JmjC蛋白论文：OsJMJ714在水稻侧根发育中的功能分析 【中文摘要】组蛋白赖氨酸甲基化是一种重要的表观遗传学修饰,在调控基因表达过程中起重要作用。在动物中已经证明JmjC蛋白具有组蛋白去甲基化酶活性,并且JmjC结构域为这类蛋白的催化域。进化分析发现水稻中有20个含有JmjC结构域的蛋白,分为4个家族,其中JmjC domain only家族中的7个蛋白只含有JmjC结构域。研究报道水稻OsJMJ760影响组蛋白去甲基化,在花器官的形成与发育过程中具有重要作用,而其他成员的功能尚不清楚。OsJMJ714是JmjC domain only家族成员之一,其氨基酸序列的生物信息学分析结果表明OsJMJ714催化域的核心序列包含保守的Fe(II)和αKG结合位点;在此基础上,我们在水稻体内和体外组蛋白去甲基化实验中均证实OsJMJ714具有使组蛋白发生H3K9me1/2/3去甲基化修饰的组蛋白去甲基化酶活性。在转录水平上,我们通过荧光定量PCR分析了该基因在水稻苗期的表达特性。OsJMJ714基因在苗期不同组织的表达分析结果表明, OsJMJ714基因在根中的表达高于地上部的表达。我们发现OsJMJ714基因的表达受不同浓度NaCl处理的诱导;而且随着盐处理时间增长, 【英文摘要】Histone lysine methylation is an important epigenetic modification and plays k
ey roles in regulating gene expression. In animals, JmjC domain containing proteins have histone demethylase activity, and the JmjC domain is their essentil catalytic domain. In rice, at least 20 JmjC proteins have been identified and belong to four subfamilies. Among of these proteins, JmjC domain only family contains seven proteins with JmjC domains only. Except for OsJMJ760, the functions of the other members are unclear.
【关键词】JmjC蛋白 组蛋白去甲基化修饰 水稻根系
【英文关键词】JmjC domain containing protein Histone demethylase Rice root
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【目录】OsJMJ714在水稻侧根发育中的功能分析摘要6-7ABSTRACT7缩略词表11-12第一章 引言12-191.1 植物组蛋白甲基化研究进展12-161.1.1 组蛋白修饰121.1.2 植物中组蛋白甲基化与DNA 甲基化12-131.1.3 植物中组蛋白去甲基化13-141.1.4 含JmjC 结构域的蛋白与植物生长发育14-161.2 水稻根的形成与发育16-171.2.1 水稻根的类型161.2.2 水稻初生
根的模式16-171.2.3 植物激素与根发育171.3 根结构与盐胁迫17-181.4 研究目的与意义18-19第二章 材料与方法19-382.1 导电胶水实验材料19-222.1.1 植物材料192.1.2 质粒载体及菌株192.1.3 主要试剂19-202.1.4 引物20-222.1.5 培养基配制222.2 卡因是什么制成的
实验方法大功率led天花灯22-382.2.1 生物信息学分析222.2.2 水稻材料的种植与培养宋殿权222.2.3 转基因水稻材料的创建与鉴定22-232.2.4 转基因水稻根系表型分析实验232.2.5 虚拟房间
分子克隆23-262.2.6 植物表达载体的构建26-272.2.7 农杆菌电击感受态的制备272.2.8 农杆菌电击转化272.2.9 水稻总RNA 提取27-282.2.10 cDNA 第一条链的合成28-292.2.11 荧光定量PCR(Real-time PCR)反应体系及程序292.2.12 CTAB 法提取水稻DNA29-302.2.13 DNA 纯度与浓度检测302.2.14 MSAP 检测方法30-332.2.15 BL21 电击感受态制备332.2.16 BL21 ic卡防水水表感受态细胞电击转化33-342.2.17 原核重组蛋白的诱导与纯化34-352.2.18 western-blot 检测352.2.19 体外组蛋白去甲基化活性试验35-362.2.20 体内组蛋白去甲基化活性试验36-38第三章 结果与分析38-533.1 生物信息学分析38-393.2 OSJMJ714 基因克隆及转基因材料创建39-413.2.1 OsJMJ714 基因全长的扩增及植物表达载体的构建39-403.2.2 转OsJMJ714 基因水稻材料的创建40-413.2.3 转OsJMJ714 基因水稻材料的鉴定413.3 OSJMJ714 受盐诱导表达41-423.4 OSJMJ714 具有组蛋白去甲基化酶活性42-443.5 过表达OSJMJ714 影响水稻侧根发育443.6 生长素NAA 恢 复过表达OSJMJ714 水稻小侧根的发育44-453.7 过表达OSJMJ714 下调生长激素合成途径关键基因的表达45-463.8 OSJMJ714 水稻小侧根发育的抑制与6-BA 相关46-483.9 过表达OSJMJ714 水稻中基因组DNA 甲基化模式的MSAP 分析48-533.9.1 过表达OsJMJ714 微弱影响水稻基因组DNA 甲基化敏感多态性48-503.9.2 过表达OsJMJ714 提高水稻基因组DNA 甲基化水平50-513.9.3 MSAP 实验中差异基因的表达分析51-53第四章 讨论53-55第五章 全文结论55-56参考文献56-61致谢61-62作者简历62
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