千⾥之⾏，始于⾜下！样本的正确收集以及预处理是实验成功的重要起点，⿅明⽣物具有多年代谢组学分析经验，给您带来⽣物样本收集以及预处理经验的⼲货分享。
取样基本原则
代表性和⼀致性
实验组与对照组样本在取材部位、时间处理等⽅⾯尽可能保持⼀致，从⽽保证实验的可信度；
迅速性
操作过程迅速，最⼤限度缩短样本采集到实验的时间；
低温原则
所有样本离体后，分离步骤应在4℃或冰上进⾏，分离好的样本⽴即存于-80℃，以免样本产⽣进⼀步代谢活动；
⾎液样本收集指南
⾎清：
明框玻璃幕墙1）⽤促凝管（没有促凝管则⽤离⼼管）收集⾎液，将促凝管/离⼼管直⽴、静置于试管架上，避免振荡、摔落；
2）避免阳光直射，室温；
3）检查凝⾎完全后，2500 ~ 3000 rpm，4℃低速离⼼5 min，吸取200 µL上清液⾄1.5 mL离⼼管中，若上清液较多可每管200 µL、多管分装，于-80 ℃冻存待⽤；
4）严禁反复冻融，如发⽣溶⾎则该样本不合格、需重新准备样本。合格样本⽤⼲冰运输。
⾎浆：
1）⽤抗凝管采⾎，采⾎后⽴刻轻柔上下颠倒8次，使抗凝剂与⾎液均匀混合（动作轻柔，以避免产⽣溶⾎）；
2）2500 ~ 3000 rpm，4 ℃低速离⼼5 min，吸取200 µL上清液分装⾄1.5mL离⼼管中，-80 ℃冻存待⽤；
3）⾎液样本采集后应⽴即把⾎浆从全⾎中分离出来，最晚不迟于采⾎后1 h内分离出⾎浆。合格样本⽤⼲冰运输。
温馨提⽰：
（1）试管的使⽤
涉及到RNA等的多组学实验取样，请勿使⽤肝素钠抗凝管（对 RNA 相关实验有严重影响，抑制反转录酶活性⽽导致cDNA量不⾜）；
核磁实验（NMR）请勿使⽤EDTA抗凝管（影响图谱采谱）；
代谢实验取样不建议使⽤柠檬酸钠抗凝管（柠檬酸是TCA循环中的重要物质，使⽤柠檬酸钠抗凝剂会引⼊外源污染），请根据实验具体情况选⽤合适的抗凝管。
顶空瓶（2）影响因素
取⾎时如⽤酒精消毒，请擦⼲擦拭部位，待酒精完全挥发后再取样；
取⾎时如有使⽤⿇醉剂，建议⽤异氟醚消毒，以避免在谱图中出现⼲扰峰。
（3）产率
⾎清参考产率：30% ~ 50%（例如：1 mL 全⾎⼤约能得 0.3 ~ 0.5 mL ⾎清）。
⾎浆参考产率：≈ 50 %（例如：1 mL全⾎⼤约能得 0.5 mL ⾎浆）。
采全⾎时如使⽤真空采⾎管，建议使⽤促凝管。
（4）冻存管的使⽤
强烈推荐收集尽量多的样本并分装冻存（同批次样本可以⽤于多项实验，且避免反复冻融⽽导致结果不理想），分装保存时推荐使⽤1.5 mL离⼼管，因为螺⼝冻存管帽内有⼀个密封⽤的橡胶垫圈，长期
在-80 ℃/⼲冰等低温下，橡胶圈会变硬脆、易脱落，导致管⼝密封不严，样本渗露。
粪便样本收集指南
⼈粪便：
1）将粪便直接排泄到⼲净的容器中，尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染，取同时间段样本或将所有样本混匀后再取样；
2）⽤⽆菌勺对粪便样本进⾏挖取，将适量粪便样本放⼊⽆菌保存管中，分装样本200 mg/管，迅速放⼊液氮中15min以上进⾏淬灭处理；
3）采集好的样本⽴刻放⼊-80 ℃保存待⽤。
⼩⿏/⼤⿏粪便：
1）将待取的⼩⿏/⼤⿏放进⼲净的铺有消毒滤纸的笼⼦⾥，排便后⽴即⽤⽆菌镊⼦转⼊冻存管；
2）⼩⿏粪便6-8粒，⼤⿏粪便2-3粒；
3）若样本需要重复检测，可⽤⽆菌棒混匀后多管分装，以避免反复冻融，样本采集后⽴刻放⼊-80℃
保存待⽤。
温馨提⽰：
