要从事妇科肿瘤研究，E -mail ：
t88ico0o@163 。
靶点一直是领域内的研究热点。微小RNA （microRNA，miRNA）是一类小分子单链非编码
RNA，在肿瘤的发生发展中起重要调控作用［3］。研究显示，miR-503-5p参与卵巢癌等肿瘤细胞的增殖和凋亡，是肿瘤的潜在靶点［4］。目前，miR-503-5p对人绒毛膜癌细胞的调控作用及机制还未知。生物信息学软件预测显示，血管内皮生长因子A （vascular endothelial growth factor A，VEGFA）是miR-503-5p的靶基因。VEGFA是促血管生长因子家族成员，参与肿瘤血管生成，在乳腺
癌、胃癌、结直肠癌等肿瘤的发生发展中起重要作用［5-7］。本研究以miR-503-5p/VEGFA轴为切入点，探讨miR-503-5p对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制，以期为人绒毛膜癌的靶向分子提供新靶点。
1材料与方法
1.1材料人绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo、人绒膜癌细胞系JEG-3、BeWo和JAR（中国科学院上海细胞库），胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）（浙江天杭生物科技股份有限公司），RPMI1640培养基（美国Gibco公司），四甲基噻唑蓝（methylthiazoletra⁃zolium，MTT）和胰蛋白酶（美国Sigma公司），逆转录试剂盒和PCR试剂盒（北京天根生化科技有限公司），Trizol试剂和Lipofectamine TM2000试剂盒（美国Invitrogen公司），PCR引物（上海生工生物工程有限公司），细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K）、磷酸化的蛋白激酶B（phosphory⁃lated protein kinase B，p-AKT）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase2，MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase9，MMP9）抗体（北京中杉金桥生物试剂公司），二喹啉甲酸（bicinchoninic⁃acid，BCA）蛋白检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），miR-503-5p模拟物（mimics）、miR-503-5p抑制剂、VEGFA的小干扰RNA（广州锐博生物科技有限公司），双荧光素酶活性检测试剂盒（美国Promega公司）。
1.2方法
1.2.1细胞培养用含10%FBS的RPMI1640培养基培养人绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo、人绒膜癌细胞系JEG-3、BeWo和JAR，置于37℃、CO2体积分数5%、湿度97%的培养箱中。每隔1d更换1次新鲜的培养基。细胞融合至80%~90%时，磷酸盐
缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）清洗细胞，
0.25%胰蛋白酶消化，传代培养。
1.2.2细胞转染和分组对数生长期的JEG-3细胞，以每孔1×105个细胞接种于6孔板中，待细胞融合至60%时，更换不含FBS的培养基。参照Lipo⁃fectamine TM2000试剂盒操作说明，分别将miR-503-5p mimcs（miR-503-5p组）、模拟物阴性对照（miR-NC组）、miR-503-5p抑制剂（anti-miR-503-5p组）、抑制剂对照（anti-miR-NC组）、VEGFA的小干扰RNA （si-VEGFA组）、小干扰RNA阴性对照（si-NC组）、miR-503-5p mimcs与VEGFA过表达载体（miR-503-5p+pcDNA-VEGFA组）、miR-503-5p mimcs与空载体（miR-503-5p+pcDNA组）转染至JEG-3细胞。转染12h后，更换新鲜培养基。培养箱中继续培养至48h后，收集细胞，用于后续实验。
1.2.3实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测细胞中miR-503-5p和VEGFA mRNA表达水平各组转染后的细胞以每孔5×105个细胞接种于6孔板中，培养箱中培养48h后，胰酶消化，收集细胞。PBS清洗后，Trizol试剂提取细胞中总RNA。微量核酸仪检测RNA的纯度和浓度，RN
A溶液在260nm处的吸光度值（absorbance，A）与280nm处的A的比值（A260nm/A280nm）处于1.8~2.0范围说明纯度较好。参照逆转录试剂盒，将RNA逆转录为cDNA。然后以cDNA为模板，进行PCR扩增。PCR扩增条件：95℃5min，95℃10s，60℃30s，72℃30s，共35个循环。引物序列：miR-503-5p上游5'-GGTCCGCGTAAGTGCAGAAGA-3'，下游5'-GAGGTTCCGCGCTAGATCCGTC-3'；VEGFA上游5'-GGGTTTAGACAAATGCTAG-3'，下游5'-AAG⁃TAGCGCGCVCATAGTT-3'；U6上游5'-AT⁃GATAGTCGCTAGTCTGATC-3'，下游5'-TTGACCG⁃TAGCTGTATTTTGA-3'；GAPDH上游5'-GAAGGT⁃GAAGGTCGGAGTC-3'，下游5'-GAAGATGGTGAT⁃GGGATTTC-3'。miR-503-5p以U6为内参，VEGFA 以GAPDH为内参，2-ΔΔCt法计算miR-503-5p和VEG⁃FA mRNA的相对表达水平。
