杂曲霉毒素 金属按键>如图是某水上打捞船
数字电视伴侣 杂曲霉毒素(sterigmatocystin，简称ST)主要是由曲霉属的某些菌种，如杂曲霉、、皱曲霉、赤曲霉、焦曲霉、爪曲霉、四脊曲霉、毛曲霉以及黄曲霉、寄生曲霉等产生的有毒代谢产物，1954年首先从杂曲霉的培养物中分别出一种淡黄针状结晶，并命名为杂曲霉素，结构上与黄曲霉毒素B1十分相像，是黄曲霉毒素生物合成过程的中间体。ST在化学结构上，具有双氢呋喃苯并呋喃系统。ST的分子式C18H12O6，相对分子质量324.06，熔点246 ℃。可溶于大多数非极性溶剂，不溶于水，难溶于极性溶剂、及水溶液。氯仿对ST的溶解度最大，可作为萃取ST的首选溶剂。在紫外光下具有暗砖红荧光。 杂曲霉在自然界分布很广，存在于乳制品、谷类和饲料中。ST主要由杂曲霉和构巢曲霉的某些菌种产生。ST是一种毒性很强的肝及肾脏毒素，对试验动物均显示了强致癌性，可诱发肝癌和胃癌。杂曲霉毒素中毒，国内又称“黄肝病”或“黄染病”。在肝癌高发区所食用的食物中，杂曲霉素污染较为严峻，可导致人类食物中毒和产生毒性损伤效应。 据报道，ST的检测办法有气相谱法(GC)、气质联使用(GC-MS)和高效液相谱法(HPLC)等，但现行的植物性食品中杂曲霉素的测定还是薄层层析法(TLC)(GB/T 5009. 25-2003 )。本试验主要介绍薄层谱法测定ST。 (一)检测原理 样品中的ST经提取、净化、浓缩、薄层绽开后，用三氯化铝显，再经粽子机
加热产生一种在紫外光下显示黄荧光的物质。按照其在薄层上显示的荧光最低检出量，确定样品中ST的含量。 (二)试剂及仪器 硅胶薄板、绽开槽、紫外灯。 ,5%水溶液(9：1)、正己烷、氯仿、无水硫酸钠。 ST标准溶液的配制：精确 称取ST结晶10mg，用苯定容至100mL棕容量瓶中。分离吸取1mL和0.5 mL于2个10 mL棕容量瓶中，加苯稀释至刻度，分离配成100、10、0.5ug/ mL标准液。避光，4℃冰箱中保存。 (三)检测步骤 1．粗毒素的提取 取50g粉碎过20目筛的样品，加250mL：5％水(9：1)溶液，振荡30min,过滤；残渣加入150mL乙腈:5%水溶液，振荡过滤；将2次滤液加200mL正己烷，振摇2min，静止分层，弃去层，将乙腈-水层加5%水溶液100 mL和氯仿200 mL，振摇2min，静止分层，乙腈-水层加100 mL氯仿，振摇分层后，弃去乙腈-水层，收集2次氯仿层加振摇、过滤、浓缩至干，得到粗毒素。 2.薄层层析 (1)点样上述挥干物用苯或氯仿溶解后，配成苯或氯仿含量为5 mg/mL粗毒素的溶液，供薄层层析用。硅胶薄层板(10cm×10cm)2块，临用前105℃活化2h;在距下端0.3～1cm基线上加样，每板加2个样点，第一点距左边缘0.8～1cm处滴加标准液(0.4ug/mL)10uL，在距左边缘4cm处滴加样液8uL，然后在其次块板的样点上加滴标准液10uL。 在滴加样液时可用吹风机冷风边吹边加。 (2)绽开用双向薄层绽开。 ①横向绽开：在绽开槽内加入：：苯：：(20:60:10:10:4)溶液15mL，将上述点好的薄层板逼近左
纯植物洗面奶边标准点的一边从槽的斜对角位置放人绽开，刚展至板端时，取出挥干。 ②纵向绽开：将近干的薄层板逼近标准点与样点的一边以苯：：溶液(90:8:2) 15mL绽开至刚到板端时，取出挥干。 (3)显荧光于薄层板上喷20％(AIC13·6H2O)溶液，快速将板放置于80℃加热10min，取出后立刻在365 nm波长的紫外光下观看，待薄层板冷却后再喷第2次(不需要加热)，可挺直观看结果。 (4)确证明验第一次绽开后，在样品的类似杂曲霉素的样点上，以及杂曲霉素的标准样点上，各滴加5uL无水，用苯：(9:1)横向绽开。用20% AICI3乙醇溶液喷雾，紫外线下观看，有无黄荧光点，与杂曲霉素的反应物Rf值为0.3左右。 (5)样品的定量办法按上法测得ST的Rf值约为0.6。假如在第一块薄层板上，ST标准品与样品中的ST荧光强弱相当，则样品中的ST含量为12.5ng/g。若样品中的ST的荧光比标准荧光强，则可削减样液的点加量或稀释后点样，直到样品的ST荧光点强度与ST标准全都为止，按下式计算样品中ST的含量。 ST含量＝最低检出量×V×D/C×1000/m(ug/kg) (4-15) 式中V—与最低检出量荧光强度相当的样液点加体积，mL ; D—样液总稀释倍数； C—ST标准品浓度，ug/mL ; m—样品质量，kg, 本办法ST的最低检出量为0.005 ug。当降低到0.002 ug尚可看到，但亮黄发暗。 (四)注重事项 (1)点样后一定等薄层板干燥后再开头层析。 (2)取样时各样品要有各自固定的微量吸管，以免样品之间相互污染。 (3)点样直径不要超过5mm，并用吹风机边吹边点。 泡沫仪
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