一种动物流产衣原体亚单位疫苗及其制备方法和应用

1.本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种动物流产衣原体亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

2.衣原体(chlamydia)是一类专性胞内寄生、革兰氏染为阴性的细菌，其感染宿主范围极其广泛，包括人类和阿米巴原虫，是一种重要的人畜共患病原体。
3.流产衣原体是导致绵羊衣原体病的主要原因，该病又称绵羊地方流行性流产(ovine enzootic abortion，oea)或母羊地方性流产(enzootic abortion of ewes， eae)。母羊感染后会导致化脓性胎盘炎、早产、产出死胎或虚弱的羊羔，并且母羊成为衣原体的携带者，会在孕期通过胎盘、流产胎儿或阴道分泌物排出大量病原体，其它动物易通过呼吸道和消化道感染流产衣原体。此外，孕妇可能在直接接触感染动物时感染，导致流产，因此流产衣原体是一种人畜共患病病原体。虽然流产衣原体主要与绵羊和山羊的地方性感染有关，但在全球各地的其他宿主物种中也可发生零星的病例，如牛、猪、马、鹿和牦牛中，甚至在海洋中的哺乳动物—斑纹海豚中也发现了流产衣原体。流产衣原体是全球范围内山羊和绵羊流产的主要原因，造成了大多数牧羊地区的经济损失，血清学流行病学调查结果显示，英国衣原体阳性率为44％、沙特阿拉伯为11.1％、埃及为 13.8％、突尼斯为6.6％、伊朗为9.7％、西班牙为33.0％、阿尔及利亚为7.2％。近年来，我国陆续报道了关于流产衣原体的感染病例，甘肃的藏羊和湖南的山羊血清学阳性率分别为18.65％和8.45％，li等(li z,cao x,fub,chaoy,cai j, zhou j.2015.identification and characterization of chlamydia abortus isolates fromyaks in qinghai china.biomed res int,2015:658519；li z,cai j,cao x,lou z, chaoy,kanw,zhou j.2017.whole-genome sequence of chlamydia abortus straingn6 isolated from aborted yak fetus.genome announc,5(35):e00893-17)人在青海省牦牛的流产胎儿和阴道拭子中成功分离流产衣原体。
4.当前，商业化的动物衣原体病防控相关疫苗的缺乏导致对于动物衣原体病的控制主要以药物为主。但长期使用抗生素会导致耐药菌株的出现、甚至流行，重新对畜牧业构成巨大的威胁甚至公众的生命健康。因此，疫苗接种是防控动物流产衣原体病的关键。国内外虽然成功研制了流产衣原体灭活疫苗，但病原需要在组织细胞或鸡胚卵黄囊膜中培养，提取鸡胚卵黄囊膜存在生物安全风险，而且疫苗生产工艺相对落后，不适应现代疫苗生产企业的生产线，到目前为止国内尚无商业化的流产衣原体疫苗。因此，开展安全、高效的动物流产衣原体亚单位疫苗研制是十分必要的。

技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种动物流产衣原体亚单位疫苗及其制备方法和应用，得到的亚单位疫苗产抗体水平高，免疫效果好，安全性高，能有效抑制流产衣原体增殖，减
轻胎盘组织病理损伤，预防和/或因流产衣原体引起的疾病。
6.本发明提供了一种动物流产衣原体亚单位疫苗，包括衣原体抗原和佐剂；
7.所述衣原体抗原包括momp、omcb、inca和cpaf中的四种、三种、两种的组合或任意一种。
8.优选的，所述佐剂包括montanidete
tm isa201。
9.优选的，所述的亚单位疫苗的形式为水包油包水。
10.本发明还提供了上述技术方案所述的亚单位疫苗的制备方法，包括如下步骤：
11.表达编码所述衣原体抗原的基因，纯化，得纯化蛋白；
12.将所述纯化蛋白与佐剂混合，乳化，得到所述亚单位疫苗。
