食品安全国家标准
破坏一号发电机
1 范围
本标准主要适用于以大豆为原料，经酵母（Saccharomyces cerevisiae）发酵培养，再经分离、浓缩、精制得到的食品添加剂冰结构蛋白。
2 技术要求
2.1 感官要求
感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求
项目要求检验方法
水晶面膜
泽浅棕将适量试样置于清洁、干燥的白瓷点滴板中，在自然光线下，观状态液体察其泽和状态
注：测定各指标前，试样应于4ºC下解冻约20 h，并搅拌均匀。 远红外烘干炉2.2 理化指标hunt-079
理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标
项目指标检验方法
冰结构蛋白（ISP）含量，g/L ≥ 5 附录A中A.3
灰分，w/% ≤ 2 GB 5009.4
pH 2.5～3.5 附录A中A.4
铅（Pb），mg/L ≤ 2.0 GB 5009.75
注：测定各指标前，试样应于4ºC下解冻约20 h，并搅拌均匀。
2.3 微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
表3 微生物指标
项目指标检验方法菌落总数，CFU/mL ≤3000 GB 4789.2
大肠菌，CFU/mL ≤10 GB 4789.3
霉菌和酵母菌，CFU/mL ≤100 GB 4789.15
沙门氏菌，/25mL 不得检出GB 4789.4边坡滑模施工
单核细胞增生李斯特氏菌，/25mL 不得检出GB 4789.30 蜡样芽孢杆菌，CFU/mL ≤100 GB 4789.14 注：测定各指标前，试样应于4ºC下解冻约20 h，并搅拌均匀。
3 储存条件
产品应在-18℃以下储存。
附录A
检验方法
A.1 一般规定
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 A.2 鉴别试验
A.2.1 液相谱法
在冰结构蛋白（ISP）含量测定试验中，试样溶液谱图的主峰保留时间应和标准溶液谱图的主峰保留时间相一致，参见附录B中图B.1。
A.2.2 质谱法环二肽
分别配制10 mg/L的试样溶液和标准溶液，在附录C参考质谱条件下进行测定，两者分子结构应一致，参见附录B中图B.2。
A.3 冰结构蛋白（ISP）含量的测定
A.3.1 试剂和材料
A.3.1.1 乙腈：谱纯。
A.3.1.2 三氟乙酸：纯度≥98 %。
A.3.1.3 冰结构蛋白对照品：纯度≥10 %。
A.3.2 仪器和设备
A.3.2.1 高效液相谱仪：带二极管阵列检测器。
A.3.2.2 微量进样器：100.0 μL。
A.3.2.3 0.45 μm水相滤膜。
A.3.3 参考谱条件
A.3.3.1 谱柱：C18反相谱柱（Φ 4.6 mm×15 cm），填料直径3.5 m；或其他等效的谱柱。
A.3.3.2 检测波长：214 nm。
A.3.3.3 柱温：室温。
A.3.3.4 流速：1.0 mL/min。
A.3.3.5 进样量：20.0 μL。
A.3.3.6 流动相A：0.05%三氟乙酸水溶液（体积分数）；流动相B：0.05%三氟乙酸乙腈溶液（体积分数）。
A.3.3.7 流动相梯度洗脱参数见表A.1。
表A.1 流动相梯度洗脱程序表
时间/min A/% B/%
0.00 100.0 0.0 3.00 100.0 0.0 5.00 78.0 22.0 15.00 52.0 48.0 18.00 48.0 52.0 19.00 0.0 100.0 22.00 0.0 100.0 23.00 100.0 0.0 26.00
100.0
0.0
A.3.4 分析步骤
A.3.4.1 标准溶液系列的制备
称取适量冰结构蛋白对照品溶解于水，分别配制实际浓度为50 mg/L, 100 mg/L, 150 mg/L, 200 mg/L 和250 mg/L 的标准溶液系列。 A.3.4.2 试样溶液的制备
移取搅拌均匀试样0.5 mL ，用水定容至25 mL ，用0.45 μm 水相滤膜过滤。 A.3.4.3 测定
在A.3.3参考谱条件下，分别对标准溶液系列和试样溶液进行测定，得到冰结构蛋白标准溶液浓度和响应值（峰高或峰面积）的曲线，在曲线上对应试样溶液谱图的响应值（峰高或峰面积），得到试样溶液中冰结构蛋白的浓度。同时做空白试验。 A.3.5 结果计算
冰结构蛋白（ISP ）含量的质量分数w 1，单位为克每升（g/L ），按式（A.1）计算：
2
011×1000)
(×=
V c c V w -……………………………（A.1）
式中：
V 1——试样溶液的体积，单位为毫升（mL ）；
c ——由标准曲线获得的试样溶液中冰结构蛋白的浓度，mg/L ； c 0——由标准曲线获得的空白溶液中冰结构蛋白的浓度，mg/L ； V 2——原始试样的体积，单位为毫升（mL ）； 1000——体积换算系数。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10 %。 A.4 pH
取适量搅拌均匀试样，用校正好的pH 计在室温下直接测定。
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