南京大学生物技术系实验报告
姓 名 三自由度 年 05 月 24 日
【一、实验目的】
1、太阳能炉灶通过菌落及细胞形态的观察和比较，掌握区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的要点。
3、掌握观察霉菌孢子及根霉假根的方法。
4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。
【二、实验原理】
1、三类微生物菌落形态特征：
霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。制作无纺布手提袋
梭式止回阀放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。
2、三点接种法与霉菌菌落形态的观察
霉菌的菌落形态是分类鉴定的重要依据。为便于观察，通常用接种针挑取极少量霉菌孢子点接于平板中央，使其形成单个菌落；或在平板上接三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。后一方法称为三点接种法。其优点不仅可同时获得三个重复菌落，还由于在三个彼此相邻的菌落间会形成一个菌丝生长较稀疏且较透明的狭窄区域，在该区域内的气生菌丝仅分化出数子实器官，因此直接将培炎皿放低倍镜下就可观察到子实体的形态特征，从而省略了制片的麻烦，并避免了由于制片而破坏子实体自然着生状态的弊端。
3、微培养
微培养是研究丝状真菌、放线菌等微生物生长繁殖全过程的有效方法。其基本原理是将丝状菌的孢子（或菌体）接种在载玻片的小块薄层培养基上，并盖上盖玻片，且轻压上，使接种后的琼脂块成薄圆片状，造成一个让微生物仅能在载玻片和盖玻片的狭窄空间内横向伸展的生镜，因而在培养过程中，可随时用显微镜观察孢子的萌发，菌丝的生长及孢子的形成等各阶段，亦不会因观察而造成培养标本片的污染。用此法制备的镜检标本其视野清
晰，形态逼真，是显微镜摄影之好材料。
4、插片法培养放线菌
放线菌是抗生素的最重要产生菌，其形态特征是军中选育和分类的重要依据。插片法原理是：在接种过放线菌的琼脂平板上，由于插上盖玻片或在平板上开槽后再搭上盖玻片，使放线菌的菌丝体沿着培养给予盖玻片的交界线上生长，蔓延，从而附着在盖玻片上。待培养物成熟轻轻取出盖玻片，就能获得放线菌在自然生长状态下的标本。若将其置于载玻片上即可镜检观察到放下面的个体形态特征。
5、盖片法培养热假丝酵母
假丝酵母是以菌体细胞接种，因菌体细胞较湿粘而不易分散，应先加培养基，使凝固后再将菌体接种到表面，然后盖上盖玻片。
【三、实验材料、主要仪器和试剂】
化学镀镍磷合金1、材料(菌种)：黑根霉、产黄青霉、曲霉、放线菌(链霉菌)、热带假丝酵母菌各培养物，PDA培养基，高氏一号培养基
2、试剂：乳酚油溶液、美蓝染液
3、仪器：接种环(×1)、酒精灯(×1)、载玻片(×5)、光学显微镜(×1)
【四、操作步骤】
1、放线菌的形态观察
（1）肉眼观察
取放线菌的平皿培养物，仔细观察菌落(即孢子堆)的颜，基内菌丝(即菌落反面)的颜，可溶性素(即渗入培养基内的)的颜，菌落表面的形状(崎岖、褶皱或平滑，有无同心环)菌落的大小，最后用接种耳去触试菌落的硬度。
把你观察的结果记录下来。
（2）显微镜观察
观察孢子丝(插片法)。
将放线菌接种到含葡萄糖天门冬素培养基的平皿中，用刮刀均匀。用插片法把无菌盖玻片斜插在琼脂内。置于28℃温度箱内培养7～10天。取出插片法的载玻片，在高倍镜下观察，注意孢子丝的形状(直形、波曲形或螺旋形)、是否轮生。
观察孢子(印片法)
用一片盖玻片在链霉菌菌落表面轻轻按一下，即成印片。在载玻片上放一滴美蓝染液。将印孢子的盖玻片直接放在美蓝液上，使孢子着，用吸水纸吸取多余的染液。用油境观察孢子的形状。
记录观察到的孢子丝及孢子的各种性状。
2、酵母菌的形态观察
（1）肉眼观察
取酵母的平皿培养物及斜面培养物，仔细观察菌落的颜、透明度、隆起情况、大小。
记录你所观察到的结果，与细菌菌落加以比较。
（2）显微镜观察
取清洁载玻片一块，滴上一滴生理盐水。用接种耳取酵母斜面培养物少许，放在水中轻轻和匀。盖上清洁盖玻片一块，注意不要产生气泡。置于低倍镜、高倍镜下观察，注意细胞的形态、大小、有无芽体。绘细胞图。
有些酵母菌能形成假菌丝，取下上述盖玻片，在清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，盖上上述盖玻片，把带菌的一面贴在载玻片上，高倍镜下观察是否形成假菌丝。
3、霉菌的形态观察
（1）肉眼观察
取根霉、产黄青霉、曲霉的培养物各一皿，仔细观察菌落的颜、质地，用接种耳触其坚度，与放线菌菌落加以比较。记录观察结果。
（2）显微镜观察
在载玻片中央滴一滴乳酸油。用尖头镊子从根霉菌菌落边缘取出一小块很薄的带菌丝的培
养基，放在载玻片上的乳酚油中。加盖玻片用低倍镜、高倍镜观察。用同样方法观察产黄青霉、曲霉。分别绘出三种霉菌的结构图。
根霉假根的观察：菌丝经培养已倒挂成须状， 不少菌丝已接触到载玻片，并分化出假根。取出载玻片，在菌丝上滴一滴乳酚油，盖上盖玻片后，在显微镜下能观察到清晰的假根与葡萄菌丝。
4、清理器皿、实验桌面。
【五、实验结果】
1、三类菌的基本菌落形态观察
菌类 | 菌名 | 辨别要点 | 菌落描述 |
湿 | 干 | 表面 | 边缘 | 隆起形状 | 颜 | 透明度 |
厚薄 | 大小 | 松密 | 大小 | 正面 | 反面 |
酵母菌 | 热假丝酵母 | 厚 | 大 | | | 光滑、湿润、粘稠 | 整齐 | 低凸起 | 乳白 | 乳白 | 略透明 |
放线菌 | 链霉菌 | | | 致密 | 小 | 粉末状或颗粒状,同心圆放射状,交错缠绕 | 凹陷 | 扁平 | 白 | 白 | 不透明 |
霉菌 | 产黄青霉 | | | 疏松 | 大 | 圆形 | 整齐 | 低凸起 | 浅墨绿 | 黄 | 不透明 |
黑曲霉 | | | 疏松 | 大 | 细颗粒状 | | | 黑 | | 不透明 |
根霉 | | | 疏松 | 大 | 盖革计数管细颗粒、絮状 | | | 黑 | 白 | 不透明 |
| | | | | | | | | | | |
2、三类菌的基本细胞形态观察
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