1.2.4Western blot检测细胞中VEGFA、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白水平各组转染后的细胞，以每孔5×105个细胞接种于6孔板中，培养箱中培养48h后，胰酶消化，收集细胞。PBS清洗后，加入RI⁃PA蛋白裂解液，提取细胞中总蛋白，BCA法对蛋白进行定量。取适量蛋白，100℃煮沸5min。蛋白变性后，行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，每
泳道30μg蛋白。电泳后，电转移至聚偏乙烯二氟膜。然后将聚偏乙烯二氟膜置于5%脱脂牛奶中，封闭1h。分别加入VEGFA（稀释度1∶800）、Cy⁃
clinD1（稀释度1∶400）、MMP2（稀释度1∶600）和MMP9（稀释度1∶600）抗体，4℃孵育过夜。
第2天，加入辣根过氧化酶标记的二抗（稀释度1∶200），37℃孵育1h。加入ELC显影液，避光显影，凝胶成像系统曝光拍照。
1.2.5MTT检测细胞增殖各组转染后的细胞，以每孔5×103个细胞接种于96孔板中。每组设置3个复孔。培养箱中分别培养24h、48h和72h后，每孔加入20μl的MTT溶液（5g/L），继续孵育4h。吸弃培养基，每孔加入150μl二甲基亚砜，轻轻振荡混匀，于酶标仪490nm处测定光密度值（OD）。实验重复3次。
1.2.6Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力各组转染后的细胞，用不含FBS的RPMI1640培养基调整浓度为5×104个/ml。细胞迁移实验：水化后的Transwell上室加入100μl细胞悬液，下室加入500μl含FBS的RPMI1640培养基。培养48h后，取出Transwell小室，4%多聚甲醛固定30min。PBS清洗后，0.4%结晶紫染15min。然后置于倒置显微镜下观察，随机选取5个视野，计数。细胞侵袭实验：先将Matrigel基质胶用RPMI1640培养基稀释（比例1∶8），铺于Transwell上室。自然晾干后，再加入100μl细胞悬液，后续操作同细胞迁移实验。
1.2.7双荧光素酶报告基因实验验证miR-503-5p 与VEGFA靶向关系starbase生物信息学软件预测显示，VEGFA的3'非翻译区（3'untranslated region，3'UTR）含有与miR-503-5p互补的核苷酸序列。由上海捷瑞生物工程有限公司合成VEGFA的3'UTR，并插入pGL3-Promoter质粒载体中，将该重组质粒
命名为VEGFA-WT。利用定点突变技术将含miR-503-5p结合位点的VEGFA的3'UTR位点突变后，插入pGL3-Promoter质粒载体中，将该重组质粒命名为VEGFA-MUT。分别将VEGFA-WT、VEGFA-MUT与miR-503-5p mimic、miR-NC共转染至JEG-3细胞。转染12h后，更换新鲜培养基。继续培养至48h 后，收集细胞。参照双荧光素酶活性检测试剂盒操作说明，检测荧光素酶活性。各组的荧光素酶活性以荧光虫活性/海肾荧光强度比值表示。
1.3统计学分析利用SPSS2
2.0软件分析实验数据。符合正态分布的计量资料以xˉ±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。2结果
2.1人绒膜癌细胞系中miR-503-5p和VEGFA表达水平与HTR8/Svneo细胞比较，人绒膜癌细胞系JEG-3、BeWo和JAR中miR-503-5p水平均降低（P<
0.05），VEGFA mRNA和蛋白水平均升高（P<0.05）。见图1。
2.2过表达miR-503-5p对人绒膜癌细胞JEG-3增殖、迁移和侵袭的影响与miR-NC组比较，miR-503-5p组miR-503-5p水平升高（P<0.05），说明miR-503-5p mimics转染成功，JEG-3细胞中miR-503-5p 过表达。与miR-NC组比较，miR-503-5p组JEG-3细胞48h和72h OD值、迁移和侵袭细胞数及Cy⁃clinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低（P<0.05）。见图2。
2.3敲减VEGFA对人绒膜癌细胞JEG-3增殖、迁移和侵袭的影响与si-NC组比较，si-VEGFA组VEGFA蛋白水平降低（P<0.05），说明VEGFA小干扰RNA转染成功，JEG-3细胞中VEGFA表达敲低。与si-NC组比较，si-VEGFA组JEG-3细胞48h和72h OD值、迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低（P<0.05）。见图3。
2.4miR-503-5p靶向调控VEGFA表达starbase 生物信息学软件预测显示，VEGFA的3'UTR存在与miR-503-5p核苷酸序列结合的连续位点。miR-503-5p组共转染WT-VEGFA
的细胞荧光素酶活性低于
图1人绒膜癌细胞系中miR-503-5p和VEGFA表达水平Fig.1Expression levels of miR-503-5p and VEGFA in hu⁃man chorionic cancer cell lines
Note：A.qRT-PCR detected the expression level of miR-503-5p in hu⁃man chorionic cancer cell lines；B.qRT-PCR detected the expres⁃
sion level of VEGFA mRNA expression in human chorionic cancer
cell lines；C.Western blot detected the expression level of VEGFA
protein in human chorionic cancer cell lines.Compared with HTR8/Svneo cells，*.P<0.05.
