沉降菌测试⽅法..
沉降菌测试⽅法
1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养⽫包在报纸⾥，放⼊恒温烤箱中加热⾄180℃后，⼲烤2⼩时。 2、取X克培养基放⼊X克蒸馏⽔，放⼊⾼压消毒锅中加热溶化，冷⾄45℃时，在⽆菌操作要求下将培养基注⼊培养⽫，每⽫约15ml。 3、待琼脂凝固后，将培养基平⽫倒置于33℃恒温培养箱中培养48⼩时，若培养基平⽫上确⽆菌落⽣长，即可采样⽤。制备好培养⽫宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，⼀般在100级层流罩中放置3个培养⽫，在100000级，10000级按⾯积⼤⼩⼀般放2个培养⽫。打开培养⽫盖，使培养基表⾯暴露0.5⼩时，再将培养⽫盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不⼩于48⼩时，采样点位置离地0.8m—1.5m 左右。
油田载荷传感器5、将培养⽫举起⽤⾁眼直接计数，⽤记号笔点记然后⽤5—10倍放⼤镜检查是否遗漏，若培养⽫上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养⽫边缘⽣长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换⽓次数、空⽓流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合⽣产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试⼈员必须穿戴符合环境洁净度级别⼯作服，静态测试时，室内测试⼈员不得多于2⼈。测试时间对单向流100级净化房间及层流⼯作台，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于10min后开始，对⾮单向流，100000级以上净
化房间，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=
.........21n
Mn
M M ++ n —培养⽫总数 M 1—1号培养⽫菌落数 M 2—2号培养⽫菌落数 M n —n 号培养⽫菌落数
⽤平均菌落数判断洁净空⽓中微⽣物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进⾏消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。 ⼈员进出洁净⽣产区的⼀般程序：
⼈员进出⽆菌操作洁净⽣产区程序：
⽆菌医疗器具洁净室环境要求及监测：
监测项⽬技术指标监测⽅法监测频次100级10000级100000级300000级
温度（℃）18℃—28℃1次/班
相对湿度% 45~65 1次/班⽔平层流
风速m/s ≥0.4 ——————JC
垂直层流1次/⽉
≥0.3
换⽓次数——≥20 ≥15 ≥12 1次/⽉静压差Pa 不同级别洁净室及洁净室与⾮洁净室之间≥5
洁净室与室外⼤⽓≥10 1次/⽉沉降菌数≤1 ≤3 ≤10 ≤15 GB/T16294-1996 1次/周
附录C（资料性附录）洁净室（区）沉降菌技术要求
洁净室（区）沉降菌技术要求
⽆菌检查法试验步骤
⽆菌检查在洁净度100级单向流空⽓区域内进⾏，其全过程应严格遵守⽆菌操作，防⽌微⽣物污染。
1、器具灭菌：培养⽫若⼲个（报纸所好）、试管、剪⼑、镊⼦等装⼊盒中置电热⼲燥箱内180℃，2⼩时。
2、硫⼄醇酸盐流体培养基（细菌），根据试验实际⽤量取若⼲培养基和蒸馏⽔，煮沸，摇匀，分装⾄适宜的容器中，瓶塞封⼝，灭菌。硫⼄醇酸盐流体培养基置33℃培养48⼩时，应⽆菌⽣长。
改良马丁培养基（真菌），根据试验实际⽤量取若⼲培养基和蒸馏⽔，煮沸，摇匀，分装，灭菌。改
良马丁培养基置24℃培养72⼩时，应⽆菌⽣长。
营养琼脂根据实际⽤量按⼀⽫装15ml，分装⼏个⽫来计算，灭菌。
0.9%氯化钠分装⾄7⽀试管，封⼝，灭菌。
