1、程序
1.1 仪器组成
Waters E2695型高效液相谱仪由Waters 2489紫外检测器、 Waters E2695分离单元【包括Waters E2695溶剂管理系统（四元梯度泵、四通道GPV、溶剂瓶、通道管路、泵头密封清洗系统、进样器清洗系统）、Waters E2695 样品管理系统（自动进样器、样品盘）】以及可控调节柱温箱、Empower2软件、HP计算机和共享HP-1800打印机、采集服务器、主服务器等组成。 1.2使用前的准备
1.2.1首先，在开机前对被检测样品按检验标准进行制备、过滤等预处理；其次对该品种项下规定的流动相进行制备、过滤等前处理；按谱条件及待检药物成分溶解性配制泵头清洗液和洗针溶液，比较通用的泵头清洗液为15%～20%的异丙醇溶液，洗针溶液为50%左右的甲醇溶液。
1.2.2在未接通电源前，检查柱温箱、检测器、输送泵等开关，应放置在“O”的位置。
1.2.3打开电路电源开关，开启UPS电源开关，使整个电路系统处于稳压状态。开启主服务器，待主服务器自检完成，再开启各节点采集服务器，使局域网络处于正常链接状态。
1.2.4将配制好并经过预处理的流动相、泵头清洗液和洗针溶液放入溶剂托盘，将相配套的连接有过滤头的溶剂管路插入相应溶剂瓶中。按流向安装好所需使用的谱柱。
1.2.5将Waters E2695分离单元总开关和Waters2489紫外检测器开关置于“I”位置，开启分离单元和检测器。仪器开始自检，自检完毕，分离单元控制面板显示区显示“Idle（空闲）”，检测器控制面板显示区显示上次检测波长和实时检测信号。仪器开机完成。
厨房纸巾架
1.2.6点击控制面板上“Menu/Status”键，进入Waters E2695分离单元控制模式。按显示区“Direct Function”下方按钮，进入分离单元运行准备模式。按控制面板上的“▲”、“▼”键将光标移动到“2.system prep”，点击“OK”下按钮，系统自动进行如下诊断操作：灌注和清洗泵头、灌注和清洗进样针、灌注和清洗注射器、逐个溶剂瓶管路排液。也可以直接由“Idle(空闲)”状态模式，点击“Diag”，进入诊断 模式，分别选择“Prime Seal Wash”、“Prime Neddle Wash”进行“灌注和清洗泵头、灌注和清洗进样针”，然后点击“Halt”手动停止，点击“EXIT”退出诊断模式，进入状态模式，在状态模式下，点击“Direct Function”下按钮，移动光标至“4.Purge Injector”手动清洗注射器。然后按下“Menu/Status”键，进入控制模式，移动光标至你需要排液的通道，输入“100”，点击“Enter”，然后点击“Direct Function”下按钮，选择“3.Wet Prime”，点击“OK”，对你所选择的通道进行手动排液操作。 然后开启泵，检查输送泵、谱柱及管路接头处是否漏夜。操作完毕，运行准备结束。1.3 软件运行
1.3.1 软件启动
各项准备完毕，开启电脑，双击桌面上“Empower2”图标，输入系统管理员分配的使用者和密码，在“高级”选项，可根据使用者习惯选择“Pro”或”QuickStart”界面，进入操作系统。也可以由系统管理员分配系统资源时，预先设定。
1.3.2编辑配置管理器和新建项目
1.3.
2.1点击“配置系统(Configure System)”，进入“配置管理器”界面。
1.3.
2.2展开“项目（Project）”，选中“使用者姓名”，右键单击，选择“新建（N）”,“项目（P）”，进入“新项目向导”界面，选择“使用者姓名”作为新建项目的父项目，点击“下一步”。输入新建项目的空间大小，点击“下一步”，“下一步”，“下一步”，选择从其他项目需要拷贝的内容，一般以“使用者姓名”项目为复制源，点击“下一步”，命名新建项目，如果需要全面审计追踪，输入“项目注释”，点击“完成”。
1.3.
