!"#$%&'2020,Vol.37No.12www.hxyswgc-----------------------------------------------------0123■Chemistry&Bioengineering
doi：10.3969/j.issn.1672—5425.2020.12.015
王媚，边敏琦，邹俊波，等.UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊中的7个指标成分'(化学与生物工程，2020,37(12)$368. WANG M#BIAN M Q#ZOU J B et al.Simultaneous determination of seven index compositions from Qiangli Dingxuan Capsules by UPLC-ESI-MS/MS[J].Chemistry W Bioengineering,2020,37(12)：63-68 UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊
中的7个指标成分
王媚，边敏琦，邹俊波，崔春利，张小飞，史亚军"，郭东艳，乔安平，贾小刚
(陕西省中药基™与新药研究重；实验室陕西中医药大学药学院，陕西咸阳712046)
摘要：建立了同时测定强力定眩胶囊中天麻素、绿原酸、阿魏酸、蒙花昔、对~基苯甲醇、松脂醇单葡萄糖昔、松脂醇二葡萄糖昔的超高效液相谱-电喷雾-三重四级杆质谱法(UPLC-ESI-MS/MS)采用T
hermo Syncronis C18谱柱(100mmX2.1mm,1.7%m)，以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速0.4mL•min，柱温35b；采用电喷雾离子源(ESI)、多反应监测(MRM)模式进行定量分析&结果表明，天麻素、绿原酸、阿魏酸、蒙花昔、对~基苯甲醇、松脂醇单葡萄糖昔、松脂醇二葡萄糖昔分别在0.0838—20.9673%g・mL1.0.2848〜712174%g・m'100286〜7.1615%g・m'i、0.2112〜52.8701%g・m'1A0.0672〜16.8124%g・m'1A0.0784〜19.6124%g・m'1、
0.0768〜19.2342%g・m'】范围内与峰面积线性关系良好，相关系数R均大于0.9800，平均加标回收率在9899%〜
101.92%之间&该方法简单、准确、灵敏度高，可用于强力定眩胶囊指标成分的测定&
关键词：强力定眩胶囊；天麻素；绿原酸；阿魏酸；蒙花昔；对~基苯甲醇；松脂醇单葡萄糖昔；松脂醇二葡萄糖昔；
UP'C-ESI-MS/MS
中图分类号:O657.63R284.1文献标识码:A文章编号：1672-5425(2020)12-0063-06
Simultaneous Determination of Seven Index Compositions from Qiangii
Dingxuan Capsules by UPLC-ESI-MS/MS
WANG Mei,BIAN Minqi,ZOU Junbo,CUI Chunli,ZHANG Xiaofei,
SHI Yajun*,GUO Dongyan,QIAO Anping,JIA Xiaogang
(.Shaanxi Key Laboratory o f New Drugs and Chinese Medicine Foundation Research,College o f Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang712046,China) Abstract:We established a UP'C-ESI-MS/MS method for the simultaneous determination of seven index compositions(gastrodin,chlorogenic acid,ferulic acid,linarin,hydroxybenzanol,pinoresinol singleglucoside,and pi—noresinol diglucoside)from Qiangii Dingxuan Capsules.The analysis is performed on a Thermo Syncronis C18 column(100mmX2.1mm,1.7%m)with gradient elution of0.1%formic acid aqueous solution-methanol,the flow rate is0.4m'•min-1,and the column temperature is35b.The quantitative analysis is carried out by ele7trospray ion sour7e(ESI)and multiple rea7tion monitoring(MRM)mode.Theresultsshowthatthereisa goodlinearrelationship between fo l owing fa7tor!su7h as gastrodin!7hlorogeni7a7id!feruli7a7id!linarin! hydroxybenzylal7oholpinoresinolsingleglu7osideandpinoresinoldiglu7osideandthepeakareaintherangeof 0.0838—20.9673%g・m'-1,0.2848—71.2174%g・m'-1,0.0286—7.1615%g・m'-1,0.2112—52.8701
基金项目：陕西省科技厅项目(2017SF-308)，陕西省中药制药重点学科资助项目(303061107)
收稿日期:2020-07-06
领衬作者简介：王媚(1984—"，女，陕西西安人，高级实验师，从事中药新制剂与新剂型研究,E-mail：282850387@qq；通讯作者：史亚军，教授,E-mail：1960751795@qq&
•王媚，等:UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊中的7个指标成分/2020%第12期
%g•mL-1,0.0672一16.8124%g•mL-1,0.0784一19.6124%g•mL-1,and0.0768一19.2342%g•mL-1, respectively.The correlation coefficients are greater than0.9800,and the average adding standard recoveries are98.99%一101.92%.The method is simple,accurate,and sensitive,and can be used for the determination of index compositions from Qiangii Dingxuan Capsules.
