摘要：本篇论文主要论述了如何制作日本血吸虫的动物模型。先简述了日本血吸虫在我国的流行情况，以及建立该模型的意义。论述了日本血吸虫的生活史。简要写了该实验所需的物品以及该实验的目的原理。详细地论述了该实验的实验步骤，包括尾蚴从钉螺体内逸出，用尾蚴感染小白鼠，饲养小白鼠已经观察饲养后的结果。最后分析了实验结果以及论述了该实验的注意事项。 牌位架关键词：尾蚴、感染、饲养、镜检
日本血吸虫是我国唯一寄生于人体的血吸虫，在我国的存在至少有2100多年的历史了，是我国重点防治的寄生虫之一。2010年，全国估计血吸虫32万多人，其中晚期血吸虫病人3万余人，98%以上的病人分布于江苏，安徽，江西，湖北等五省【1】。日本血吸虫寄生于人或其他哺乳动物的门脉系统中，主要寄生于肠系膜下静脉内，血吸虫病是一种危害严重的人兽共患病, 其对宿主机体的损害主要来自于虫卵所致的肝脏和肠道肉芽肿以及免疫病理反应【2】。所以，建立日本血吸虫动物模型可以帮助我们了解日本血吸虫在人和动物体内发育过程中的形态以及对宿主的病理损伤。 目的与要求：
1、掌握日本血吸虫的主要感染途径，寄生部位，感染阶段和致病阶段。
2、掌握日本血吸虫的形态和病变肝肠形态，认识其危害性，积极预防。
原理：
日本血吸虫成虫寄生于人及多种哺乳动物的门脉－肠系膜静脉系统。雌虫产卵于静脉末梢内，虫卵主要分布于肝及结肠肠壁组织，虫卵发育成熟后，肠粘膜内含毛蚴虫卵脱落入肠腔，随粪便排出体外。含虫卵的粪便污染水体，在适宜条件下，卵内毛蚴孵出。毛蚴在水中遇到适宜的中间宿主钉螺，侵入螺体并逐渐发育。先形成袋形的母胞蚴，其体内的胚细胞可产生许多子胞蚴，子胞蚴逸出，进入钉螺肝内，其体内胚细胞陆续增殖，分批形成许多尾蚴。尾蚴成熟后离开钉螺，常常分布在水的表层，人或动物与含有尾蚴的水接触后，尾蚴经皮肤而感染。尾蚴侵入皮肤，脱去尾部，发育为童虫。童虫穿入小静脉或淋巴管，随血流或淋巴液带到右心、肺，穿过肺泡小血管到左心并运送到全身。大部分童虫再进入小静脉，顺血流入肝内门脉系统分支，童虫在此暂时停留，并继续发育。当性器官初步分化时，遇到异性童虫即开始合抱，并移行到门脉－肠系膜静脉寄居，逐渐发育成熟交配产卵。简而言之，它的生活史主要包括成虫产卵及卵的排出、毛蚴的孵化、幼虫在钉螺体内
的发育繁殖、尾蚴逸出及侵入宿主、皮虫定居及营养摄取。
实验材料：
载玻片、盖玻片、滴管、小口三角烧瓶、尼龙筛、生理盐水、清水、眼科剪、剪毛器、眼科镊子、小白鼠固定架、玻璃切割器、乳胶手套、污物桶、棉球、玻璃分针等。
实验动物：
阳性钉螺十颗、小白鼠二十只。
实验仪器：
显微镜、光照孵化箱。
实验步骤:
一、将十颗阳性钉螺放于小口三角烧瓶内，加上清水，使水温保持在20~25摄氏度，水的PH值保持在6.6~7.8之间，盖上尼龙筛，放入光照孵化箱中，2~3小时后，尾蚴便可从钉螺体内释放，漂浮于水面。
二、取二十只小白鼠，十只为实验组，十只为对照组，分别对它们进行标记编号。实验组采用腹部贴片法感染小白鼠。将小白鼠牢固系于小白鼠固定架上，腹部朝上，用剪毛器剃去腹毛，再用清水打湿小白鼠腹部，用棉球擦拭干净。用玻璃分割器分割载波片与盖波片。用滴管轻轻地吸取小三口烧瓶水面上漂浮的尾蚴，滴于盖玻片上，通过显微镜的解剖镜选取尾蚴，每只实验小鼠选取40条左右的尾蚴。再用眼科镊子夹取盖玻片分别贴于各实验小白鼠腹部，对照组的实验小鼠贴蘸有等量生理盐水的盖玻片，静置20分钟移去所有的玻片，再次通过显微镜观察是否盖玻片上是否有遗留尾蚴，从而精确计算感染量。将用完的垃圾放入污物桶内。
