一、实验目的
1. 熟悉空气系统组成及设备和空气净化工艺流程。
2. 掌握空气系统的灭菌（除菌）技术。
3. 了解用于空气除菌的JLS-高效金属镍过滤器（精过滤）、JLS-YuJ（预过滤）的构造、材质、特点及作用原理。 4. 掌握空气系统无菌检查的方法。
二、实验器材
高压灭菌锅
恒温培养箱
2.5L和500ml小口试剂瓶，移液管，培养皿。
营养琼脂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂。
muhdpe合金管三、实验步骤
1. 空气系统的灭菌：切断压缩空气，用0.15MPa～0.20MPa的饱和蒸汽对精过滤装置和后续空气管道灭菌，维持50min，关闭蒸汽，迅速打开空气阀门，用压缩空气吹干精过滤和后续空气管道。
动态投影灯2. 空气系统无菌检查：用2.5L和500ml小口试剂瓶分别盛装500ml和150ml无菌水，在无菌室超净工作台连接好已灭菌处理的L形管（附硅胶软管）。
将精过滤装置后面的小阀门出气口先檫酒精，再火焰灭菌3～5s，小心逐渐调节阀门旋塞，使通气量为2m3／汽车钻机h（500L罐），0.4m3／h(50L罐）。迅速打开包扎软管口的牛皮纸、纱布，连接小阀门出气口，接收压缩空气，接收时间5s。接收结束，迅速将软管脱离出气口，重新用牛皮纸、纱布包扎好。在无菌室超净工作台，将L形管取出，试剂瓶口重新用牛皮纸、纱布包扎好，以备后面实验。
每个小组各备已灭菌的一张Φ50mm、孔径Φ0.22μm的滤膜、3个培养皿，先将试剂瓶振摇
几下，然后将吸收了无菌空气微生物的水抽滤过0.22深度水产μm的滤膜，使其中的微生物富集于滤膜上。将滤膜无菌操作转移至无菌培养皿中,使有菌的一面朝上，各培养皿中倾注15～20ml，冷至40～50℃的营养琼脂培养基，左右各摇三下，待凝固，做好记号！放置3防水伸缩缝7℃培养箱，倒置培养24小时，计细菌菌落数。
四、计算
500L无菌空气细菌菌落数（cfu/m3）＝
50L无菌空气细菌菌落数（cfu/m3）＝
由于我们组采用的是500L的，且菌落数为4，t为5s，代入公式：
500L无菌空气细菌菌落数（cfu/m3）＝4/（2*5/3600）
＝1440 cfu/m3
3600 — 时间，单位s；
t — 接收时间，单位s。
五、思考题
1. 发酵工厂获得无菌空气主要采用过滤，本发酵中试车间精过滤采用的是JLS型金属镍烧结管空气过滤器，请谈谈该过滤器的工作原理、特点及使用时应注意的问题？
答：工作原理是金属镍材料微粒粉末加压成型后，处于熔点温度下黏结固定，但只是粉末表面熔融黏结而保持粒子的空间和间隙，从而形成了微孔通道，具有微孔过滤的作用。
特点：强度较高，不需要经常更换，使用寿命长 ，能耐受高温反复杀菌，且受潮后影响不大，不易损坏。
应注意的问题：一般孔隙都在10—30um之间。定期反冲杀菌即可使用较长时间
2. 啤酒发酵要求细菌菌落数（cfu/m3）≤300，此种情况下为什么不会招致染菌？请谈谈原因。
网眼袋答：因为在酵母培养过程中，培养基主要是以糖原为主，利用无机氮源，有机氮较少，适宜的PH较低，在这种情况下，一般细菌较难繁殖，而酵母的繁殖速度较快，成为优势菌种，能抵抗少量的杂菌影响，所以啤酒发酵在细菌菌落数（cfu/m3）≤300的情况下不会招致染菌。
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