13.优选的，所述纯化蛋白与佐剂的体积比为1:1。
14.优选的，所述乳化在500r/min的条件下进行；所述乳化的时间为5～10min。
15.优选的，所述表达的步骤包括:构建含有所述衣原体抗原编码基因的重组质粒，转化至大肠杆菌，培养至吸光度od
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＝0.6时，加入蛋白诱导剂，继续培养 3～5h，得到所述衣原体抗原。
16.优选的，所述蛋白诱导剂包括iptg；所述iptg的工作浓度为0.8mm。
17.优选的，所述纯化的方式包括梯度洗脱。
18.本发明还提供了上述技术方案所述的亚单位疫苗在制备预防和/或因衣原体引起的疾病的药物中的应用。
19.有益效果：
20.本发明提供了一种动物流产衣原体亚单位疫苗，包括衣原体抗原和佐剂；所述衣原体抗原包括momp、omcb、inca和cpaf中的四种、三种、两种的组合或任意一种。本发明所述momp、omcb、inca和cpaf产生于流产衣原体不同发育阶段，可调控宿主细胞的生命活动侵染细胞、进行繁殖。本发明将产生于流产衣原体不同发育阶段的抗原蛋白与佐剂混合制备亚单位疫苗能够具有较好的免疫效果，安全性高，可以产生较高水平的抗体，在不同阶段阻止衣原体的发育，从而达到免疫保护作用。绵羊免疫保护试验结果表明，本发明动物流产衣原体亚单位疫苗能有效的阻止衣原体在机体内繁殖感染，减轻胎盘组织病理损伤，流产保护率为61.5％。
21.本发明以montanide
tm isa 201为佐剂，与传统油乳剂相比， montanide
tm isa201乳剂强效、稳定、粘度低并且易于注射，制备得到的亚单位疫苗可诱导短期及长期免疫。
附图说明
22.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
23.图1为momp、cpaf、inca和omcb蛋白的纯化结果，其中a为momp， b为cpaf，c为inca，d为omcb蛋白；
24.图2为病理组织切片观察结果。
具体实施方式
25.本发明提供了一种动物流产衣原体亚单位疫苗，包括衣原体抗原和佐剂；所述衣
30a-cpaf中的多种组合时，本发明优选将所述重组质粒 pet-30a-momp、pet-30a-omcb、pet-30a-inca和pet-30a-cpaf分别转化至大肠杆菌，培养转化后的大肠杆菌，培养至吸光度od
600
＝0.6时，加入蛋白诱导剂，继续培养3～5h，优选为4h，得到衣原体抗原momp、衣原体抗原omcb、衣原体抗原inca和衣原体抗原cpaf，分别对衣原体抗原momp、衣原体抗原omcb、衣原体抗原inca和衣原体抗原cpaf进行后续的纯化。本发明所述大肠杆菌优选为大肠杆菌bl21(de3)；所述重组质粒与所述大肠杆菌的体积比优选为 8:100。本发明对所述转化的方式没有严格要求，按照说明书进行操作即可。本发明所述lb液体培养基优选含有卡那霉素，进一步优选为每升lb液体培养基中添加1ml硫酸卡那霉素溶液；所述硫酸卡那霉素溶液中硫酸卡那霉素的浓度优选为50～100mg/ml，进一步优选为60～90mg/ml，更优选为70～80mg/ml，最优选为75mg/ml；转化所述重组质粒后的大肠杆菌与所述lb液体培养基的体积比优选为(1:50)～(1:500)，进一步优选为1:100。
36.接种完成后，本发明优选培养所述大肠杆菌，当吸光度(od
600
)为0.6时，向lb培养液中加入蛋白诱导剂，继续培养3～5h，优选为4h。本发明所述培养的是温度优选为37℃；所述培养的转速优选为200r/min。本发明所述蛋白诱导剂优选包括iptg，所述iptg的工作浓度优选为0.8mm。本发明所述蛋白诱导剂能够诱导蛋白表达。
37.培养结束后，本发明优选对培养物进行超声处理，收集沉淀。本发明所述超声的时间优选为20min；所述超声的功率优选为250w。本发明优选每超声4s，间隔6s，所述超声的时间不包括间隔时间。本发明所述超声处理能够裂解细胞。