miR-NC（P<0.05），而miR-503-5p组共转染MUT-VEGFA的细胞荧光素酶活性与miR-NC差异无统计学意义（P>0.05）。miR-503-5p组VEGFA蛋白水平低于miR-NC组（P<0.05），anti-miR-503-5p组VEG⁃FA蛋白水平高于anti-miR-NC组（P<0.05）。这说明miR-503-5p靶向负调控VEGFA表达。见图4。
2.5过表达VEGFA逆转miR-503-5p对JEG-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响与miR-503-5p+pcDNA-NC组比较，miR-503-5p+pcDNA-VEGFA组JEG-3细胞48h和72h OD值、迁移和侵袭细胞数及VEGFA
、
图3敲减VEGFA对人绒膜癌细胞JEG-3增殖、迁移和侵
袭的影响
Fig.3Effect of knockdown VEGFA on proliferation，mi⁃
gration and invasion of human chorionic cancer
cell JEG-3
Note：A.MTT detected the effect of knockdown VEGFA on JEG-3cell
proliferation；B and C.Transwell detected the effect of knockdown
VEGFA on JEG-3cell migration and invasion；D and E.Western
blot detected the effect of knockdown VEGFA on the expression of
CyclinD1，MMP2and MMP9proteins in JEG-3cells.Compared
with si-NC group，*.P<0.
05.
图2过表达miR-503-5p对人绒膜癌细胞JEG-3增殖、迁移
和侵袭的影响
Fig.2Effect of over-expressing miR-503-5p on prolifera⁃
tion，migration and invasion of human chorionic
cancer cell JEG-3
Note：A.Validation of miR-503-5p mimics transfection effect；B.MTT
detected the effect of over-expressing miR-503-5p on JEG-3cell
proliferation；C and D.Transwell detected the effect of over-ex⁃
pressing miR-503-5p on JEG-3cell migration and invasion；E and
F.Western blot detected the effect of over-expressing miR-503-5p
on the expression of CyclinD1，MMP2and MMP9proteins in JEG-
3cells.Compared with miR-NC group，*.P<0.
05.
图4miR-503-5p靶向调控VEGFA表达
Fig.4miR-503-5p targets VEGFA expression
Note：A.Starbase software predicts the presence of binding sites be⁃
tween the nucleotide sequence of miR-503-5p and VEGFA；B.
Double luciferase reporter gene experiment；C and D.Western blot
detected the effect of miR-503-5p on VEGFA protein expression.
Compared with miR-NC，*.P<0.05；compared with anti-miR-NC
group，#.P<0.
05.
图5过表达VEGFA逆转miR-503-5p对JEG-3增殖、迁移
和侵袭的影响
Fig.5Over-expressing VEGFA reversed effect of miR-
503-5p on JEG-3cells proliferation，migration and
invasion
Note：A.MTT detected the effect of over-expressing miR-503-5p and
VEGFA on the proliferation of JEG-3cells；B and C.Transwell de⁃
tected the effect of over-expressing miR-503-5p and VEGFA on the
migration and invasion of JEG-3cells；D and E.Western blot detect⁃
ed the effect of over-expressing miR-503-5p and VEGFA on the ex⁃
pression levels of VEGFA，CyclinD1，MMP2and MMP9in JEG-3
cells.Compared with miR-503-5p+pcDNA-NC group，*.P<0.
05.
CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平升高（P <0.05）。见图5。2.6
PI3K/AKT 通路相关蛋白的表达
与miR -NC
组比较，miR -503-5p 组p -PI3K 和p -AKT 蛋白水平降低（P <0.05）。与miR -503-5p+pcDNA -NC 组比较，miR -503-5p+pcDNA -VEGFA 组p -PI3K 和p -AKT 蛋白水平升高（P <0.05）。见图6。
3讨论
miR -503-5p 是近年来新发现的一种miRNA ，参
与肿瘤的发生发展。李小辉等［8］研究显示，过表达miR -503-5p 通过干扰Rb /E2F 信号通路的转导抑制膀胱癌细胞的增殖。JIANG 等［9］研究显示，过表达
miR -503-5p 通过靶向抑制WEE1表达降低肝细胞癌HCCLM3细胞的迁移和细胞上皮间质转化，是肝细胞癌预后的潜在生物标志物。但目前，miR -503-5p 对绒毛膜癌细胞恶性生物学行为的影响还未知。
本研究以人绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo 为对照，采用qRT -PCR 法检测了人绒膜癌细胞系JEG -3、BeWo 和JAR 中miR -503-5p 水平，结果显示，人绒膜癌细胞系中miR -503-5p 水平明显低于绒毛膜滋养层细胞，提示miR -503-5p 可能作为抑癌基因参与绒膜癌的发生发展。进一步转染miR -503-5p mimics 构建过表达miR -503-5p 的JEG -3细胞，结果显示，过表达miR -503-5p 可有效抑制JEG -3细胞的增殖、迁移和侵袭，提示miR -503-5p 是人绒膜癌的潜在分子靶点。
miRNA 通常在转录后水平调控基因的表达，进
而影响细胞的生物学行为
［10-11］
。为了进一步探讨
miR -503-5p 影响人绒膜癌JEG -3细胞增殖、迁移和
侵袭的作用机制，本研究通过starbase 生物信息学软件预测显示，VEGFA 的3'UTR 存在与miR -503-5p
核苷酸序列互补结合的连续位点，并通过双荧光素酶活性实验证实了miR -503-5p 可与VEGFA 的3'UT
R 靶向结合。同时，上调JEG -3细胞中miR -503-5p 表达降低了VEGFA 表达，而下调miR -503-5p 表达促进了VEGFA 表达，这些结果说明miR -503-5p 靶向负调控VEGFA 表达。作为促血管生长因子家族成员之一，VEGFA 可促进肿瘤血管生成，而肿瘤
血管生成是肿瘤细胞生长、迁移和侵袭的基础，因此，抑制VEGFA 表达对于延缓肿瘤发展具有积极意义［12］。本研究显示，敲低VEGFA 表达可抑制人绒膜癌JEG -3细胞增殖、迁移和侵袭，过表达VEGFA 则降低了过表达miR -503-5p 对JEG -3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用，提示过表达miR -503-5p 通过抑制VEGFA 表达发挥抗绒膜癌作用。
PI3K /AKT 信号通路是VEGFA 下游信号通路
之一，参与肿瘤细胞的生长、迁移等生命过程。XU 等［13］研究显示，VEGF 可作用于PI3K /AKT 信号通路，在体外和体内抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和耐药性。PI3K 同时具备磷脂酰肌醇激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶活性，其受到外界信号刺激后被激活生成p -PI3K 。AKT 是PI3K 下游靶分子之一。p -PI3K 进一步激活AKT （p -AKT ）。p -AKT 活化PI3K /AKT 信号通路下游分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mamma⁃
lian target of rapamycin ，mTOR ）［14］
。活化的mTOR 可
促进CyclinD1与细胞周期蛋白依赖性激酶结合，启动细胞周期。CyclinD1表达升高可促进细胞由G1期向S 期转变，加速细胞周期进程，促进细胞增殖，诱发肿瘤［15］。PI3K /AKT 信号通路的激活还能够促进MMP 的表达，进而促进细胞迁移和侵袭［16］。本研究显示，过表达miR -503-5p 可降低JEG -3细胞中p -PI3K 、p -AKT 及CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白水平，提示过表达miR -503-5p 抑制了PI3K /AKT 信号通路。此外VEGFA 过表达可逆转过表达miR -503-5p 对PI3K /AKT 信号通路的抑制作用，提示miR -503-5p 通过靶向负调控VEGFA 表达，进而抑制了PI3K /AKT 信号通路，从而发挥抗绒膜癌作用。
综上所述，人绒毛膜癌细胞中miR -503-5p 呈低表达，VEGFA 呈高表达。过表达miR -503-5p 可抑制人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭，其可能通过靶向负调控VEGFA 与抑制PI3K /AKT 信号通路的激活发挥作用。
参考文献：
［1］ZHANG X ，PANG WW ，LIU H ，et al .Lidocine potentiates the cy⁃
totoxicity of 5-fluorouracil to choriocarcinoma cells by
downregu⁃
图6Western blot 检测p -PI3K 、p -AKT 蛋白表达
Fig.6
Western blot detected expression of p -PI3K and p -AKT protein
Note ：Compared with miR -NC group ，*.P <0.05；
compared with miR -503-5p+pcDNA -NC group ，#.P <0.05.
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