1目的
通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。 2范围
沉降菌检测
3职责
检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。
4程序
4.1洁净（区）clean room(area)
对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.2洁净工作台cleaning work station
一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.3洁净度cleanliness
洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.4菌落colony forming units 细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。
4.5沉降菌settling microbe
用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)
沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。
4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)
具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.9动态测试operational test
洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。见表1
表1洁净室环境要求、测试项目和频次
测试项目 | 技术要求 | 测试频次 | 测试方法 |
实验室 | 净化车间(十万级) | 实验室 | 净化车间 |
A级（百级） | B级（万级） |
沉降菌数（Φ90mm）个/皿 | 静态 | —— | —— | ≤10 | / | 1次/周 | GB/T16294 -2010 |
动态 | ＜1 | ≤5 | ≤10 | A级:每次实验 B级: 1次/周 |
表面微生物 | 物体表面菌（cfu/cm2） | / | 数据监控/ | ≤10 | / | 1次/周 | GB15979 -2002 |
人员手菌数 （cfu/每只手） | / | / | ≤300 |
5指手套 （cfu/手套） | ＜1 | ≤5 | / | 每次实验 | / | 2015版药典 |
接触（Φ55mm） （cfu/碟 ） | ＜1 | ≤5 | / | 每次实验 | / |
| | | | | | | |
4.11检测流程
4.11.1检测条件
4.11.2检测仪器、设备、培养基
恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。 4.11.3测试状态
静态和动态两种状态均可进行测试。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人数。沉降菌测试前，被测洁净室（区）由使用者决定是否需要预先消毒。
4.11.4测试时间
测试房间时应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30分钟后开始。
对于单向流应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10分钟后开始。
4.11.5采样点
4.11.5.1沉降菌测试最少采样点见表2。
4.11.5.2采样点的限制
对任何小洁净室或局部空气净化区域，沉降菌采样点的数目不得少于2个。沉降菌在满足最少测试点的同时，还宜满足最少培养皿数。100级操作台至少为3个皿，10000级至少为2个，100000级至少为2个。
表2沉降菌最少采样点数目
面 积m2 | 洁净度级别 |
100 二氧化钼 | 10 000 | 100 000 |
<10 | 2～3 | 2 | 2 |
≥10～<20 | 4 | 2 | 2 |
≥20～<40 | 8 | 2 | 2 |
≥40～<100 | 16 | 4 | 2 |
≥100～<200 | 40 | 10 | 3 |
≥200～<400 | 80 | 20 | 6 |
≥400～<1000 | 160 | 40 | 13 |
≥1000～<2000 | 400 | 100 | 32 |
2000 | 800 | 200 | 63 |
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对于非单向流洁净室，指的是房间面积 |
| | | | |
4.11.5.3测试区域
本公司十万级净化车间、万级无菌检测室及百级操作台。
4.11. 6 检测程序
4.11.6.1开启百级工作台紫外杀菌灯及空气过滤装置30分钟。培养皿严格消毒。
4.11.6.2在百级工作台里将已灭菌处理过的系船柱胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）和沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）在无菌操作要求下倾注约20mL至已无菌培养皿中，待凝固后备用。
4.11.6.3沉降菌检测前，被测试洁净室（区）得温湿度须达到规定的要求，静压差、换器次数风速必须控制在规定值内。且被测试洁净室（区）已经灭菌。
4.11.6.4采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
4.11.6.5将已制备好的培养皿按上述表4、表5的采样点逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿，使培养基表面暴露在空气中。
4.11.大功率同轴固定衰减器6.6静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时暴露时间为不大于4h。
4.11.6.7全部采样结束后，将培养皿盖好后倒置，胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）置 于30～35℃恒温培养箱中培养不少于2天。
当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA），置于20～25℃霉菌培养箱中培养不少于5天。
4.11.6.8每批培养基应选定3只培养皿做空白对照培养。以检验培养基本身是否污染。
4.11. 7菌落计数及结果计算
4.11.7.1用肉眼直接计数，然后用5至10倍的放大镜检查，是否有遗漏。
4.11.7.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可以分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.11.7.3按下式计算平均菌落数
M=(M1＋M2＋中药提取…＋Mn)/n
式中：M--平均菌落数
M1--1号培养皿平均菌落数
M2--2号培养皿菌落数
Mn--n号培养皿菌落数
n—总数
4.11.7.4 结果评定，洁净室（区）内的平均菌落数要符合表1的要求。若测试结果不符合表1 的规定， 则需再次消毒，然后重新采样2次，测试结果均需合格。
4.11.8注意事项
4.11.8.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4.11.8.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
4.11.8.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.11.8.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，
不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
4.11.8.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
5 警戒限值的运用
无线收发器
5.1为了及时发现异常并进行原因分析和改进，确保生产过程的稳定，在表1的检测标准的基础上，设置一个警戒限值作为内控指标，警戒限值一般为标准限值的90%（参见表3）。
5.2当环境监测结果偶尔超出警戒限值但仍在标准范围内时，通知相关责任部门的负责人，一般不必采取纠偏措施；当监测结果连续多次超出警戒限值但仍在标准范围内时，应及时将相应的检测报告发送给质量部经理和相关责任部门的负责人，调查分析根本原因并采取相应的措施，评估是否需要启动SJTK/QP-8.5-03《纠正预防措施控制程序》。
表3 警戒限值
测试项目 | 技术要求 |
实验室 | 净化车间(十万级) |
A级（百级） | B级（万级） |
沉降菌数（cuf /4h） | 静态 | 标准值 | -- | -- | ≤10 |
警戒限值 | -- | -- | 9 |
动态 | 标准值 | ＜1 | ≤5 | ≤10 |
警戒限值 | ＜1 | 3 | 9 |
| | | | | | |
6相关/支持文件
文件编号 Number | 文件名称 Name | 备注 Remark |
SJTK/QP-6.4-01 | 工作环境控制程序 | |
SJTK/MR-SC14 | 洁净室工艺卫生管理制度 | |
YY 0033-2000 | 《无菌医疗器具生产管理规范》 | |
GB/T16292-2010 | 《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》 | |
GB50591-2010 | 《洁净室施工及验收规范》 | |
| | |
7质量记录
表单编号 Number | 表单名称 Name | 备注 Remark |
SJTK/QR-6.4-06 | 洁净区沉降菌监测记录 | |
| | |
8修改经历
文件编号 Number | 版本号 | 新增/修改条款号 | 修改内容 | 修改日期 |
| | | | |
| | | | |
| | | | |
| | | | |
| | | | |
9编制、审核、批准
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议