38.得所述沉淀后，本发明优选对所述沉淀进行纯化，得到纯化蛋白。本发明所述纯化的方式优选包括梯度洗脱，所述梯度洗脱优选使用咪唑洗脱液。洗脱结束后，本发明优选收集流出的洗脱液，洗脱液中含有所述纯化蛋白。
39.得到所述缓冲液后，本发明优选将所述缓冲液与尿素混合，使蛋白复性，得到所述纯化蛋白。本发明所述缓冲液与尿素的混合的过程优选包括：将所述缓冲液放入透析袋中，然后将透析袋放入8m尿素中，透析12h后，取出透析袋，放入6m尿素中，透析12h后，取出透析袋，放入5m尿素透析12h后，取出透析袋，放入4m尿素透析12h后，取出透析袋，放入3m尿素透析12h后，取出透析袋，放入2m尿素透析12h。
40.得到所述纯化蛋白后，本发明优选将所述纯化蛋白与佐剂混合，乳化，得到所述亚单位疫苗。本发明所述纯化蛋白与佐剂的体积比优选为1:1；所述乳化优选在500r/min条件下进行；所述乳化的时间优选为5～10min，进一步优选为 6～8min。当本发明所述衣原体抗原为momp、omcb、inca和cpaf中的多种组合时，本发明优选将利用重组质粒pet-30a-momp、pet-30a-omcb、 pet-30a-inca和pet-30a-cpaf所得的纯化蛋白momp、纯化蛋白omcb、纯化蛋白inca和纯化蛋白cpaf中的多种混合，得到混合蛋白后，与所述佐剂混合。当本发明所述混合蛋白为纯化蛋白momp和纯化蛋白omcb的混合物时，所述纯化蛋白momp和纯化蛋白omcb的质量比优选为1:1；当所述混合蛋白为纯化蛋白momp、纯化蛋白omcb、纯化蛋白inca和纯化蛋白cpaf的混合物时，所述纯化蛋白momp、纯化蛋白omcb、纯化蛋白inca和纯化蛋白cpaf的质量比优选为1:1。本发明所述乳化的方式使制备得到的亚单位疫苗呈乳白，乳化型为水包油包水，吸取少许滴于水面不会出现云雾状扩散。小鼠免疫第7d通过病理组织切片观察，接种部位组织结构完好，没有出现炎性浸润，表明接种的疫苗安全，配种后第12d进行攻毒，小鼠正常生产率为73％显著高于阴性对照组的22％，生产的亚单位疫
苗具有一定的保护效果。本发明所得亚单位疫苗稳定性强，且安全性好。
41.本发明还提供了所述亚单位疫苗在制备预防和/或因衣原体引起的疾病的药物中的应用。本发明所述因衣原体引起的疾病优选包括流产，死胎，关节炎和结膜炎中的一种或多种。本发明所述亚单位疫苗对包括猪、牛、羊和牦牛在内的多种哺乳动物因衣原体引起的疾病均具有预防和/或作用。本发明绵羊免疫保护试验结果表明，本发明亚单位疫苗具有较好的免疫效果，免疫组全部产生较高水平的特性抗体，能有效的清除机体衣原体数量，减轻胎盘组织病理损伤，流产保护率为61.5％。
42.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
43.如无特殊说明，实施例中提及的步骤均为常规步骤。
44.实施例1
45.(1)种毒的复苏与检验：将冻存的l929细胞复苏后，加入含10％胎牛血清的dmem培养基，于5％co2的细胞培养箱中培养。培养的l929细胞生长至约80％进行传代，弃掉培养基，用无菌pbs洗2遍后加入0.25％的胰蛋白酶，待其充分消化后，接种于6孔细胞培养板中(3
×
104个细胞/孔)中培养12h。弃掉培养基，用无菌pbs洗2遍，再用不含血清的dmem培养基洗1遍，将流产衣原体gn-6菌株(由中国农业科学院兰州兽医研究所畜禽重要人兽共患病细菌组保存)用不含血清的dmem培养基稀释成感染复数(multiplicity of infection， moi)为1的感染液，每孔加入5ml感染液，37℃，3000g离心1h，置于细胞培养箱中2h，弃掉感染液，加入含的培养基继续培养48h，取一块细胞板进行姬姆萨染镜检，在细胞内只看见大量紫红的衣原体包涵体，而没有任何其他杂菌污染，此流产衣原体可用于感染绵羊。将无污染的细胞的培养基弃掉，用无菌pbs洗2遍，用无菌spg溶液反复吹打，将细胞收集到50ml 离心管中于超声细胞破碎仪上进行超声裂解(振幅5hz，超声2s，间隔2s，共超声20次)，4℃，3000g离心5min收集上清保存于-80℃待用。