Keywords:Qiangii Dingxuan Capsule；gastrodin；chlorogenic acid；ferulic acid；linarin；hydroxybenzyl alcohol；pinoresinol singleglucoside；pinoresinol diglucoside；UPLC-ESI-MS/MS
强力定眩胶囊（Qiangii Dingxuan Capsule, QLDXC）由天麻、杜仲、杜仲叶、野菊花和川莒等5种中药材经过一系列的工艺制成，主要用于高血压、动脉硬化、高血脂等症及因其引起的头痛、头晕、目眩等。其降压作用缓和持久，降脂作用明显，特别是在眩晕患者的临床中应用广泛，效果显著（1）。强力定眩胶囊是2012年国家药品标准提高品种，之前的质量标准为国家食品药品监督管
理局标准YBZ03582009，今年被收录于《中华人民共和国药典》（一部）2020年版，其检验项目只有常规检验和以天麻素为指标的量化控制*文献［23］报道，天麻含有天麻素、对径基苯甲醇等有效成分；杜仲含有松脂醇单葡萄糖昔、松脂醇二葡萄糖昔等有效成分；杜仲叶含有绿原酸、阿魏酸等有效成分；野菊花含有蒙花昔、阿魏酸、绿原酸等有效成分。若仅以有效成分天麻素为指标难以全面准确控制强力定眩胶囊质量，为了更好地发挥药品的临床疗效，有必要制定较为全面的强力定眩胶囊的多指标评价标准*超高效液相谱-电喷雾-三重四级杆质谱联用（UPLC-ESI-MS/MS）是目前广泛应用的分析方法之一W具有谱的分离能力和质谱的高分辨性，适合分析复杂的中药多组分体系*作者采用UPLC-ESI-MS/MS方法，同时测定强力定眩胶囊中天麻素、绿原酸、阿魏酸、蒙花昔、对径基苯甲醇、松脂醇单葡萄糖昔、松脂醇二葡萄糖昔等7个指标成分，以期为全面、有效地控制强力定眩胶囊的质量提供依据*
1
1.1材料、试剂与仪器
生物质气化燃烧机
强力定眩胶囊，陕西汉王药业有限公司；中药材天麻、杜仲、杜仲叶、野菊花、川莒等购于西安兴盛德中药饮品有限责任公司，经鉴定均符合《中华人民共和国药》（）2015年版*
天麻素对照品（批号AYJJ-V5AG）、绿原酸对照品（批号R1F79B91）、阿魏酸对照品（批号PQEG-
8GF8）、蒙花昔对照品（批号TUQ4-Y52R），对径基苯甲醇对照品（批号DJ9T-VXN8），中国药品生物制品监督检验所；松脂醇单葡萄糖昔对照品（批号B21724）、松脂醇二葡萄糖昔对照品（批号3GCF-TDYY），上海源叶生物技术公司；甲醇、甲酸，质谱纯，德国默克公司；无水乳糖；无水乙醇（分析纯）；实验用水为屈臣氏蒸彳水*
ACQUITY I-Class UPLC system-Xevo TQ-XS MS型液质联用仪，美国Waters公司；AR1140型电子分析天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；振动式细胞级超微粉碎机，济南达微机械有限公司；RE-3000型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；电热恒温水浴锅，北京科伟永兴仪器有限公司；QE300型高速万能粉碎机，浙江屹立工贸有限公司；智能溶出仪* 1.27个指标成分的化学结构式（图1）
1.3UPLC-ESI-MS/MS条件
UPLC-ESI-MS/MS系统由ACQUITY I-Class UPLC和Xevo TQ-XS MS组成*
谱柱为Thermo Syncronis C18柱（100mm X 2.1mm,1.7%m），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脱程序为：0〜1min,10%B；1〜5.8 min,10%B〜40%B；5.8〜6.3min,40%B〜95%B；63〜85min95%B；85〜87min95%B〜10%B；&7〜10min,10%B。柱温35C，流速0.4mL•min-1，进样量5%L。双模卡
质谱检测器为电喷雾离子源（ESI）,ESI-MS以正离子和负离子多反应监测（MRM）模式进行测试，喷雾电压3.0kV，毛细管温度450C，去溶剂气体流速1000%L•h-1，喷雾气体压力7.0bar。质谱化合物离子对的去簇电压和碰撞能量采用Masslynx V4.2进行采集和优化*
1.4的
1.4.1混合对照溶液的制备
精密称取各对照品，分别加入70%甲醇溶液配制成1.37mg•mL-1天麻素、5.10mg•mL-1绿原酸、1.79mg•mL-1阿魏酸、2.64mg•mL-1蒙花昔、5.25mg•mL-1对径基苯甲醇、0.98mg•mL-1松脂醇单葡萄糖昔、0.96mg•mL-1松脂醇二葡萄糖昔等储备液，于4C保存，备用；分别吸取一定量上述各对
王媚，等:UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊中的7个指标成分/202012'
O
图17个指标成分的化学结构式
Fig.1Chemical(tructure(of(evenindexcompo(ition(
