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美国药典-微生物检测

〈61〉非无菌产品的微生物检测：微生物计数检测法

生长促进试验和计数方法的适用性

概述

在供试品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。

如果引入了可能影响试验结果的在测试性能或产品方面的变更，则必须确认其适用性。

供试菌株的制备

使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或者按照以下所述制备。使用菌种保存技术（种子批系统）以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批不超过五代。按照表1中的描述，分别培养每种细菌和真菌供试菌株。

表1.供试微生物的制备和使用

微生物	供试菌株的制备	生长促进		供试品存在的情况下计数方法的适用性
微生物	供试菌株的制备	好养微生物总数	酵母菌和霉菌总数	好养微生物总数	酵母菌和霉菌总数
金黄酿脓葡萄球菌，如：ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83或NBRC 13276	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 ,18-24小时	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu ,300-350, ≤3天		大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 cfu ，300-350 ,≤3天
绿脓假单胞菌	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 ,18-24小时	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基血氧仪测试方法≤100 cfu , 300-350, ≤3天		大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu ，300-350 ,≤3天
枯草芽孢杆菌如：ATCC 6633,NCIMB 8054,CIP 52.62,或 NBRC 3134	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 ,18-24小时	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu , 300-350, ≤3天		大蒜破瓣机大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 cfu ，300-350 ,≤3天
白念珠菌如：ATCC 10231,NCPF 3179, IP 48.72, 或NBRC 1594	沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖肉汤培养基 200-250 ,2-3小时	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 ≤100 cfu , 300-350, ≤3天	沙氏葡萄糖肉汤培养基 ≤100 cfu , 200-250, ≤5天	大豆酪蛋白消化物培养基 ≤100 cfu ，300-350 ,≤3 天 MPN:不适用	沙氏葡萄糖琼脂培养基 ≤100 cfu , 200-250, ≤5天
黑曲霉如：ATCC 16404,IMI 149007,IP 48.72或NBRC 1594	沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基 200-250 ,5-7天或直到实现良好产孢	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 ≤100 cfu , 300-350, ≤5天	大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 ≤100 cfu , 200-250, ≤5天	大豆酪蛋白消化物培养基 ≤100 cfu ，300-350 , ≤5 天 MPN:不适用	沙氏葡萄糖琼脂培养基 ≤100 cfu , 200-250, ≤5天

用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH7.2的磷酸盐缓冲液配制供试悬浮液；为使黑曲霉孢子悬浮，可将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。这些悬浮液需在2个小时之内使用，或存放在2o～8o条件下24小时内使用。作为制备并稀释黑曲霉或枯草杆菌营养细胞的新鲜悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。稳定的孢子悬浮液可在2o～8o下保存，保存期经过时间验证。

阴性对照

为了确认试验的条件，用所选的稀释液替代供试品阴性对照。必须没有微生物的生长。

培养基的生长促进

250ppm对每一批已制备好的培养基和每一批从脱水培养基或根据描述的组分制备出来的培养基进行测试。

在部分/整个平皿内的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基和大豆酪蛋白消化物琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu) 表1中指定的微生物，每种微生物均使用单独一部分/整个平皿培养基。

在平皿内的沙氏葡萄糖琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu)表1中指定的微生物，每种均使用一个单独平皿的培养基。按照表１中描述的条件进行培养。

对于固体培养基，所获得的生长与标准化接种体的计算值之间的差异因素不大于2。对于刚刚制备好的接种体，发生的微生物生长与用此前检验并批准过的培养基批次所得到的微生物生长相当。如果出现了与此前从上一个经过测试并通过的培养基批次获得的微生物生长相当、清晰可见的微生物生长，则液体培养基适用。

供试品计数法的适用性

样品的制备

样品制备方法取决于供试品的物理特征。如果以下描述的规程不能够被令人满意地证实，则必须开发一个适用的替代规程。

水溶性产品—溶解或稀释（通常制备1:10的稀释液）供试品，于pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.发光二极管封装2的磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基中。如有必要，调整pH值为6至8。需要时，用相同的稀释剂作进一步稀释。

不溶于水的非脂肪性产品—将供试品（通常制备1:10的稀释液）悬浮于波峰焊锡条pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.雾疗2的磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基中。可以加入表面活性剂，如1g/L的聚山梨酯80，以帮助难以与水混合的物质悬浮。如有必要，调整pH值为6至8。需要时，用相同的稀释剂进一步稀释。

脂肪性产品—溶解于以过滤除菌的豆蔻酸异丙酯，或者将供试品与所需最少量的、经过加热的无菌聚山梨酯80或另一种非抑菌性的无菌表面活性剂进行混合，如有必要，可加热至不超过40o或者在特殊情况下不超过45o。仔细混匀，如有必要，在水浴锅里中维持该温度。加入充足数量、经过预热的所选择稀释剂，制成原产品的1:10稀释液。仔细混匀，同时维持该温度至形成乳化剂所必需的最短的时间。可以用所选择的含有适当浓度的无菌聚山梨酯80或者另一种非抑菌性的无菌表面活性剂的稀释液，来制备后续的系列10倍稀释液。

本文发布于:2024-09-22 06:43:10，感谢您对本站的认可！

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