操作步骤:
1) 加1mL冷丙酮(-20℃)至200μL样品溶液,混匀。
2) -20℃放置2 h。
实验室用振荡器
3) -4℃离心15 min。
5) 使沉淀风干,于1-2倍沉淀体积的缓冲液中再悬浮沉淀。 步骤2;
1,cold acetone(-20℃)
2,1体积 样品+4体积冷丙酮;混匀,-20℃过夜
3,12000g离心 10分钟
4,小心吸去上清
5,放在桌上风干,大约20来分钟(自己看着半,剩余的丙酮量不一样,各地方条件也不一样)
6,加1乘的sds sample buffer(量自己根据实验目的定),仔细洗离心管远离转轴侧面的管壁(特别对于微量蛋白)。珊瑚姜votex喷嘴清洗,煮,冷,上样sds-page。
我的步骤:
Protocol:
1.将蛋白样品沸水煮3min,混匀后离心,取250μL钱箱,加入-20℃预冷的丙酮1mL,-20℃冰箱静置3h。 2.-4℃离心(12000r/min)20min,弃上清(直接倒掉)。
3.200μL丙酮洗涤沉淀2次。
4.室温静置风干25min。
氮化铝烧结炉5.加入裂解buffer 20μL,玻璃钢冷却塔图解votex,室温静置2min,加入5μL loading buffer,沸水煮3min。
6.12000r/min离心1min,上样,电泳,考染。