2.3当所建项目空间不足，需对“项目属性”进行重新编辑。方法是：在“配置管理器”界面，选中所建项目，右键单击，选择“属性”，进入“项目属性”界面，在“通用”选项，更改项目数据库空间配额，单击“确定”即可。 1.3.3运行样品
1.3.3.1导入“运行样品”
点击“运行样品（Run Samples）”，选择需要运行样品所属项目，选择使用的仪器编号，点击“确定”，系统进入“运行样品”界面。
滑水鞋1.3.3.2创建仪器方法
选择“单进样”选项卡，点击“创建方法组”，进入“新方法组-选择仪器方法”界面。选择“新建”，“下一步”，进入“仪器方法编辑器”界面。点击“W2690\5分离单元”,
对分离单元方法参数进行编辑。一般，“通用”、“事件”、“通道”选项卡采用缺省值；“脱气”选项卡选择脱气为“开”；“温度”选项卡设置柱温和柱温允许的偏差范围；“流量”选项卡设置“压力上限”，一般为缺
省值4000Psi；洗脱模式选择等度或梯度；输入方法设计的流量（ml/min）；输入A、B、C、D四个通道溶剂比例，如果是梯度洗脱，选择梯度曲线一般为第6种曲线，至此分离单元方法参数编辑完成。点击“W2489”，进入检测器方法参数编辑界面。“通用”选项卡，将“灯开启”前打钩，如果是PDA，可编辑全波长扫描范围和分辨率，采样速率。在“通道1”输入检测波长，至此检测器方法参数编辑完成。选择“文件”“另存为”，输入仪器方法名称，如果需要全面审计追踪，输入注释，点击“保存”。
1.3.3.3创建方法组
仪器方法编辑完成，退出编辑，再次回到“新方法组-选择仪器方法”界面，选择刚才所建立的仪器方法，点击“下一步”、“下一步”，采用缺省方法组命名方法组，点击“完成”。
1.3.3.4平衡系统
网络对时
在“运行样品”界面的“仪器方法”下拉列表中，选择所建立的仪器方法，点击“设置”，将方法导入，再点击“监视器”，监视基线。当基线满足检测要求，柱温达到设计柱温时，可以开始进样。可以单针进样，也可以建立序列表后序列进样。
1.3.3.5建立序列表
在“运行样品”界面，点击“样品”选项卡，进入序列编辑器界面。依次输入或选择“样品瓶号”、“样品名称
”、“进样体积”、“进样针数”、“功能”、“方法组/报告方法”、“运行时间”、“延迟时间”等。由于一般采用交互式数据处理，所以其他样品组方法参数采用缺省值。编辑完毕，选择“文件”，“样品组方法另存为”，命名样品组，点击“完成”。
1.3.3.6序列进样
点击“运行样品”界面工具栏上的绿按钮，系统开始按所建序列表一次进样运行。运行过程中，需要修改序列表时，右键单击“正在运行”序列表，选择“修改当前样品组”，提示对话框选择“确定”，样品组序列回到“样品”选项卡，在其中进行修改，修改完毕，直接点击绿按钮序列进样，系统将按照修改后的序列表进样运行。切忌先点击“保存”再点击“运行”，这样系统会重新运行修改后的序列。
豆浆器1.3.3.7谱柱与系统冲洗
步进梁式加热炉当样品组运行完毕，应用超纯水冲洗谱柱60min左右，使缓冲盐全部洗出，然后用规定的有机溶剂冲洗谱柱30min左右，以饱和谱柱。谱柱冲洗完毕，要用超纯水冲洗分离单元管路，然后用有机溶剂置换管路中的水。
1.3.3.8关机
测定及冲洗结束后，应点击流速、流动相比例图标，输入流速为0，待其流速降至0，柱压降至0时，
方可点击关闭窗口图标“X”，退出系统，“Empower2”图标恢复至桌面上，再关闭分离单元开关，使其处于“O”状态，关闭检测器开关，最后逐一关闭电脑主机、打印机、显视器。