照品储备液于5mL容量瓶中，加入70%甲醇，定容，得到含天麻素274.0000%g•mL01、绿原酸1020.0961%g-mL01、阿魏酸35&0368%g-mL01、、528.2483%g-mL01、对径基苯甲醇105.0630%g-mL01、松脂醇单葡萄糖昔196.1540 %g-mL01、醇二葡萄糖昔192.1421%g•mL01的混液，于4b，备用。进样前，过0.22 %m滤膜。
1.4.2供试溶液的制备
取样品研细后，精密称定适量；加入稀乙醇50mL(］，称重；45b超声处理30min，取出冷至室温，再称重；用稀乙醇的重量，摇匀，滤液干，残渣用乙睛-水(3:97，体积比)溶解，定容至10 mL容量瓶中，摇匀，即得供试溶液。进样前，过0.22 %m滤膜。
1.4.3阴液的制备
按力的生产工艺，分别制备不含天麻、杜仲叶、、川苇、杜仲的空液，再按1.4.2方法制备阴性对照溶液*
2结果与讨论2.1混合对照溶液和供试溶液的指标成分的MRM 图谱(图2)
2.2方法学考察
2.2.1专属性
分别取混液、试液阴液按谱样测定，进样量3%L*结果显示，天麻素、绿、阿魏酸、蒙花昔、对径基苯甲醇、松脂醇单糖昔、松脂醇二糖昔等指标成分的受其它干扰，峰型良好*表明处方中的其它成分F定结果无影响*
2.2.2系
精密吸取混液，逐级稀释5倍，加入一定量的甲醇，制备6同浓度梯度的混液，按MRM样测定，进样量3%L*以各成分的峰面积(y)为纵坐标、浓度M,%g•mL01)为横坐标绘制标准曲线*
将上述不同浓度梯度的混合对照溶液加入到空白样液中，按最优实验样，以峰高除以背景噪声值作为S/N，计算检岀限(LOD,S/N(3)和定量限(LOQ,S/N(10)，结果见表1
*
王媚，等：UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊中的7个指标成分/202012'
(a)0.83
2.55绿原酸
4.19阿魏酸
•
n.EM 匸sugln
7.19蒙花昔
1.69
4.33
1.69对軽基苯甲醇
II丄.—A「「
4.33
3.22
3.22
2.00 4.00 6.008.00
"min
00 2.00 4.00 6.008.00
Z/min
图2混合对照溶液（a）和供试溶液（b）的指标成分的MRM图谱樱桃去核机
Fig.2MRM chromatograms of index compositions from mixed reference solution)a)and test solution)b)
表1强力定眩胶囊指标成分的线性方程、检出限和定量限
Tab.1Linearequations"LOD andLOQofindexcompositionsfrom QLDUC
要成分方程R范|/(%g-mL1)检出限/(ng•m'1)限/(ng•m'1)天麻素y=20614x—80865099990.0838〜2096730.2670.890
绿原酸y=6432604x—13928755099500.2848〜71.21741.3894.630
阿魏酸y=143043x+3000000098600.0286〜7.1615184.680615.600
蒙花昔y=550011x—592729099730.2112〜52.870143.380144.600对瓮基苯甲醇y=2823.2x—7863.3099980.0672〜16.81240.2190.730松脂醇单葡萄糖昔y=169685x—256995098830.0784〜19.61240.3541.180醇二糖y=30594x—35048099610.0768〜19.2342 3.22510.750
dbr激光器2.2.3精密度
精密吸取混合对照溶液0.2mL，用甲醇定容于10m'容量瓶中，摇匀，制成含天麻素、绿、阿魏酸'、对径基苯甲醇、松脂醇单糖昔、松脂醇二葡萄糖昔分别为5.48%g-m'-1、20.40%g-m'-1、7.16%g•m'-1、10.56%g•m'-1、21.00%g•m'-1、3.92%g•m'-1、3.84%g•m'-1的液，按谱条件连续进样6次*结示，指标成分响应信号的RSD为0.89%-5.94%，保留时间的RSD为0.07%〜0.22%*表明仪器精密度*
2. 2.4重复性
取强力定眩胶囊内容物（批号190505）6份，按1.4.2方法制试溶液，按谱样测定，记录各指标成分的信度，计算质量分数*结示，指标成分响应信号的RSD为1.18%〜3.11%，保留时的RSD为0.21%〜0.32%。表明该方法重复性
*
225
取强力内容物，按1.4.2方法制备供试溶液，分别在0h、4h、10h、16h、24h取样测定*结果显示，指标成分响应信号的RSD为0.84%〜3.06%，保留时间的RSD为0.18%〜0.37%*表明供试溶液在24h内*
2.2.6加标回收率
精密称取强力定眩胶囊内容物（批号190505）6份，每份0.1g，按1.4.2方法制备供试溶液，加入相当于已知量的100%的对照溶液，进样，进样量3 %'，记录各指标成分的峰面积，计算加标回收率，结果见表2*
