名词解释
1 DNS试剂:3,5-二硝基水杨酸试剂,与还原糖共热后被还原成棕黑的化合物
2 Km:米氏常数,是酶的一个特征常数大小反映了酶与底物亲和力的强弱。
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Vmax:是酶被底物饱和时的反应速度,Km值的物理意义为反应达到1/2Vmax的底物浓度再增加底物对反应速度没有什么影响。反应速度逐渐趋近的恒定值称为最大反应速度Vmax。3 还原糖:是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的蛋汤和某些二糖(如乳糖和麦芽糖)。
4 gel filtration:凝胶层析法,是利用凝胶吧分子大小不同的物质分离开的一种方法,又叫做分子筛层析法,排阻层析法。 5 Acr:丙烯酰胺,可与少量的交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis),在催化剂的作用下聚合交联而成三维网状的聚丙烯酰胺凝胶。
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6 酶的比活力:在特定条件下,单位重量(mg)蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。
7 酶的活力单位:药物枕头 是指在特定条件下(25℃、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔底物转化所需要的酶量。
8 电泳:带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极移动的现象。
9 层析(谱):用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱,使混合物各组分以不同速度移动,从而达到分离的一种物理方法。
10 分子筛效应:凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。
11 电泳的原理:电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质
以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
12 凝胶过滤层析的原理:一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析具有分子筛效应
13 按层析过程的机理,层析法分哪几类?按操作形式不同又分哪三类?:根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。卫星接收按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。
14 可见分光光度计的使用注意事项?:(1) 使用过程中比皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。比皿应该避免磨损透光面。
(2) 使用过程中不得打开盖子,保持仪器清洁,为避免溶液洒落对仪器造成的腐蚀,所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作。比皿放进样品池之前必须把外表面擦干。(3)当(仅当)操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时,应该立即关断主机电源,重新启动,但无须关断灯源电源。(4)光学器件和仪器运行环境需保护清洁。清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。 15 蛋白质含量测定的常用方法有那些?:(1)微量凯式定氮法。(2)双缩脲法。(3)folin-酚试剂法。(4)紫外分光光度法。(5)考马斯亮蓝染法。
16 双倒数法测定米氏常数的基本原理: Lineweaver和Burk将米氏方程改写成倒数形式:
17 聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点?:
①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。电渗作用比较小,不易和样品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,在聚合前可调节单体的浓度比,形成 不同程度交链结构,其空隙度可在一个较广的范围内变化,可以根据要分离物质分子 的大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性质。
③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无透明,易观察,可用检测仪直接测定。
④丙烯酰胺是比较纯的化合物,可以精制,减少污染。
18 如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA?(6分):(1)用定糖法检测。(2)用紫外分光光度计检测。(3)用琼脂糖凝胶电泳检测。等
19 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时,使用的电泳缓冲液PH=8.3,那么样品应点在哪端?为什么?(6分):样品应点在负极端,因为电泳缓冲液PH=8.3,在这样的环境中,血清蛋白的几种蛋白质电离后都带上负电荷,所以只有点样在负极端,外加电压后,才能向正极移动,彼此才能分开。
20 凝胶电泳的一般操作步骤(11分):制胶,加入电泳缓冲液,加样,电泳,剥胶,染,脱。
21 要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液应如何配制?(10分):准确称量0.2gNaOH用少量蒸馏水溶解,然后转入500ml的容量瓶中,再用蒸馏水少量多次(至少3次)洗涤烧 杯,都转入容量瓶中,最后定容至刻度线,盖好容量瓶后混匀即可。
深水采样器22 PI: 指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值,用符号pI表示。
电伴热带温控23 层析:按照在移动相和固定相(可以是气体或液体)之间的分配比例将混合成分分开的技术。
24 同工酶:能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。
25 DNA变性:DNA双链解链,分离成两条单链的现象。
26 Sanger试剂是2,4-二硝基氟苯
27 肽键在下列哪个波长具有最大光吸收?215nm
28 酶的活化和去活化循环中,酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上?丝氨酸
29 通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量,这是因为蛋白质分子中的Trp、Tyr、phe三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力
30 移液在每次实验后应将刻度调至最大,让弹簧回复原型以延长移液的使用寿命,并严禁吸取强挥发性、强腐蚀性的液体。
31 测定蛋白质浓度的方法主要有双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法
32 在分光光度计的使用或检定中,透射比或吸光度的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。透射比或吸光度的误 差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。