1.粪便样本尽量不要接触到尿液，避免多样本交叉污染，且尿液中含有⼤量尿素，⼲扰后续粪便样本检测。
2.粪便样本收集之后，建议先放⼊液氮中淬灭15 min后，再放⼊-80 ℃冻存。
3.建议统⼀粪便样本形态（如固态、液态（粪⽔）、冻⼲粪便等）
4.⼈粪便样本提供者在取样的近三个⽉内不可接受抗⽣素。
焦磷酸盐尿液样本收集指南
尿液：
1）取空腹晨尿、中段尿（临床）或晨间1 h尿（动物）于50 mL离⼼管中；
2）4 ℃下10000 rpm离⼼10 min取上清，⽤1.5 mL离⼼管分装，保存于-80 ℃。
3）动物1 h尿量不够的情况下，可分多次收集尿液；如需收取24 h尿液，需要使⽤带低温装置的代谢笼收集，并且及时冻存样本。
4）收集完尿液样本后，建议使⽤液氮淬灭15 min后，再分装多管后于-80 ℃冻存。
组织样本收集指南
动物组织（包括脑、⼼、肝、脾、肺、肾、肌⾁和⽪肤等；软体动物如⾎吸⾍）：
1）取适量组织器官，⽤预冷的PBS缓冲液或⽣理盐⽔清洗⼲净；
2）迅速剥去⾮必需的脂肪和结缔组织，再⽤PBS缓冲液或⽣理盐⽔冲洗⼲净；
ir油墨3）⽤⼲净的⽆尘吸⽔纸吸⼲⽔分，将组织分成50-100 mg / 管分装待⽤；
4）管⼦上做好标记后迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15 min，-80 ℃冻存；⼲冰运输。
植物组织：
叶⽚、茎、花：
1）取整⽚叶⽚/⼀段茎/⼀朵花，放⼊离⼼管或锡箔纸中并标记，迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15 min。
2）将装有样本的离⼼管迅速放⼊⾃封袋中（每组⼀袋），在⾃封袋中放⼊标签纸注明样本信息。
3）迅速放⼊-80 ℃冰箱冻存。⾜量⼲冰寄送。
洗瓶注意：（1）采集叶⽚样本时，最好在中午光照好的时间收集。（2）采集样本时保持样本⼀致性，尤其是同⼀组样本（颜⾊、衰⽼程度、叶脉占⽐、光照、位置等）。
根：
1）取整株植物的根部，迅速⽤PBS缓冲液或者超纯⽔漂洗掉根上的泥⼟、培养基或营养液等；
2）吸⽔纸吸⼲⽔分后，分装为500 mg/管；
3）标号后迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15 min，-80 ℃冻存，⼲冰寄送。
果实、种⼦：
1）对于含⽔量⾼、体积较⼤的果实（番茄、西⽠、苹果等）需要先将样品分成“均匀”的⼩块(≈ 200 mg/样本)分装⾄2 mL离⼼管中，标号后迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15 min。
2）对于细⼩的颗粒种⼦(拟南芥种⼦、⾕物种⼦等)，可以先将同⼀组的植株种⼦混匀后再分装(≈ 200 mg/样本)⾄离⼼管中，标号后迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15 min。
3）对于要求对整个果实进⾏提取的（整粒葡萄等），需要把果实装在50 mL离⼼管/⾃封袋中，标号后迅速放⼊液氮中冷冻处理⾄少15min，-80 ℃冻存，⼲冰寄送。
温馨提⽰：
1.对于动物组织样本⽆法满⾜50mg/样，如海马组织，⼤脑组织等，可考虑同组混样以达到50mg/样的要求。
2.对于含⽔量⾼的果实进⾏取样很难保持⾼度均⼀性（如番茄的果⽪、果⾁等），建议将整个果实进⾏液氮研磨后冻⼲混匀，对混匀后的粉末进⾏称重分装，冻存。