三、释放小鼠，与对照组小鼠以相同的饲料饲养一月左右。
四、一个月后，处死小白鼠，带上乳胶手套，将小白鼠固定在小鼠固定架上，腹部向上，用剪毛器剪下小白鼠腹部的毛，再用眼科剪沿中线将小白鼠皮肤肌肉剪开，小心用玻璃分针剥离。再用眼科镊子牵开肠管暴露肠系膜静脉和肝门静脉，仔细观察血管内有无成虫，用眼科剪剪开血管，将成虫挑于盛有生理盐水的培养皿中。再用眼科剪取约米粒大小的肝脏或肠壁粘膜组织，将组织固定后，置于生理盐水中处理6～20min，解离后用水漂洗。将
组织放在载玻片上，加一滴清水，盖上盖玻片用拇指轻轻压片。最后将制作好的切片放在显微镜下观察虫卵。
实验结果：
实验组小白鼠体内有成虫，并产下虫卵。显微镜下可见实验组小白鼠肝脏组织虫卵散布沉积, 部分汇管区内虫卵聚集成簇,汇管区及虫卵周围有大量淋巴细胞及嗜酸性粒细胞浸润,形成散在的急性虫卵肉芽肿【3、4】, 虫卵肉芽肿周围可见少量胶原纤维,部分区域可见肝细胞灶性凝固性坏死。肠壁黏膜下层发现虫卵沉积,虫卵周围出现肉芽肿反应。肉芽肿由多核巨细胞、纤维细胞和少量淋巴细胞组成。虫卵沉积区均有不同程度的纤维组织包裹黏膜破碎, 虫卵已死亡并钙化。肠壁内虫卵密度较高。而在培养皿中可以观察到成虫的外形及雌雄合抱情况。至于对照组小鼠各组织都很正常。
结果分析：
通过实验组小鼠和对照组小鼠的实验结果可以了解到，本次建立了小白鼠感染日本血吸虫的动物模型比较成功, 可以看到虫体发育成熟, 雌雄合抱, 并产卵, 肝脏和肠壁可见虫卵性结
节【5】, 导演椅该模型的建立帮助我们了解了日本血吸虫在人和动物体内发育过程中的形态以及对宿主的病理损伤。
注意事项：
1、用清水培养钉螺孵化尾蚴是，要使使水温保持在20~25摄氏度，水的PH值保持在6.6~7.8之间，这样才有利于钉螺中的尾蚴顺利释放。
2、用尾蚴玻片感染小白鼠后，要再次通过显微镜观察是否盖玻片上是否有遗留尾蚴，从而才能精确计算感染量。
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3、用玻璃分割器沿中线将小白鼠皮肤肌肉剪开，剥离时，不能伤到小鼠内脏，要注意有无腹水外溢。
参考文献:
【pe导电母粒1】梁玉芬，汤冬生，人体寄生虫学，科学出版社，2012年8月
【2】 郭俭, 钱翠珍, 吴缨, 等. IgM-ELISA法用于日本血吸虫病早期诊断初探[J]. 中国兽医
高苏宁
寄生虫病, 2006, 14(4):7-10.
【3】Steinmann P，Keiser J，Bos R，et al. Schistosomiasis and water re⁃sources development：视频浪涌保护器systematic review，meta ⁃ analysis，and estimates of people at risk［J］. Lancet Infect Dis，2006，6（7）：411-425.
【4】 Chen Feng, CaiWeimin, Chen Zhi etal.Dynamic Changes in the Collagen Metabolism of Liver Fibrosis at the Transcription Level in Rabbits with Schistosomiasis japonica[ J]. Ch-inese Medical Journa,l 2002, 115(11): 1637-1640.
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