46.(2)蛋白抗原的制备：以步骤(1)提取的流产衣原体gn-6基因组dna 作为模板，以表1(表1斜体部分表示酶切位点)中的引物对omcb-f/r为扩增引物，利用pcr扩增技术扩增编码omcb的基因；将扩增出的omcb编码基因和用ecor
ⅴ
/xhoⅰ双酶切后的pet-30a质粒进行凝胶纯化回收；用t4连接酶将纯化回收产物在16℃下过夜连接。连接体系(20μl)如下：pet-30a 4μl；目的片段13μl；10
×
t4 dna连接酶缓冲液2μl；t4 dna连接酶1μl。取8μl连接产物转化到大肠杆菌dh5α感受态中并涂布含卡那霉素的lb固体平板，于37℃ 恒温培养16h，挑取单克隆，扩大培养后提取质粒进行pcr和酶切鉴定，将阳性克隆送西安擎科泽西生物科技有限责任公司测序。测序正确的重组质粒命名为pet-30a-omcb。
47.(3)将鉴定正确的重组质粒转化至大肠杆菌bl21(de3)感受态中，经 pcr鉴定为阳性的菌液按照1:100(v/v)比例转接至含卡那霉素的lb液体培养基(1l lb液体培养基+1ml 50mg/ml硫酸卡那霉素)中，于37℃200r/min条件下震荡培养至吸光度od
600
＝0.6时，加入终浓度为0.8mm的iptg继续培养 4h后，250w超声4s，间隔6s，共超声20min后离心收集沉淀，将处理好的沉淀加入带his标签的树脂中进行纯化，利用10ml咪唑缓冲液洗脱，并收集流出的缓冲液，得到纯化蛋白omcb。
48.(4)纯化蛋白omcb经电泳后进行考马斯亮蓝染分析，结果如图1中d 所示，用不同浓度的尿素对目的蛋白进行复性，图中1～8表示利用不同咪唑缓冲液洗脱得到的缓冲
液中蛋白的纯化效果，具体的，1～8号泳道中依次使用10ml纯化蛋白omcb、10ml的10nm咪唑缓冲液、20nm咪唑缓冲液、50nm咪唑缓冲液、100nm咪唑缓冲液、200nm咪唑缓冲液、300nm咪唑缓冲液和400nm咪唑缓冲液洗脱。
49.根据图1可以看出，利用咪唑缓冲液洗脱后出现了与预期大小相同的较单一的目的条带，没有杂蛋白，并且随着咪唑缓冲液浓度的提高洗脱的蛋白浓度也逐渐升高。
50.实施例2
51.同实施例1，区别在于步骤(2)以表1(表1斜体部分表示酶切位点)中的引物对cpaf-f/r为扩增引物，利用pcr扩增技术扩增编码cpaf的基因；将扩增出的cpaf编码基因和用ndeⅰ/xhoⅰ双酶切后的pet-30a质粒进行凝胶纯化回收，得到重组质粒pet-30a-cpaf，考马斯亮蓝染结果如图1中b所示，最终得到纯化蛋白cpaf。
52.实施例3
53.同实施例1，区别在于步骤(2)以表1(表1斜体部分表示酶切位点)中的引物对inca-f/r为扩增引物利用pcr扩增技术，扩增编码inca的基因；将扩增出的inca编码基因和用ndeⅰ/salⅰ双酶切后的pet-30a质粒进行凝胶纯化回收，得到重组质粒pet-30a-inca，考马斯亮蓝染结果如图1中c所示，最终得到纯化蛋白inca。
54.实施例4
55.同实施例1，区别在于步骤(2)以表1(表1斜体部分表示酶切位点)中的引物对momp-f/r为扩增引物利用pcr扩增技术，扩增编码momp的基因；将扩增出的momp编码基因和用ecor
ⅴ
/xhoⅰ双酶切后的pet-30a质粒进行凝胶纯化回收，得到重组质粒pet-30a-momp，考马斯亮蓝染结果如图1中a所示，最终得到纯化蛋白momp。
56.实施例5
57.蛋白抗原乳化与检验：选用montanide
tm
isa201佐剂高压消毒。将实施例2得到的纯化蛋白cpaf与油佐剂montanide
tm
isa201按1:1的体积比混合、摇均匀。在500rpm剪切力的条件下乳化10min，乳化抗原呈乳白，乳化型为水包油包水，吸取少许疫苗滴于水面不会出现云雾状扩散即可，得到cpaf疫苗，分装入疫苗瓶。
58.实施例6
59.同实施例5，区别在于将实施例3得到的纯化蛋白inca与油佐剂montanide
tm
