一、课程概述
课程名称（中文）：生物化学实验
（英文）：Biochemistry Experiment
课程编号：
课程学分：1.0
课程总学时：30
课程性质：科类基础课
前修课程：无机化学实验，有机化学实验
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二、课程内容简介（300字以内）
生物化学是农学、畜牧学、生物学等各专业相关课程的重要基础课程，是一门实验性很强的学科，其生物化学实验课在生物化学教学中占据重要地位。生物化学实验紧密围绕生物化学实验技术的教学需求，主要针对蛋白质、酶、核酸、脂类、糖、维生素等生物分子的分离、提取、分析、鉴定和定量测定技术等内容进行课程实验项目的设计和教学，加强学生对生物化学实验技术的学习，巩固和掌握生物化学实验技术的基本理论、基本知识、实验技能，提高学生创新思维意识、综合分析问题和科学实验的能力，鼓励学生将所学知识运用于实际工作中去。 三、教学目标与要求
生物化学实验是农业院校重要的专业基础课程，是培养学生创新精神、实践能力的重要平台，是塑造高层次农业科技专门人才的基本环节之一。通过该课程的学习后，学生能够掌握生物化学实验的基本原理和操作方法，能够独立进行实验并具有发现问题和解决问题的能力，能够根据实验记录，结合理论知识，合理地分析结果，并学习对实验中出现的问题进行讨论，提出解决方案或改进措施。总的目标是提高学生综合分析能力，培养学生熟悉科学研究的基本程序和基本思维。
四、学时分配
生物化学实验课学时分配
实验项目名称 | 学 时 | 实验类别 | 备 注 |
酶促转氨反应的分析鉴定 | 3 | 验证性实验 | |
琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 | 3 | 验证性实验 | |
种子皮中VBl的提取与鉴定 | 3 | 验证性实验 | |
3，5－二硝基水杨酸比法测定还原糖含量 | 3 | 验证性实验 | |
酵母RNA的提取及组分鉴定 | 3 | 验证性实验 | |
醋酸纤维素薄膜电泳及凝胶层析法分离蛋白质 | 4 | 综合性实验 | |
牛奶中酪蛋白的提取及定量测定 | 6 | 综合性实验 | |
外界因素对酶活性的影响 | 5 | 设计性实验 | |
糖酵解中间产物的鉴定 | 3 | 验证性实验 | 选修 |
酵母蔗糖酶的纯化效果分析 | 6 | 综合性实验 | 选修 |
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 | 5 | 设计性实验 | 选修 |
合 计 | 30（不含选修） | | |
| | | |
注：生物化学实验课程总计1学分，安排8次实验（不含选修），其中验证性实验占62.5%，综合性、设计性实验占37.5%。
五、教学内容与安排
实验一：酶促转氨反应的分析鉴定(3学时)
（一）实验目的：
通过本实验掌握纸层析的一般原理和方法；掌握利用纸层析研究代谢的基本方法，了解酶促转氨反应在中间代谢中的意义。
（二）实验主要仪器：
层析缸；培养皿；电吹风机；烘箱；恒温水浴锅；培养皿；毛细管；研钵；针、线。
（三）实验内容与方法：
1. 提取材料的酶液；
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2. 用纸层析法鉴定酶促转氨反应中转氨基产物丙氨酸的存在与否；
3. 通过计算其Rf并与标准氨基酸对照，判断反应产物样品的氨基酸组成。
（四）作业（思考题）：
1. 计算各种氨基酸的Rf值并用以判断产物氨基酸的组分。
2. 人体内的转氨酶主要有哪两种，测定它们的临床意义是什么？
3. 对照和测定管显现的斑点有何不同？它们分别代表何物质？请说明理由。
实验二：琥珀酸脱氢酶酶的竞争性抑制作用(3学时)
（一）实验目的：
理解丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用，掌握测定琥珀酸脱氢酶活性的简易方法及原理。
（二）实验主要仪器：
试管及试管架；解剖剪刀；滴管；组织捣碎机（或研钵）；恒温水浴锅。
（三）实验内容与方法：
1. 从新鲜材料中提取琥珀酸脱氢酶液；
2. 以加入丙二酸的试管为对照，观察甲烯蓝被还原生成无的甲烯白的变化过程；
3. 根据褪时间计算琥珀酸脱氢酶相对活力。橡胶软化油
（四）作业（思考题）：
1. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶是否有干扰？为什么？
2. 说明实验中各管的变情况，并加以解释。
马铃薯馒头3. 未加丙二酸的试管观察到褪后，振荡试管，会有什么现象？为什么？
实验三：种子皮中VBl的提取与鉴定(3学时)
（一）实验目的：
掌握VBl的提取和鉴定方法，理解VBl的作用原理及功能。
（二）实验主要仪器：