表2可知，强力定眩胶囊各指标成分的平均加标回收率为9&99%〜101.92%,RSD为0.37%〜1.54%
*
王媚，等:UPLC-ESI-MS/MS法同时测定强力定眩胶囊中的7个指标成分/202012'
表2强力定眩胶囊指标成分的加标回收率(&=6)
Tab.2Adding standard recovery of index compositions from
QLDXC(&=6)
指标成分样
mg
加入量测定总量加标回收率平均值RSD
%
mg mg%% 33025644419992 330256448710007 33025314416452710019
天麻素
330256487510130
10031050 330256448310005
330256457310034
350537*********
350537*********
35053 3.56007159810265
绿
350537133810192
10192037 350537124110165
350537123310163
沙丘驻涡火焰稳定器
283515728010101
28351567109902
2835128640565489845
阿魏酸
283515699010000
9962087 28351568709958
28351568909965
5340210721910193
5340210714310178
534025280010654810066
蒙花昔
5340210687510127
10169065 5340210758310262
5340210719710188
09245181489992
092451824510101
对o基0924508910182281008210049059苯甲醇092451815910004
092451826410122
09245181469990
01208025319844
012080257510171
醇单0120801344025289821
10005154糖012080255710037
012080257610179
01208025499978
132132676510083
13213263879802
醇二1321313440264909879
9899097糖13213264559853
13213265019887
132132650398882.3
取不同批号的强力定眩胶囊内容物，按1.4.2方法制备供试溶液，按谱条件进样测定，计算指标成分的含量，结果见表3。
表35批强力定眩胶囊指标成分的测定结果(mg,&=3) Tab.3Determinationre(ult(ofindexcompo(ition(fromfive
batches of QLDXC(mg，&=3)
对瓮基松脂醇单松脂醇二
苯甲醇葡萄糖昔葡萄糖昔样品批号天麻素绿原酸阿魏酸蒙花昔1905051321140211342136036980048305285
1906091335139411212151037140047905345 1906101343140911292203038740048105415 1907271317142511372217038690048505261 1907301299143312052136037120048205415注：测定结果以每颗胶囊所含指标成分计算。
2.4
2.4.1提取条件的优化
为了使强力定眩胶囊中的天麻素、对径基苯甲醇、松脂醇单葡萄糖昔等多种指标成分得到充分提取，结合赵斌等旧报道的方法，以稀乙醇为提取溶剂，在不同温度下超声提取不同时间，考察超声时间对
强力定眩胶囊中指标成分提取率的影响。结果显示，在超声时间为30min时，强力定眩胶囊中的指标成分提取率最高；在超声温度为45b时，强力定眩胶囊中的指标成分提取率较高。因此，选择超声时间和超声温度分别为30min和45b*
2.4.2谱条件的优化
分别考察了甲酸水溶液-乙月青、甲酸水溶液-甲醇流动相对强力定眩胶囊中指标成分分离效果的影响。结果表明，在0.1%甲酸水溶液-甲醇体系下进行梯度洗脱时，对径基苯甲醇和蒙花昔等指标成分的响应信号增强，离子化程度更好，峰形美观，无其它干扰。
同时，分别了ThermoSyncronisC18100 mmX2.1mm， 1.7%m)、岛津XR-ODS C18柱(75 mmX2.1mm,2.2%m)、Agilent5TC-C18柱(250 mmX4.6mm,5%m)、Waters BEH C18柱(50mmX 2.1mm,1.7%m)、COSMOSIL5C18-MS-'柱(150 mmX46mm,5%m)等谱柱对强力定眩胶囊指标成分分离效果的影响。结果表明，Thermo Syncronis C18柱(100mmX21mm,1.7%m)的分离效果最好，分析速度快(8min内)，大大提高了分析效率。因此，选用Thermo Syncronis C18柱(100mm X2.1mm, 1.7%m)。
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