isa201按1:1的体积比混合、摇均匀，乳化后得到inca疫苗，分装入疫苗瓶。
60.实施例7
61.同实施例5，区别在于将实施例1得到的纯化蛋白omcb与实施例4得到的纯化蛋白momp按照1:1的质量比混合，得到混合蛋白后与油佐剂montanide
tm
isa201按1:1的体积比混合、摇均匀，乳化后得到omcb+momp疫苗，分装入疫苗瓶。
62.实施例8
63.同实施例5，区别在于将实施例1得到的纯化蛋白omcb、实施例2得到的纯化蛋白cpaf、实施例3得到的纯化蛋白inca与实施例4得到的纯化蛋白momp按照1:1:1:1的质量比混合，得到混合蛋白后与油佐剂montanide
tm
isa201按1:1的体积比混合、摇均匀，乳化后得到omcb+momp+inca+cpaf疫苗(mixture疫苗)，分装入疫苗瓶。
64.测试例1
65.随即取样，每瓶受检疫苗分别接种小白鼠，进行无菌检验、安全检验和效力检验。
66.(1)实验分组：取120只生长状况一致的雌鼠，随机平均分为6组，分别为：阳性对照组(20只小鼠)、pbs对照组(20只小鼠)、momp+omcb组 (20只小鼠)、cpaf组(20只小鼠)、inca组(20只小鼠)和mixture组(20 只小鼠)。
67.(2)实验方法：在超数排卵的第0d，每个组选择阴门微张开，阴道黏膜淡粉红的15只雌鼠，腹腔注射pmsg 8iu，48h后腹腔注射hcg 8iu，将雌鼠与单独饲养的雄性小鼠按照1:1比例进行同期发情后合笼，合笼12h后，观察阴门栓形成情况，有阴门栓的表示配种成功，阳性对照组、pbs对照组、 momp+omcb组、cpaf组、inca组和mixture组成功怀孕的小鼠分别为11只、 10只、12只、11只、9只和32只；
68.配种后第12d进行攻毒，具体的，阳性对照组腹腔注射100μl鸡胚卵黄囊膜甲醛灭活疫苗(3.2
×
103ifu)；pbs对照组腹腔注50μl pbs和50μl佐剂； momp+omcb组腹腔注射30μg实施例7得到的omcb+momp疫苗；cpaf组腹腔注射30μg实施例5得到的cpaf疫苗；inca组腹腔注射30μg实施例6得到的inca疫苗；mixture组腹腔注射30μg实施例8得到的mixture疫苗，免疫后第7d进行病理组织切片观察，结果如图2所示；接种5d后小鼠生产情况如表2。
69.表2小鼠生产情况
[0070][0071]
根据图2和表2可以看出，接种部位小鼠组织结构完好，没有出现炎性浸润，表明接种的疫苗安全；momp+omcb组、cpaf组、inca组和mixture组小鼠正常生产均高于pbs处理组，尤其mixture组小鼠正常生产率为73％，显著高于阴性对照组的22％，优于阳性对照，并且11只怀孕小鼠接种本疫苗后，食欲精神状况良好，接种部位未出现不良反应。本发明将4种蛋白混合得到的亚单位疫苗能够降低小鼠的流产率，对怀孕小鼠具有一定的保护效果。
[0072]
测试例2
[0073]
随即取样，每瓶受检疫苗分别接种绵羊，检测绵羊生产性能。
[0074]
(1)实验分组：使用商品化的chlamydophila abortus indirect multi-specieselisa试剂盒、弓形虫iha检测试剂盒和布鲁氏菌虎红平板试验检测无流产衣原体、弓形虫和布鲁氏菌感染的8～10月龄绵羊50只，随机分成3组，第1组 (vaccinated)为免疫攻毒组20只绵羊，第2组(control)为非免疫攻毒组15 只绵羊，第3组为空白对照组(sentinel)15只绵羊。使用b超仪挑选出阴道黏膜充血，子宫颈口充血的母羊，在第0天将孕激素阴道栓放入母羊阴道深部子宫颈，12d后取出阴道海绵栓，每只母羊左侧颈部肌肉注射pmsg 300iu，第 14天对种公羊进行采精，95℃水浴10min新鲜羊奶冷却40℃后稀释精液，然后通过输精器插入子宫颈外口内约1～2cm处开始输精，配种48d后用b超仪器检查怀孕情况。同期发情配种48d后用兽用b超仪器检查绵羊妊娠情况，免疫攻毒组、非免疫攻毒组和空白对