台秤；滤纸；漏斗；试管及试管架；滴管；移液管；量筒；UV灯。
（三）实验内容与方法：
1. 提取种子皮（米糠）中的VBl；
2. 分别用重氮试剂法和用荧光法观察鉴定标准管和样品管VBl。
（四）作业（思考题）：
1. 用目测结果颜深浅，比较标准硫胺素与米糠中含维生素B1的量。
2. 维生素B1在生物体内谢中的作用是什么？维生素B1缺乏有何症状？
实验四：3，5－二硝基水杨酸比法测定还原糖含量(3学时)
（一）实验目的：
熟悉722型分光光度计的原理及使用方法，掌握3，5一二硝基水杨酸比法测定糖的原理及操作方法。
（二）实验主要仪器：
722S型分光光度计；恒温水浴锅；大试管和大试管架；容量瓶（100mL）；玻璃漏斗和纱布、滤纸；移液管和移液管架。
（三）实验内容与方法：
1. 称取苹果，研磨、保温、过滤；
2. 蒸馏水定容，并制作标准还原糖工作曲线；
3. 利用3，5一二硝基水杨酸比法测定苹果中还原糖的含量。
（四）作业（思考题）：
1. 写出3，5-二硝基水杨酸的化学结构式。
2. 依据还原糖的标准曲线，计算提取材料中还原糖含量。
3. 比测定时为什么要设空白管？如何减少该实验误差，提高测定准确度？
实验五：酵母RNA的提取及组分鉴定(3学时)
（一）实验目的：
掌握RNA的提取方法，掌握核酸粗品中各组分的鉴定方法。
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（二）实验主要仪器：
离心机；天平；电炉；试管；玻棒；移液管和移液管架。
（三）实验内容与方法：
1. 称取干酵母；
2. 加入NaOH(0.2％)提取，用95%乙醇将溶液沉淀，离心，沉淀为粗RNA，酸溶解沉淀；3. 煮沸的水解液用于核酸粗品中各组分的鉴定（苔黑酚法鉴定RNA,二苯胺鉴定DNA及蛋
白质等组分的鉴定）。
（四）作业（思考题）：
1. 本实验采用的稀碱法提取的物质是不是RNA？其中还包含哪些杂质？
2. 你能知道CuO或FeCl3·6H2O在地衣酚法测定RNA中的作用吗？
实验六：醋酸纤维素薄膜电泳及凝胶层析法分离蛋白质(4学时)
（一）实验目的：后挂式耳机
学习醋酸纤维素薄膜电泳及凝胶层析法分离蛋白质的基本原理；掌握醋酸纤维素薄膜电泳及凝胶层析法分离蛋白质的基本操作。
（二）实验主要仪器：
层析柱（1cm×20cm）；电泳仪和电泳槽；点样器和点样棒（自制）；胶头滴管；玻棒；烧杯（50mL）；铁架台；培养皿；白瓷盘；镊子；直尺和铅笔；普通滤纸；吹风机。
（三）实验内容与方法：
1. 取经缓冲液（pH 8.6）浸泡的醋酸纤维薄膜为支持物，点样器蘸取血清样品在膜的毛面点样；
2. 将醋酸纤维薄膜放放置于水平电泳槽电泳，经染、漂洗；
3. 观察分析动物血清的主要成分，电泳时间，装凝胶层析柱，分离动物血红蛋白。
（四）作业（思考题）：
1. 将你做的电泳图谱贴在实验报告上，标出各区带名称，并对各区带的清晰程度和区带的排序进行。
2. 利用图或表格形式描述凝胶层析法各管收集液，并分析各是什么物质。
3. 比较凝胶层析法和电泳法分离混合样异同，操作中怎样才能得到较好的分离效果？
实验七：牛奶中酪蛋白的提取及其定量测定(6学时)
（一）实验目的：
学习用等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白的方法，加深对蛋白质等电点性质的理解；学习双缩脲法定量测定蛋白质浓度的基本原理与技术。
（二）实验主要仪器：
722S型分光光度计；离心机；循环水真空泵；抽滤瓶；布氏漏斗；研钵；烘箱；表面皿；量筒；容量瓶；刻度吸管；烧杯；试管及试管架；滴管。
（三）实验内容与方法：
1. 以市售液体牛奶为材料，综合分离、提取、制备、鉴定和定量测定牛奶中酪蛋白的方法；
2. pH沉淀反应测定酪蛋白等电点，双缩脲法测定提取酪蛋白浓度，并计算提取得率。
（四）作业（思考题）：
1. 何谓蛋白质等电点？为何蛋白质在等电点时溶解度最低？
2. 计算酪蛋白提取得率；
3. 计算双缩脲法测定的酪蛋白浓度。
实验八：外界因素对酶活性的影响(5学时)
（一）实验目的：
以外界因素对唾液淀粉酶活性的影响为实验主题，在老师的指导下，学习生物化学实验设计的方法、步骤；为适应学生多元化学习，教学中设计方案可体现分层次要求。
（二）实验主要仪器：
冰箱；恒温水浴锅；电炉；试管架及试管；移液管及管架；白瓷板。
（三）实验内容与方法：
1. 以唾液为实验材料，围绕“外界因素对唾液淀粉酶活性影响”主题，查阅相关资料；
2. 撰写实验设计报告：基本要求实验设计中，针对唾液淀粉酶活性的主要影响因素pH、温
度、酶浓度等设计不同梯度，如用淀粉遇碘液变检测唾液淀粉酶活性方法，分析外界因素对酶活性的影响；或较高要求，采用正交设计，寻唾液淀粉酶活性达到最佳的实验条件；
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