填写仪器使用记录。
1.3.4 2D数据处理
1.3.4.1简单数据处理
（1）查看数据：点击“浏览项目”，选择要处理的数据所在项目，单击“确定”。在“通道”选项，选中要处理的数据，右键单击，选择“查看”，可查看当前数据。点击工具栏中“积分”，对当前数据进行积分处理，查看积分效果。颗粒级配
（2）建立处理方法：点击工具栏上“处理方法向导”，选择“新建”，点击“确定”来新建处理方法。在“积分-峰检测”界面用鼠标选择需要积分的最窄峰的起始点，作为峰宽值，点击“下一步”；用鼠标选择最平的一段基线的噪音作为阈值，点击“下一步”；用鼠标选择需要积分的谱图范围，点击“下一步”；选择最小峰面积值剔除不需要积分的小峰，点击“下一步”、“下一步”，跨通道处理选择对话框中选择“否”；给所积分的峰命名，点击“下一步”；“下一步”、“下一步”，命名处理方法，点击“完成”。退出，在工具栏点击“处理方法”，进行系统适应性和性噪比计算方法编辑。编辑结束，点击工具栏上“保存处理方法”按
钮保存该方法。（3）交互式数据处理：回到“通道”选项，选中要处理的数据，右键单击，选择“处理”，进入“后处理和报告”界面，在“处理”下方“处理”左边的方框中打钩，再选中“使用指定的处理方法”，选择已建立的处理方法，点击“确定”。系统按选择的处理方法对所选择的数据进行处理。
（4）查看结果：处理完毕，选择“结果”选项，点击“刷新”按钮，刚才处理的数
据结果出现在列表中。
（5）订制报告：选择“结果”里的数据处理结果，右键单击，选择“预览/出版”，选中“使用以下报告方法”，选择已建立的报告模板，点击“确定”，订制报告完成，选择“打印”可打印当前报告。
若无已建立的报告模板，需要自行建立，可以建立单个数据报告和重叠图谱报告，也可以建立分式报告和校正曲线和校正表报告，具体方法，另文详述。
1.3.4.2 校正曲线的建立与结果计算
（1）修改样品：点击“浏览项目”，选择需要处理的数据所在项目，单击“确定”，进入“项目”窗口界面。点击“通道”标签，在列表中同时选中用于建立校正曲线的标准样（单点校正或多点校正）所在行，右键单击，点击“改变样品（S）”，进入“修改样品”窗口界面。单击菜单栏“编辑”，点击“含量”，进入“组份编辑器”。点击“组份”标签，填写各组份名称，填写各组份不同校正水平的的该组份含量及单位，
单击“确定”，单击菜单栏“文件”，“退出”，单击“是”，保存对样品所做的修改，回到“项目”窗口界面。
（2）建立处理方法：同5.3.4.1（2）。
（3）处理数据：在“项目”窗口界面，点击“通道”标签，在列表中依次选中标准样+未知样，右键单击，点击“处理（P）”，对所选择的样品数据进行处理。在“后台处理及生成报告”窗口，选中“使用指定的处理方法”，单击“确定”，系统自动开始数据处理。
（4）查看结果：在“项目”窗口界面，点击“结果”标签，点击“更新”。在“结果”列表中，选中未知样，右键单击，点击“查看”，进入“查看-主窗口”，可以看到谱图和计算结果。点击“结果”图标，进入“查看-结果窗口”，可以看到计算结果、样品信息、校正曲线方程及校正表。
（5）订制报告：选择“结果”里的数据处理结果，右键单击，选择“预览/出版”，选中“使用以下报告方法”，选择已建立的报告模板，点击“确定”，订制报告完成，选择“打印”可打印当前报告。
若无已建立的报告模板，需要自行建立，可以建立单个数据报告和重叠图谱报告，
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