照组成功怀孕的绵羊分别为13只、10只和11只。 (2)实验方法：配种后第60天，免疫攻毒组每只怀孕绵羊左侧颈部肌肉注射实施例8得到的mixture疫苗攻击，攻毒剂量为400μg；非免疫攻毒组每只怀孕绵羊左侧颈部肌肉注射500μl pbs和500μl 201佐剂；空白对照组不注射任何制剂。从攻毒后第1天开始每天观察生产情况，结果表明，非免疫攻毒组正常生产率为0％，流产率为100％，妊娠第82天有1只绵羊流产，妊娠第107天有 1只羊流产，妊娠第125天至妊娠第135天共有6只羊流产，妊娠第142天有1 只羊产下弱胎，35h后弱胎死亡，妊娠146天有1只羊产下弱胎，12h后死亡；免疫攻毒组正常生产率为61.5％，流产率为38.5％，妊娠第104天有1只羊流产，妊娠第125天至妊娠140天有4只羊流产，其余正常生产；空白对照组妊娠第 143天至妊娠第149天11只羊全部正常生产。
[0075]
本发明实施例8得到的亚单位疫苗具有较好的免疫效果，免疫组全部产生较高水平的特性抗体，能有效的清除机体衣原体数量，减轻胎盘组织病理损伤，流产保护率为61.5％。
[0076]
上述实施例表明，本发明亚单位疫苗能够具有较好的免疫效果，安全性高，可以产生较高水平的抗体，能够预防流产。
[0077]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

技术特征：

1.一种动物流产衣原体亚单位疫苗，其特征在于，包括衣原体抗原和佐剂；所述衣原体抗原包括momp、omcb、inca和cpaf中的四种、三种、两种的组合或任意一种。2.根据权利要求1所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述佐剂包括montanide
tm
isa 201。3.根据权利要求1或2所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述的亚单位疫苗的形式为水包油包水。4.权利要求1～3任一项所述的亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：表达编码所述衣原体抗原的基因，纯化，得纯化蛋白；将所述纯化蛋白与佐剂混合，乳化，得到所述亚单位疫苗。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纯化蛋白与佐剂的体积比为1:1。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述乳化在500r/min的条件下进行；所述乳化的时间为5～10min。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述表达的步骤包括：构建含有所述衣原体抗原编码基因的重组质粒，转化至大肠杆菌，培养至吸光度od
600
＝0.6时，加入蛋白诱导剂，继续培养3～5h，得到所述衣原体抗原。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白诱导剂包括iptg；所述iptg的工作浓度为0.8mm。9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纯化的方式包括梯度洗脱。10.权利要求1～3任一项所述的亚单位疫苗或权利要求4～9任一项所述制备方法得到的亚单位疫苗在制备预防和/或因衣原体引起的疾病的药物中的应用。

技术总结

本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种动物流产衣原体亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明亚单位疫苗，包括衣原体抗原和佐剂；所述衣原体抗原包括MOMP、OmcB、incA和CPAF中的一种或多种组合。本发明亚单位疫苗具有较好的免疫效果，安全性高，可以产生较高水平的抗体，能够预防和/或因衣原体引起的疾病，例如流产。如流产。如流产。