3、把⾦黄⾊葡萄球菌⽤接种环刮⼀下，放⼊0.9%氯化钠试管中摇匀，作10倍系列稀释⾄10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放⼊标号5#、6#、7#培养⽫⾥，倒⼊营养琼脂摇匀，（营养琼脂不能太烫，以不烫⼿为准）待营养琼脂冷却后倒置放⼊33℃培养箱中培养48⼩时，48⼩时中取出观察计数，
根据菌落数⼩于100cfu来决定⽤⼏号。
4、操作时，应⽤适当的消毒液对供试品表⾯或外包装擦拭消毒后，以⽆菌⽅法取内容物。取供试品3只接种于⾜以浸没供试品的适量培养基中。⼀只瓣膜接种于硫⼄醇酸盐流体培养基中，轻轻摇动，使瓣膜与培养基混合，1⽀试管接种⾦黄⾊葡萄球菌对照⽤菌液1ml，作阳性对照，1⽀作空⽩对照。另取2只瓣膜接种于改良马丁培养基中，2⽀试管作空⽩对照。硫⼄醇酸盐流体培养基置33℃培养，改良马丁置24℃培养阳性对照管培养48⼩时后应有菌⽣长。
5、结果判断：在培养期间应逐⽇观察并记录是否有菌⽣长。培养14天后，若供试品管匀澄清，判供
试品符合规定；若供试品管中任何⼀管显浑浊并有菌⽣长，判供试品不符合规定。
1、准备⼯作：
移液管：0.1ml1⽀，1ml10⽀
试管：10ml×4⽀，试管架2个（⼤⼩）
烧杯40ml2个，锥形瓶2个
试验所⽤器⽫需经处理除去可能存在的外源性内毒素，玻璃器⽫置电热⼲燥箱内180℃⼲烤⾄少2⼩时。
细菌内毒素检查⽔10ml×4⽀
细菌内毒素⼯作标准品1⽀，每安瓿含内毒素10EU
鲎试剂 0.1ml×8⽀
同⼀批号3⽀瓣膜
浸提介质：细菌内毒素检查⽔
L=8.6（ml）
浸提介质体积计算公式：V=
8.6×3=25.8（ml）
把细菌内毒素检查⽔4⽀外表擦净打开，倒⼊烧杯中，⽤移液管取25.8ml 倒⼊装3只瓣膜烧杯中，⽤锡纸封⼝，放进提前打开升温⾄37℃恒温培养箱中，
培养1.5⼩时。供试液贮存应不超过2⼩时。
注：V-浸提介质体积，单位为毫升（ml）
L-产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
λ-所⽤鲎试剂灵敏度标⽰值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
2、细菌内毒素⼯作标准品⽤细菌内毒素检查⽔1ml溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟。
①⽤移液管取0.1ml⼯作标准品和0.9ml检查⽔在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
②⽤移液管从第1管中取0.5ml混合液和0.5ml检查⽔在旋涡混匀器上混匀30秒钟。（阳性对照溶液）数控分度头
③⽤移液管取0.1ml⼯作标准品和0.9ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
④⽤移液管从第3管中取0.5ml混合液和0.5ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。（供试品阳性对照溶液）
3、把8⽀鲎试剂外表擦净全部打开放进试管架中，每⽀各加⼊0.1ml细菌内毒素检查⽔，在旋涡器上混匀，其中2⽀作供试品管，2⽀作阴性对照管，2⽀作阳性对照管，2⽀作供试品阳性对照管。
每⽀供试品管加⼊0.1ml供试液；阴性对照管加⼊0.1ml检查⽤⽔；阴性对照管加⼊0.1ml阳性对照溶液；供试品阳性对照管加⼊0.1ml供试品阳性对照溶液。封闭管⼝，轻轻摇匀，垂直放⼊37±1℃恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果，试管在孵育期间应避免任何振动。
4、结果判断：将试管从⽔浴箱中轻轻取出，缓缓倒转180若管内形成凝胶，
并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性（＋），未形成凝胶或形成凝胶不坚实，变形并从管壁滑脱者为阴性（－）。阴性对照管均为阴性，阳性对照管，供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则⽆效。若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查⽔或实验器具受污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂灵敏度及标准内毒素效价标⽰不准确或标准内毒素稀释有误。供