3.尽量不要使⽤锡箔纸以及⾃封袋包装样本，建议将样本液氮研磨后使⽤离⼼管/冻存管进⾏分装。
4.在使⽤PBS缓冲液/超纯⽔进⾏漂洗时，需要尽快处理。
5.植物各类组织样本建议都使⽤超纯⽔进⾏漂洗完之后，再研磨分装冻存，防⽌因种植过程中施加的⼀些肥料、农药等含有表⾯活性剂或其他杂质，对后续实验造成影响。
悬浮细胞
1）连同培养基转移到1.5 mL的进⼝离⼼管中。
2）低速离⼼5 min（低于3000 rpm），使细胞沉淀于离⼼管的底部（1*107个细胞为宜）。
3）倒掉培养基（尽量倒⼲净），⽤预冷的PBS反复冲洗2 ~ 3次，低速离⼼5 min，弃上清。
4）标记离⼼管，将离⼼管的尖端插⼊液氮中，淬灭细胞沉淀1 min，-80 ℃冻存，⼲冰寄送。
贴壁细胞：
1）⼩⼼弃掉培养液，并将培养⽫倒置于吸⽔纸上尽量吸⼲培养液；
2）加⼊4 ℃预冷的PBS平放轻轻摇动1分钟洗涤细胞（若⽤移液加，则靠着培养⽫壁加⼊，以免将细胞冲起），然后弃PBS（建议⽤微量移液器少量多次吸尽残余PBS）；
3）将培养⽫底部（外壁）接触液氮，淬灭细胞（1*107个细胞为宜），加⼊500 µL预冷的甲醇-⽔（4：1，V/V），⽤⼲净的细胞刮棒将细胞刮下，⽤移液转移⾄1.5 mL离⼼管
⼲净的细胞刮棒将细胞刮下，⽤移液转移⾄1.5 mL离⼼管
4）继续加⼊500 µL甲醇-⽔（4:1，V/V），将剩余的细胞尽量全部转移⾄离⼼管中，使⽤封⼝膜将离⼼管密封，保存于-80 ℃，⼲冰寄送。
温馨提⽰：
1. 培养基倾倒时尽量倒⼲净，可使⽤滤纸将残留培养液吸净；
2. 甲醇/⽔请使⽤⾊谱纯及以上规格；
3. 液氮淬灭细胞时，请⼩⼼避免离⼼管破碎导致样本受损;
4. 建议细胞样本在进⾏培养时多准备样本，以备后续使⽤;
5. 贴壁细胞收集时如遇培养⽫较⼤，1 mL试剂⽆法完全转移完全时，建议加⼊最⼤试剂体积不超过 3mL;
6. 若⽆试剂条件，也可在淬灭细胞后，不加⼊甲醇-⽔试剂，直接⽤⼲净的细胞刮棒将细胞刮下，转移⾄离⼼管;
其他类型样本收集指南
微⽣物样本
适⽤样本：⼤肠杆菌、枯草杆菌、酿酒酵母菌、恶臭假单胞菌、酵母、棒杆菌属、单胞藻、运动发酵单胞菌、氧化葡萄糖酸杆菌等。
1）连同培养基转移到进⼝的15 ml的离⼼管中，3000 rpm以下低速离⼼，使细菌沉淀于离⼼管的底部（1*108个细菌为宜）；
2）倒掉培养基（尽量倒⼲净）后，⽤预冷的PBS溶液⼩⼼重悬清洗沉淀⼀次，4 ℃ 1000 g离⼼10 min收集菌体，弃上清；
4）将离⼼管的尖端插⼊液氮中，淬灭细菌1 min，然后-80 ℃冻存，⼲冰邮寄，每个样品最好准备两管以备⽤。
温馨提⽰：
（1）请先拿空离⼼管的尖端插⼊液氮中试试离⼼管的质量，避免因离⼼管破裂造成样本损失。
（2）操作尽量迅速，培养基尽量倒⼲净，可⽤滤纸条将管底部残留的培养基吸尽。
（3）微⽣物代谢速度⾮常快，所有的步骤需尽快完成。
（4）菌体数量不同的样本间需要保持⼀致。
（5）菌液的OD值仅供参考，需要根据具体情况确认菌浓度。
微⽣物培养液（检测胞外代谢）:
⽅法⼀：
培养好的菌液混匀后，取10 mL菌液，⽤0.2 µm孔径的过滤膜进⾏快速抽滤，去除菌体。将滤液按1 mL/管进⾏分装，‐80 ℃冻存，⼲冰寄送。
微波烧结
⽅法⼆：
豫公网安备41160202000603
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