工作票管理系统直接免疫荧光法测抗原
基本原理
将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染少，相对使用标记抗体用量偏大. 试剂与仪器
磷酸盐缓冲盐水（PBS):0.01mol/L，pH7.4
荧光标记的抗体溶液:以 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 进行稀释
缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油 9 份+ pH9。2 0。2M 碳酸盐缓冲液 1 份配制
搪瓷桶三只（内有 0.01mol/L，pH7。4 的 PBS 1500ml）
有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）
荧光显微镜停车场闸机
玻片架
滤纸
37℃温箱等。
实验步骤强氧化剂
1. 滴加 0。01mol/L，pH7。4 的PBS于待检标本片上，10min后弃去,使标本保持一定湿度。 2。 滴加适当稀释的荧光标记（饱和浓度可以用滴度发或公式法算出)的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温30min 定时间（参考：30min).
3. 取出玻片，置玻片架上,先用 0。01mol/L，pH7。4 的 PBS 冲洗后，再按顺序过 0.01mol/L，
pH7。4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min,不时振荡.
4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5。 立即用荧光显微镜观察.观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示:
（-)无荧光;（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；(+++
-—++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）
或（—），即可判定为阳性。tmal
注意事项
1. 对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释在 1：20-100 之
间，要自行摸索最佳梯度，建立最好的稀释比例，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱,
影响结果的观察.
2. 染的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染时间可以从 10 min 到数
小时，一般 30 min 已足够。染温度多采用室温（25℃左右）,高于 37℃可加强染效果，
但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎病毒)可采用 0-2℃的低温，延长染时间。低温染
过夜较 37℃30 min 效果好的多。
3。 为了保证荧光染的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染
的干扰。
聚醚类消泡剂
(1）标本自发荧光对照:标本加 1—2 毛刷制作滴 0.01mol/L，pH7。4 的 PBS.
（2）特异性对照（抑制试验):标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗
体.
如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光， 待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染.
4。 一般标本在高压灯下照射超过 3min，就有荧光减弱现象，经荧光染的标本最好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。
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