试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应⼲扰因素存在。
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⼀、氯化物
1、配制标准溶液：0.1mol/L硝酸银溶液。
称取1.6987g分析纯硝酸银，定溶⾄100ml容量瓶中，转⼊棕⾊试剂瓶中，避光保存，贴标签。
2、取样，量取50ml样品⽔平⾏样（2份）倒⼊试管中，加5滴硝酸，再加⼊1ml硝酸银。均不得发⽣浑浊。
⼆、硫酸盐
1、配制标准溶液：称取5±0.5g氯化钡（分析纯），定溶⾄100ml容量瓶，倒⼊试剂瓶，贴标签。（如果浑浊，把蒸馏⽔烧开，放凉再⽤）
2、分析：取样50ml平⾏样（2份）倒⼊试管中，加2ml氯化钡溶液，不得发⽣浑浊。
三、钙盐
1、配制标准溶液：
称取分析纯草酸铵3.5g，定溶⾄100ml容量瓶，贴标签。
2、分析：取样50ml平等样2份，倒⼊试管中，加2ml草酸铵溶液，均不得发⽣浑浊。
四、⼆氧化碳
1、配制标准溶液：
称取分析纯氢氧化钙0.3g，定溶⾄100ml容量瓶，⽤橡⽪塞塞紧，⽤⼒振摇，放置1⼩时，⽤时取清液。
2、分析：取样25ml平等样（2份）倒⼊带盖的试管中，加25ml氢氧化钙溶液，放置1⼩时，振摇，1⼩时内不得发⽣浑浊。
五、易氧化物
1、配制标准溶液：①⾼锰酸钾溶液：取3.3克⾼锰酸钾，加⽔1050ml，煮沸15分钟，加⽔到1000ml，密塞后静置2天以上，⽤微孔玻璃漏⽃过滤，摇匀，标定其浓度。
②稀硫酸：取分析纯硫酸（98%）57ml，（注意烧杯⾥放蒸馏⽔，沿杯壁缓慢倒⼊硫酸57ml，定溶⾄1000ml，放凉再⽤）
2、标定：取在105℃⼲燥⾄恒重的基准草酸钠约0.2克，精密称定，加新沸过冷⽔250ml与硫酸10ml搅拌使溶解，⾃滴定管中迅速加⼊本液约25ml，待褪⾊后，加热到65℃，继续滴定⾄溶液显微红⾊并保持30秒钟不褪；当滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，每1ml⾼锰酸钾滴定液（0.02mol/L）相当于6.70mg草酸钠，根据本液消耗量与草酸钠取⽤量，算出本液浓度，即
得。
贮藏：置玻璃塞棕⾊玻璃瓶中，密闭保存。
3、分析：取样100ml平⾏样（2份）加稀硫酸10ml，煮沸后，加⾼锰酸钾滴定液（0.02M）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红⾊不得完全消失。
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1、配制标准溶液
①纳⽒试剂：称取60g氢氧化钾，溶于约250ml⽆氨⽔，冷却⾄室温。另
制服制作外称取20g碘化钾溶于100ml⽆氨⽔，边搅拌边逐步加⼊⼆结晶粉末（约
10克），⾄出现朱红⾊沉淀不易溶解时，改为滴加饱和⼆溶液，保持搅拌，
到出现少量朱红⾊沉淀不易溶解时，停⽌滴加饱和⼆溶液，然后把该溶
液缓慢注⼊上述已冷却的氢氧化钾溶液中，边注⼊边搅拌，并⽤⽆氨⽔稀释⾄
400ml，然后静置过夜。最后将该溶液上清液⾄聚⼄烯塑料瓶中，常温避光保存。
②氯化铵溶液：称取分析纯氯化铵0.0315g，定溶⾄1000ml（0.0032g 100ml）容量瓶中，转⼊试剂瓶中保存，贴标签。
2、分析：取样50ml，加纳⽒试剂2ml，放置15分钟。如果显⾊，加氯化
铵溶液1.5ml，加⽆氨⽔48ml，加纳⽒试剂2ml，对照颜⾊不得更深。（氨含量
0.00003%）
七、重⾦属
1、配制标准溶液
①醋酸盐缓冲溶液：（PH=3.5）称取分析纯醋酸铵25g，加蒸馏⽔25ml溶解
后，加盐酸液[7mol/L(称取0.0255g⾄100ml定溶⾄100ml)]38ml，再⽤盐酸液
[2mol/L(称取0.0073g⾄100ml定溶)]准确调节PN值3.5（电位计指⽰）⽤⽔
稀释⾄100ml，倒⼊试剂瓶待⽤。
②硫代⼄酰胺溶液：称取硫代⼄酰胺4g，加⽔溶解成100ml，置冰箱中保
存。临⽤前取混合液[由1mol/L氢氧化钠（氢氧化钠4克＋100ml蒸馏⽔）15ml，
