防爆蓄电池缓冲液和溶液
50 mM Tris-HCL(pH 8.0)
10 mM EDTA(pH 8.0)
mide008
乙醇
裂解缓冲液
10 mM Tris-HCL(pH 8.0)
0.1 M EDTA(pH 8.0)
0.5% （m/V）SDS
20ug/mg 无Dnase 的胰RNase
苯酚，用0.5 M Tris-HCl(pH 8.0) 平衡
TE(pH 8.0)
Tris-缓冲盐溶液（TBS）
酶和缓冲液
蛋白酶K（20mg/ml）
实验方法：
1、⑴将长满单层细胞的培养皿从孵箱中取出，吸取上清，并用冰冷的TBS洗2次，吸尽洗涤液（冰上操作）。
（2）加入1ml 新鲜的冰冷的TBS，将培养皿置于冰上。
（3）用一橡胶刮棒将细胞刮入1 ml TBS中。将细胞悬液移到冰上的离心管中。用0.5ml冰冷的TBS冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。 （4）4℃1.08b 1500g离心10min已收集细胞。
（5）将细胞重悬于5-10倍体积的冰冷TBS中并再度离心。
（6）用TE(pH 8.0)重悬细胞至浓度为5 X 10 7个/ml，转移至一个三角锥瓶中。
（7）每毫升细胞悬液加10ml裂解缓冲液，并于37球头挂环℃孵育1h，立即进行下一步。
2、将裂解液转移至一个离心管中，裂解液不能超过1/3体积。
3、加入蛋白酶K（20mg/ml）至终浓度100ug/ml。用一玻棒温和的将酶混入黏滞的细胞裂解液中。
4、将细胞裂解液置于50℃水浴中3h，不时旋转黏滞的溶液。
5、将溶液冷却至室温，加入等体积的用0.1 M Tris-HCl(pH 8.0)平衡过的苯酚。将离心管置于旋转器上，使离心管缓慢颠转10min以温和地混匀两相。如此时两相未能形成乳浊液，则将离心管置于旋转器上1h。
6、室温 5000g离心15min以分离两相。
7、将黏滞液的水相转移至另一离心管。
网邻
hcpl26308、用苯酚在抽屉两次，收集水相。
9、第三次用酚抽提后，将水相转移至另一离心管中。加入两倍体积的无水乙醇，旋转离心管至溶液彻底混匀为止。
10、DNA随即形成沉淀。室温5000g 离心5min收集沉淀。 11、用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次，室温5000g 离心5min收集沉淀。
12、尽可能去除残余的乙醇。于室温将DNA沉淀于敞开的管内，直至可见的痕量乙醇挥发殆尽。
13、按每0.1ml细胞（步骤1）加入1ml TE。将其置于摇床平台上，于4℃温和振摇12-24h直至DNA完全溶解。将DNA溶液储于4℃。
14、测定DNA的浓度。
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