玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌 一、目的要求
掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料
玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳
三、操作步骤
(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法
新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗
涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法
(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有
次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。一层微小粒子，故要用水多次甚至10
若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。 (2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲
洗。然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用
(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下: 人货电梯防护门
浓溶液 或重铬酸钾(工业用) 50g
自来水 150mL
浓硫酸(工业用) 800mL
稀溶液 或重铬酸钾(工业用) 50g
自来水 850mL
浓硫酸(工业用) 100mL
配法都是将或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓
硫酸，边加边搅动。配好后的洗涤液应是棕红或桔红。贮存于有盖容器内。 (2)原理 或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸，酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。 磨砂杯
(3)使用注意事项 (a)洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去;(b)玻璃器皿投入前，
应尽量干燥，避免洗涤液稀释;(c)此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿;(d)有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除;(e)盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质;(f)洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿时即已失效，不能再用。
(二)空玻璃器皿的包扎
1. 培养皿的包扎
培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5—8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多
于8套不易操作。
2. 吸管的包扎
网络球准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5 cm处，塞一小段约1.5 cm长的棉花，以免
使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸
液体太费力;过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近
左端，与报纸约呈45度角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入
报纸，右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，进行干
热灭菌。
3. 试管和三角烧瓶等的包扎
试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞，然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸
(不可用油纸)与细线包扎好，进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，
用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。
空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好再加
一层牛皮纸。
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(三)干热灭菌法适用于玻璃器皿，如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌; 1. 装入待灭菌物品 预先将各种器皿用纸包好或装入金属制的培养皿筒、移液管筒内，然
后放入电热烘箱中。
2. 升温 关好电烘箱门，打开电源开关，旋功恒温调节器至所需温度刻度(本实验所需为
160—170?)，此时烘箱红灯亮，表明烘箱已开始加热，当温度上升至所设定温度后，
苯丙酮合成则烘箱绿灯亮，表示巳停止加温。
3. 恒温 当温度升到所需温度后，维持此温度2 h。
4. 降温 切断电源，自然降温。
5. 取出灭菌物品 待电烘箱内温度降到70?以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。
常用培养基的配制和湿热灭菌
一、目的要求
学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、实验材料
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、NaCL、1mol/L H Cl、KHPO?3HO、MgSO4?7HO、FeSO?7HO 242242
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布
三、操作步骤
(一 )牛肉膏蛋白胨培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下:
牛肉膏3g、蛋白胨l0gNaCl 5g、琼脂15—20g、水1000mL、pH 7.4—7.6 1. 称药品:按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯
或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，
牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2. 加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒
搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放
入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中(需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后
补足所失的水分。
3. 调pH:检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH
试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/LHCl进行调节。pH的调节通常木板削削削
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