韩伟;杨振宇;谢小珏;顾鸣
【摘 要】为了解辐照对化妆品中微生物的灭菌效果及其影响因素，选择有代表性的化妆品基质和卫生相关微生物构建各种试验组合，采用钴-60的γ辐照源进行不同剂量的辐照处理，通过微生物计数检验辐照的效果。结果发现，各类微生物的D10值，由大至小依次为枯草芽孢杆菌（繁殖体）0．43～0．48，白念珠菌0．40～0．46，金黄葡萄球菌0．35～0．45，铜绿假单胞菌0．26～0．29。6 kGy的辐照剂量可使污染菌量由约107 CFU/g降至10 CFU/g以下，8 kGy及以上的辐照剂量可彻底杀灭污染菌。同等污染水平下，含水量较少的彩妆粉类化妆品需要更高的辐射剂量才可达到相同的灭菌效果，且其中残留微生物的存活时间较长，枯草芽孢杆菌和金黄葡萄球菌在放置15 d后略有增殖。%To analyze the sterilizing effect and influence factors of irradiation process for cosmetics,combinations of typical cosmetic products and hygiene related microorganisms were chosen to be treated with 60 Co gamma ray in different irradiation doses,the survival microorganism number were counted to determine the sterilizing effect. The results showed that theD10 val-ue of microo rganisms descend from 0.43 to 0.48 for Bacillussubtilis,0.40 to 0.46 forcandidaalbicans,0.35 to 0.45 for Staphylococcusaureus,0 .26 to 0 .29 for Pseudomonasaeruginosa. The dose of 6 kGy could reduce the number of total bacteria to less than 10 CFU/g from 107 CFU/g,8 kGy was enough to kill all those bacteria. Under the same initial contaminated con-dition,the makeup powder with less moisture content may need higher irradiation dosage,meanwhile,survival bacteria may live longer,among which the count of Bacillussubtilisand Staphylococcusaureuswould increase slightly.
【期刊名称】《香料香精化妆品》
【年(卷),期】2014(000)001
【总页数】5页(P25-29)
【关键词】化妆品;辐照灭菌;D10值
【作 者】韩伟;杨振宇;谢小珏;顾鸣
【作者单位】上海出入境检验检疫局,上海,200135;上海出入境检验检疫局,上海,200135;上海出入境检验检疫局,上海,200135;上海出入境检验检疫局,上海,200135
【正文语种】中 文
化妆品中一般都含有丰富的营养物质，适宜微生物的生长繁殖，这可能会导致产品变质，有时甚至会出现令使用者皮肤及粘膜感染等危害健康的情况。因此，化妆品相关安全规范中要求控制细菌数量和不得含有致病菌。与添加防腐剂相比，辐照技术无残留，是一种可提高化妆品安全性及延长保质期的灭菌方法，而目前我国辐照加工的研究和应用主要集中在食品及其原料、一次性医疗用品、营养保健品和药品等领域。本试验采用钴-60的γ辐照源对多种化妆品中的多种微生物的消除情况进行了研究，旨在探讨辐照技术对化妆品中微生物的影响并对灭菌效果进行评价。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 化妆品基质
市售FANCL活肤锁水乳霜12 g／支（霜膏类），FANCL活肤锁水乳30 mL／支（乳液类），FANCL水润补湿液30 mL／支（化妆水类），标签均声明不含防腐剂；粉饼用彩妆散粉（彩妆粉类），由生产厂家提供，未添加防腐剂。试验样品均采用《化妆品卫生规范》（2007版）规定的微生物检测方法进行检验，结果均为细菌总数＜10 CFU／g，霉菌和酵母计数＜10 CFU／g，粪大肠菌、金黄葡萄球菌和铜绿假单胞菌未检出。
