1前言
甜菊糖又称甜菊苷，它是从菊科植物甜叶菊的叶子中提取出来的一种糖苷。甜叶菊原产于巴拉圭和巴西，现在中国、新加坡、马来西亚等国家也有种植，其甜味成分由甜菊苷及甜菊A苷、B苷、C苷、D苷和E苷组成。 甜菊糖甙（俗称甜菊糖、甜菊糖苷）是一种从菊科草本植物甜叶菊（或称甜菊叶）中精提的新型天然甜味剂，而南美洲使用甜叶菊作为药草和代糖已经有几百年历史。国际甜味剂行业的资料显示，甜菊糖甙已在亚洲、北美、南美洲和欧盟各国广泛应用于食品、饮料、调味料的生产中。中国是全球最主要甜菊糖甙生产国。 甜菊糖甙甜度为蔗糖的250~450倍，带有轻微涩味，甜菊A苷带有明显的苦味及一定程度的涩味和薄荷醇味，味觉特性要比甜菊双糖苷A差些，适度可口，纯品后味较少，是最接近砂糖的天然甜味剂，甜菊糖苷甜度高，且持续时间长，无褐变，极利于保持饮料、食品的本。
针对目前国内食品行业（例如饮料、糕点、糖果）中添加甜菊糖的情况，海能仪器推出了食品中甜菊糖苷的高效液相谱测定方法
2实验部分
2.1基本原理
样品中甜菊糖苷经溶剂提取净化后，供高效液相谱仪（紫外检测器）检测，外标法定量。
2.2试剂与材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯
乙腈（谱纯）。
磷酸。
石油醚。
马德保半球实验0.002mol/L磷酸溶液：精密称取0.196g磷酸于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。
甜菊糖苷（Stevioside C38H60O18）标准品：含量>99.7%CAS57817-89-7。 甜菊糖苷标准溶液：精密称取甜菊糖苷标准品10mg于10mL容量瓶中，加1ml乙腈，溶解后加水定容至刻度，得甜菊糖苷浓度为1mg/mL的标准溶液。
甜菊糖苷标准系列溶液的制备：精密吸取甜菊糖苷标准溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL、
船用防爆离心风机
0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，得浓度为5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的甜菊糖苷的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量，使用0.22nm有机滤膜过滤后待测。
2.3仪器与设备
海能LC7000液相谱仪：配紫外检测器。
电子分析天平：感量1mg。
混匀器。
离心机，转速大于5000r/min。
滤膜：0.22μm有机滤膜。
识别腕带2.4样品的制备
液体样品：
称取5.0g试料，于10mL烧杯中，精确至0.01g，加流动相适量，混匀后，移入50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22μm有机滤膜待测。 水溶性固体样品：
取有代表性的混合均匀试料2.5g，于10mL烧杯中，精确至0.01g，加流动相适量，混匀后，移入50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22μm有机滤膜待测。
水不溶性试料：
取有代表性的混合均匀试料2.5g，于10mL烧杯中，精确至0.01g，移入50mL离心管中，加15ml石油醚涡旋振荡5min，在5000r/min下离心10min，将上清液弃去，残渣中再加15 mL×3石油醚，重复以上步
骤3次，弃去上清液，氮气吹干残渣。残渣中加1g无水硫酸钠和8m0.22μm有机滤膜乙腈，涡旋振荡5min，在5000r/min下离心10min，上清液置于25mL 比管中，重复提取1次，氮气吹干后，残渣用流动相全量转移到50mL容量瓶中并定容至刻度。充分混匀后过0.22μm有机滤膜待测。
2.5分析步骤
谱条件
谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）
流动相：0.002mol/L磷酸溶液+乙腈=70+30；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃:；
波长：210nm；
进样量：10μL。
3结果与分析深圳挤出机用螺杆组合
3.1测定
楼梯组合精密吸取试料和标准品溶液，按规定谱条件分别进样10μL，以甜菊糖苷保留时间定性，外标法峰面积定量。标准谱图见下图。
结果按下式计算：
式中：
X—试料中甜菊糖苷含量，mg/kg；
C—从标准曲线中算出试液中甜菊糖苷的浓度，μg/mL；
m—试料质量或体积，g或ml；
V—试料定容体积，mL。
3.2重复性
见下图
远红外烘干炉
图中可见，甜菊糖苷连续5针进样，峰面积重复性RSD%0.004，保留时间重复性良好，完全满足方法要求。
3.3线性范围和检出限
本方法的线性范围为5.0μg/mL～100.0μg/mL。检出限为4.00mg/kg。
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