关于微生物培养
悬赏分：0 - 解决时间：2010-2-5 13:24
高中微生物培养过程倒平板中有一步骤 平板冷凝时要倒置，目的是为了防止皿盖上的冷凝水污染培养基 但是 制作培养基后要灭菌 那么灭菌过程中培养基溶液融化，又和冷凝水接触，既然最终冷凝水都会和培养基接触 原先倒置的操作不是没意义了么 给我解释下吧...拜托了 皮革加工问题补充：
微生物培养过程有个步骤 将平板倒置 放入培养箱中培养 为什么这里又要倒置了？？
一楼 但是 你在接种的时候也要把培养基倒过来啊 那样液滴还是照样掉下来
提问者： 血薇whale - 二级
最佳答案
1、配制培养基，配好之后灭菌。在这个过程中，配好的培养基一般是在锥形瓶中的，在锥
形瓶中进行灭菌，灭完之后也是先放在锥形瓶中，等待分装，灭完菌之后放入无菌室或通风厨待用。 2、培养皿灭菌（空的！）。培养皿的灭菌是在没有培养基的情况下进行的，不存在你所说的那种放置问题，一般是用专门灭培养皿的金属筒，或者用牛皮纸、报纸打包灭菌。
3、灭完菌之后，培养皿放入无菌室或通风厨待用（不打开灭菌前的“包装”，从灭菌设备中拿出直接进无菌室或通风厨），在降至室温才使用。
4、分装。一般在培养基温度降至50-60摄氏度的时候开始分装。若是提前准备好的，已经凝固在锥形瓶中的，用前先水浴加热熔化。在液态的情况下向培养皿中分装。
5、待培养皿中的培养基凝固后（很快，分装完基本上就凝固个差不多了），此时才将培养皿倒置，防止皿盖上的冷凝水污染培养基（此时皿盖在下，培养基中蒸发出的水蒸气是向上走的，还是凝结于培养基上，就不会有在皿盖上形成水滴后再滴落的情况了，如此防止污染的）。
6、接种培养。接种后，也是倒置培养（原因同 5 所说）
倒置后还可以防止培养基水分蒸过快发，培养基变干，无机盐析出，营养成分浓度变大，不能使用，不利于微生物的生长。不过，分装后的培养皿应尽快使用，放长了还容易感染杂菌。
稀释倒平板法
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
涂布平板法
涂布平板法（spread plate method）
由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
三、实验器材
1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）
直播延时 3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
四、实验方法防止冷凝水
凸轮滚子 1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养
涤绒
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。永磁接触器
（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
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