1.1.2 标准菌株
金黄葡萄球菌（ATCC12600）；铜绿假单胞菌（ATCC9027）；枯草芽孢杆菌（ATCC8090）；白念珠菌（ATCC10231）。
1.1.3 培养基
细菌悬液稀释剂（胰蛋白胨盐溶液）；胰胨大豆琼脂（TSA）；缓冲蛋白胨水；卵磷脂、大豆酪蛋白消化物吐温80—营养琼脂培养基（SCDLPA）；沙氏琼脂（SDA）；改良Letheen肉汤。
1.2 方法
1.2.1 样品制备
防爆波采用无菌操作分装各类化妆品基质至塑料样品管中，每管10 g。将各标准菌株传代2次，分别划线接种于胰胨大豆琼脂上，于35℃培养18～24 h，其中白念珠菌28℃培养36～48 h。使用灭菌接种环，刮取培养基表面细菌悬浮于细菌悬液稀释剂中，以获得细菌悬浮液，使用分光光度计或麦氏比浊仪调整细菌浓度约为3.0×109 CFU／mL。向每种化妆品基质中分别添加0.1 mL的各种标准菌悬液，充分涡旋振荡混匀，使最终浓度约为3.0×107 CFU／g。一种化妆品基质添加一种微生物为一个试验组合，每次试验中每个组合重复5次，记录的试验数据均为5次测定的平均值。
1.2.2 辐照条件
辐照源采用钴-60γ，放射性活度为260万Ci，使用Harwell 3042剂量计进行剂量控制。实际辐照值见表1。
表1 辐照剂量与实际辐照值辐照剂量／kGy 1 2 4 6 8实际辐照值／kGy 1.06～1.07 2.02～2.09 4.02～4.35 6.19～6.46 8.10～8.72
1.2.3 微生物检测手指灯
微生物计数按GB／T24404-2009《化妆品中需氧嗜温性细菌的检测和计数法》进行。
用缓冲蛋白胨水对样品进行10倍梯度稀释，选择2个适宜的稀释度（以预计生长菌落数在15～300 CFU／平板者为宜），吸取其中混匀的悬液1 mL加于无菌培养皿内，每个稀释度接种2个培养皿。倒入15～20 mL冷却至45～48℃的适宜琼脂培养基（金黄葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌采用SCDLPA，白念珠菌采用SDA），小心旋转或倾注平板以使初悬液和／或样品稀释液与培养基充分混合。在室温下，将培养皿放置于水平面上使平皿中的混合物凝固。倒置平板并放入（32.5±2.5）℃的培养箱中，培养（72±6）h后，立即对平板上的菌落进行计数。根据计数规则，将求得的平均菌落值乘以稀释倍数，即得到化妆品中的微生物计数（CFU／g）。
2 结果与讨论
2.1 化妆品基质中的各种微生物的辐照灭菌效果
将添加一定浓度特定微生物的化妆品基质分别用0、1、2、4、6和8 kGy的剂量进行辐照处
理，每个剂量处理设置5个重复。辐照过程中进行辐照剂量跟踪。以0kGy剂量组为对照组，即对应起始菌浓度。各种试验组合的微生物计数均值结果见表2。
渗透印章随着辐照剂量的增加，各类基质中的标准菌量明显减少，起始量为106～107 CFU／g的微生物在4 kGy的辐照剂量下即降至10 CFU／g，8 kGy时被彻底杀灭。
根据辐照基本公式log（N0／N）＝D／D10［1］，以辐照剂量1 kGy和2 kGy计算各种微生物在各种化妆品基质中的D10值（在某一特定条件下使微生物体降至10%所需的处理剂量），结果见表3。
在所有基质中，枯草芽孢杆菌的D10值最大，铜绿假单胞菌的D10值最小。彩妆粉和霜膏类化妆品中微生物的D10值总体较乳液和化妆水中高。
无石棉刹车片2.2 辐照后放置条件对化妆品中微生物的影响伪随机数
将添加一定浓度特定微生物的化妆品样品用2 kGy的剂量进行辐照处理，辐照完成后将样品分别在环境温度10～16℃下保存2、5、10和15 d后检测存活菌数。每个条件下每个组合重复5次，试验数据均为5次测定的平均值。各种微生物在不同化妆品中的数量波动见图1
～ 图4。
表2 不同辐照剂量对试验组合的灭菌效果 CFU／g化妆水金黄葡萄球菌 7.0×106 1.1×10410 0 0 0铜绿假单胞菌 3.0×107 4.4×103 6 0 0 0枯草芽孢杆菌 5.8×106 4.2×104 210 2 0 0白念珠菌 4.3×106 1.5×104 100 0 0 0彩妆粉金黄葡萄球菌 8.2×106 5.2×104 340 24 2 0铜绿假单胞菌 3.0×107 1.1×104 50 21 0 0枯草芽孢杆菌 5.2×106 3.2×104 380 10 0 0白念珠菌 5.6×106 3.2×104 250 10 2 0
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