⽔5.0ml及⽢油20ml组成]5.0ml加上述硫代⼄酰胺溶液1.0ml置⽔浴上加热
20秒钟，冷却，⽴即使⽤。
③铅标准贮备液：称取110℃⼲燥恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml容量
瓶中加硝酸5ml与⽔50ml溶解后⽤⽔稀释⾄刻度，摇匀，作标准贮备液，铅的浓度为100ug/ml。
临⽤前，精确量取铅标准贮备液稀释⾄所需浓度。
2、分析：取样40ml，加醋酸盐缓冲液2ml，加硫代⼄酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟。取38ml样品⽔加2ml铅标液加醋酸盐缓冲液2ml加硫代⼄酰胺2ml，对⽐颜⾊；40ml样品⽔的颜⾊不得⽐铅标液的对照管深。（铅的含量0.00005%） ⼋、不挥发物：
1、取⼲净蒸发⽫200ml2个，分别标号放⼊105℃⼲燥箱中。
第⼀次：烘烤3⼩时后，放进⼲燥⽫中冷却40分钟，天平称重，记录。
第⼆次：烘烤3⼩时后，放进⼲燥⽫中冷却40分钟，天平称重，记录。
注：第⼀次和第⼆次重量差0.3毫克以内，如超过再恒重⼀次。
2、⽤移液管量取100ml样品⽔，放⼊恒重的蒸发⽫中，⽔分在⽔浴锅上蒸⼲，同时做蒸馏⽔平⾏样。
3、第⼀次：把蒸发⽫放进⼲燥箱中烘烤3⼩时，放进⼲燥⽫中冷却40分钟，天平称重，记录。
第⼆次：把蒸发⽫放进⼲燥箱2⼩时，放进⼲燥⽫中冷却40分钟，天平称重，记录。
4、残渣计算公式：
W=[(W12－W11)－(W02－W01)]×1000
W-蒸发残渣质量mg
W11-未加⼊检验液蒸发⽫质量g
W12-加⼊检验液蒸发⽫质量g
W01-未加⼊空⽩液的蒸发⽫质量g
W02-加⼊空⽩液的蒸发⽫质量g
九、酸碱度
1、配制标准试剂:
0.05mol/L氢氧化钠溶液：0.05mol/L40=2g=0.2g/100ml
称取0.2g氢氧化钠定溶⾄100ml。
①甲基红指⽰液：取甲基红0.1g，加7.4ml氢氧化钠，在超声波完全溶解，再加⽔稀释⾄200ml装⼊试剂瓶。
变⾊范围：PH4.2-6.3（红-黄）试错4-6
溴百⾥⾹蓝：称取溴百⾥⾹酚蓝0.1g，加3.2ml氢氧化钠使溶解，再加⽔稀释⾄200ml装⼊试剂瓶。
变⾊范围：PH6.0-7.6（黄-蓝）
2、分析：取样10ml，加甲基红指⽰液2滴，不得显红⾊，取样10ml，加溴百⾥⾹酚蓝指⽰液5滴，不得显蓝⾊。
PH测定法：
除另有规定外，⽔溶液的PH值应以玻璃电极为指⽰电极，饱和⽢汞电极为参⽐电极的酸度计进⾏测定。酸度计应定期进⾏计量检定，并符合国家有关规定。测定前，应采⽤下列标准缓冲液校正仪器，也可⽤国家标准物质管理部门发放标⽰PH值准确⾄0.01PH各种标准缓冲液校正仪器。
1、仪器校正⽤的标准缓冲液
⑴邻苯⼆甲酸盐标准缓冲液：精密称取在115℃±5℃⼲燥2-3⼩时邻苯⼆甲酸氢钾10.21g，加⽔使溶解并稀释⾄
1000ml（25℃ PH=4.00）。
⑵磷酸盐标准缓冲液：精密称取在115℃±5℃⼲燥2-3⼩时的⽆⽔磷酸氢⼆钠3.55g与磷酸⼆氢钾3.40g，加⽔使溶解并稀释⾄1000ml(25℃ PH=6.86）。plc一体机
⑶硼砂标准缓冲液：精密称取硼砂3.81g(注意，避免风化)加⽔使溶解并稀释⾄1000ml置聚⼄烯塑料瓶中，密塞，避免空⽓中⼆氧化碳进⼊（25℃PH=9.18）。
2、注意事项：
⑴测定前，按各品种项下的规定，选择⼆种PH值约相差3个PH单位标准缓冲液，并使供试液的PH值处于⼆者之间。
⑵取与供试液PH值较接近的第⼀种标准缓冲液对仪器进⾏校正（定位）使仪器⽰值与表列数值⼀致。
⑶仪器定位后，再⽤第⼆种标准缓冲液核对仪器⽰值，误差应不⼤于±
0.02PH单位。若⼤于此偏差，则应⼩⼼调节斜率，使⽰值与第⼆种标准缓冲液的表列数值相符。重复上述定位与斜率调节操作，⾄仪器⽰值与标准缓冲液规定数值相差不⼤于0.02PH单位，否则，需检查仪器或更换电极后，再⾏校正⾄符合要求。
⑷每次更换标准缓冲液或供试液前，应⽤纯化⽔充分洗涤电极，然后将⽔吸尽，也可⽤所换的标准缓冲液或供试液洗涤。
⑸配制标准缓冲液与溶解供试品的⽔，应是新沸过并放冷的纯化⽔，其PH 值应为5.5-7.0。
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