革兰氏染实验报告
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革兰氏染法的原理及其练习
摘要：革兰氏染反应是细菌重要的鉴别特征，所以学习微生物学，进行革兰氏染实验是很重要的。为保证染结果的正确性，采用规范的的染操作方法是十分必要。本实验主要对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）进行革兰氏染，观察它们的染特征，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染方法。染方法与过程很清晰，但实验结果中金黄葡萄球菌(S.aureus Rosenbach）多组呈现假阴性。本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染方法及原理，但要想做出很好的染得多加练习。本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。关键词：革兰氏染大肠杆菌(E.coli) 金黄葡萄球菌(S. aureus Rosenbach) 枯草杆菌(B.subtilis) 引言
革兰氏染是微生物学中最重要的鉴别染方法，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染法可将细菌分为革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结
构组成与结构的差异所决定的。经过一定的染过程后，革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染的蓝紫。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂
质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝被洗脱，复染后变为红。革兰氏染原理很简单，染时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不宜过厚，严格控制脱时间。
大肠杆菌(E.coli)是革兰氏阴性细菌，金黄葡萄球菌(S. aureus Rosenbach)与枯草杆菌(B.subtilis)都是革兰氏阳性细菌，染后在显微镜下容易区别。同时它们的形态各异，可以根据具体颜和形态差异来判断染是否成功。
本实验还涉及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不同，具体使用在实验方法中描述。
移动终端安全1.1材料
1.1.1菌种
大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
1.1.2 溶液与试剂
无菌生理盐水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染夜，香柏油，二甲苯
1.1.3仪器
酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶，接种环，滴管等
1.2 方法
防滑鞋1.2.1 制片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不要太厚）、干燥和固定。
1.2.2染
（1）初染：滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位，染2min，水洗至流出水无。
（2）媒染：用卢戈氏染液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无。
（3）脱：将玻片上的水用吸水纸吸取，用滴管流加95%乙醇脱（持续20秒），稍后立即洗去乙醇。
（4）复染：将玻片上的水用吸水纸吸去，用番红复染液染2min，水洗，吸去残水烤干。
1.2.3 镜检
分别用香柏油覆盖涂菌部位，先用低倍镜到菌，换用
情况。观察结束后，用二甲苯擦洗镜头。的物镜观察染
2．实验结果与分析
2.2 结果分析
大肠杆菌竟革兰氏染后呈现红，3个图片上都是红，因此大肠杆菌应该是革兰氏阴性细菌，与事实相符，染成功。
金黄葡萄球菌比较难染，从结果中可以分析，前两个涂片的菌种可能培养
的时间太长了。因为老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红而造成假阴性，老龄的G+细菌细胞壁老化，不能在乙醇处理的时候使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，从而在复染时被染红。
枯草杆菌染结果很好，蓝紫很明显，染成功。
1.3.3 小结
1、获得本实验成功的关键：固定时烘烤要适度，太轻会在冲洗时冲走细菌，过度会破坏细菌形态；
脱的时间要严格控制，脱不够造成假阳性，脱过度会出现假阴性；选用新培养的菌种，涂片时不能太厚。这些问题在实验过程中几乎都有出现，尤其是对于初学者，特别需要注意。
2、革兰氏染可以迅速将细菌分为阴性和阳性，是很重要的染方法，也是相当复杂的染方法。通过练习革兰氏染，既掌握了一般的染方法，又为以后技术要求更高的染，观察，鉴别奠定了基础。
多功能限位器篇二：细菌放线菌的观察与革兰氏染实验报告
实验一：细菌、放线菌的形态观察与革兰氏染
姓名：陈虹邑学号：200911233012 系别：生物科学与生物技术班级：周二第一组
试验日期：2011年9月13日同组成员：邢悦婷呼波
一、
typec转usb>载荷谱实验目的及意义1、巩固油镜的使用;
2、掌握细菌形态观察的基本方法；
3、了解细菌的基本形态和结构。
4、了解革兰氏染的原理；
5、初步掌握细菌涂片的方法；
6、掌握革兰氏染的方法；
7、掌握放线菌的涂片方法；
8、观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。
二、
实验材料与方法【实验材料】
菌种：溶血链球菌(Strptococcus haemolyticus)，螺菌(Spirillum sp.) ，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium), 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis), 普通变形菌(Proteus vulgaris), 丙酮丁酸梭菌(Clostridium acetotylicum), 褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)等细菌永久装片，放线菌5406，金黄葡萄球菌（staphulococcus aureus），大肠杆菌（E. coli）
试剂：香柏油、无菌水、结晶紫、番红或沙黄、95%酒精、碘液
仪器及用具：显微镜、擦镜纸、吸水纸、小滴管，接种环、载玻片、盖玻片、酒精灯
【实验方法】细菌的观察
1、在载玻片上滴一小滴水，用接种环，采用无菌操作，将细菌挑起，涂到载玻片上，盖上盖玻片。
2、用显微镜对细菌进行活体观察。观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话，再用油镜观察。
3、观察细菌的永久装片，观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话，再用油镜观察，到细菌的各种结构。
放线菌的观察
1、玻璃纸法：用剪刀，剪下小块的玻璃纸，压片，放在显微镜下观察放线菌的基内菌丝、气生菌丝。
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