凝胶电泳各试剂配制
(1)10000mg/L苄嘧磺隆母液:称取60%的苄嘧磺隆颗粒500mg于灭菌的棕试剂瓶,再加入30mL灭菌的蒸馏水,每次使用前混匀再吸取。 (2)10000mg/L乙草胺母液:吸取500ul 89%直线导轨滑台的乙草胺,再加入49mL分析纯甲醇溶解。 (3)30%丙烯酰胺混合液(50ml):称取丙烯酰胺14.5g,甲叉双丙烯胺酰胺0.5g,加ddH2O 30ml溶解,定容到50ml,于棕瓶中4℃保存。 (4)1.5mol/L Tris-HCl pH 8.8(100ml):称取Tris18.17g于烧杯中加入ddH2O 80ml溶解,用浓盐酸于25℃下调pH为8.8,定容到100ml,高温灭菌室温保存。 (5连供系统)1.5mol/L Tris-HCl pH 6.8(50ml):称取Tris 9.08g于烧杯中加入ddH2O 30ml溶解,用浓盐酸于25℃下调pH为6.8,定容到50ml,高温灭菌室温保存。
(6)10%SDS:称取2gSDS粉末于20ml水中37℃1h水浴。
(7)TEMED(四乙基乙二胺)原液
(8)10%过硫酸铵:称取0.15g过硫酸铵溶于1.5mldH2O中,4℃保存,一星期可用。
(9)2×样品缓冲液(10ml):2.5ml 1.5mol/L的Tris-HCl(pH6.8),0.5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,2ml 1%溴酚蓝,2.5ml蒸馏水。配好后按每管500ul中心架分装好与-20℃保存待用。
(10)Tris-甘氨酸电极缓冲液(5×):称取Tris 15.1g,甘氨酸94g电解抛光,遥感图像SDS 5g,加蒸馏水约800ml,溶解后用蒸馏水定容至1000ml。临用前稀释10倍。
(11)50%甘油:水:甘油=1:1,高温灭菌,4℃保存。
(12)1%BPB(溴酚蓝):称取100mgBPB加水10ml,4℃保存。
(13)考马斯亮蓝R250染液:称0.5g考马斯亮蓝R250,溶于125ml异丙醇中,搅拌溶解后加入50ml冰醋酸,加水325ml混匀后过滤,室温保存。
马弗罐
(14)脱液:按照乙醇:醋酸:水=50:25:425配制脱液,现配现用。