对虾起到防控病害作用，除 鱼规格250克/尾的1只池塘在养殖中发生虾病、未能得到及时控制而导致减产、养殖效益偏低(可能与套养的 鱼规格、数量有关)外，其余试验虾池养殖效益均较对照虾池高，其中放养 鱼规格500克/尾的池塘养殖效益最好，亩效益高达7648元。对照组产量有所下降，亩效益仅为1948元。南美白对虾套养斑点叉尾 生物防控
试验结果可见，套养一定数量、适宜规格的斑点叉尾 能较好地起到防控对虾病害作用，养殖效益相对较高。
大规格斑点叉尾 吞食的摄食特性可
以捕食发病和濒临死亡的南美白对虾，能有效切
dst指数断病原体的传播，控制虾病的发生和蔓延，降低了养殖风险，从而达到生物防控病害的效果。
近年来，江苏省、连云港市积极落实国家
《关于加快推进水产养殖绿发展的若干意见》，不断加大现代渔业升级转型力度，探索南美白对虾生物防控健康养殖新技术、新模式，取得了较
大成果。通过不同规格斑点叉尾 套养南美白对虾生物防控健康养殖试验示范，进一步总结规律，整理出一套适用性、推广性较强的对虾生物防控健康养殖生产技术，为南美白对虾养殖生物防控技术提供一定的理论与实践技术支撑。
表1
斑点叉尾 、南美白对虾生物防控投入情况
池塘编号12345678面积(亩)4.54.54.554.544.54虾苗数量(万尾)16161617.516141614金额(元)44804480448049004480392044803920 鱼规格(克/尾)750750500500250250//数量(尾)130130130150130120//金额(元)12351235123514251040960//花白鲢数量(尾)27002700270030002700270027002700金额(元)270270270300270270270270饲料
重量(千克)1500152515751600127513651507.51340金额(元)
109501113211498116809307.59964110059782其他
(元)550055005500
6110450048885500
4888
表2斑点叉尾 、南美白对虾生物防控收获情况
池塘编号12345678面积(亩)4.54.54.554.544.54南美白对虾
重量(千克)1040112512501254490630697.5620金额(元)4576048375525005517617640252002790024800 鱼(元)292530003150376032502850//花白鲢(元)18001900175020252060145019801850净利润(元)280503065834417365463352.5949886257790亩效益(元)
6233
6813
7648
7309745
2375
1917
1948铁元素是大多生物体的必需元素之一，虽然地壳中铁元素的含量占第4位，但是细菌可以吸收利用的游离Fe 3+浓度极低。铁离子以及铁离子与蛋白质结合，参与微生物体内DNA 的合成、过氧化物的降解、生物固氮等重要的生命活动过程(张莹等，2012)。铁载体(Siderophores)是由微生物(细菌、真菌)在低铁环境中产生的一类低分子量、高亲和力的铁螯合剂，因其与许多细菌的致病性密切相关而引人注目。铁载体能与铁发生特异性的结合反应，是细菌获铁系统的重要组成部分，它能够帮助病原菌从宿主的铁结合蛋白上获得铁，通过特异性的细胞膜受体将铁转移至细胞中，并参与细菌生长与代谢(Plowman 等，1994)。 目前，已报道创伤弧菌、鳗弧菌、哈维氏弧
菌、河流弧菌、副溶血弧菌等均能产生铁载体，并且对所产生铁载体的类型和结构，以及铁载体与外膜蛋白的关系进行了研究(马向东等，1999)。本文研究了黄海希瓦氏菌AP629在不同限铁培养基中的生长情况，用CAS 检测平板对AP629的铁载体进行定性研究，用CAS 液体培养法对AP629的铁载体进行定量研究，比较了两种培养方法铁载体的产量，摸清了铁载体产生的最佳条件，为铁载体的类型及铁载体与外膜蛋白的关系等深入研究奠定基础。 干油站一、材料和方法1.材料
油泵法兰黄海希瓦氏菌(Shewanella smarflavi )AP629分离于大连地区患“化皮病”的仿刺参，由
吴秋仙
(盐城市亭湖区水产技术推广站，江苏盐城
224001)
实验室证实为病原菌，-80℃保存。黄海希瓦氏菌
参考菌株KCCM41822由韩国釜庆大学疾病预防实验 室赠送。CAS检测平板：每100毫升含20%蔗糖溶
液l毫升，10%酸水解酪素3毫升，1毫摩/升
CaC1
2
红外线测速仪100微升，1毫摩/升MgSO
4
2毫升，琼脂
1.8克，在约60℃时缓慢加入盐溶液和CAS染液各
5毫升，即得蓝检测培养基。所有溶液均用去离
子水配制。按照Schwyn B等(1987)的方法配制CAS
灯管支架
(铬天青)染液且避光保存。
2.方法
(1)不同浓度螯合剂对细菌生长的影响。将黄
海希瓦氏菌AP629和参考菌株接种于海水营养琼脂
(NA)上，28℃培养24小时，将形成的细菌单菌落
接种于含有2,2’－联吡啶浓度为0、25、50、75、
100、150、200、250、300微摩/升的LB和TSB培
养基中，28℃振荡(180转/分)培养24小时，用分
光光度计测波长600纳米处的吸光值。
(2)铁载体的检测。CAS蓝染液是由络天
青、溴化十六碳烷基三甲铵和铁离子组成的一种
复合物，呈亮蓝。当细菌产生铁载体时，这种
物质会结合CAS染液中的铁离子，使其从CAS蓝
复合物中解离出来，失去铁离子的CAS蓝检测液
的颜会变为橘黄。由于颜变化，630纳米光
密度变小，故铁载体的量可通过CAS比值来表示
(马国文等，1999)。CAS比值：(对照－测量)/对
照。对照组为未加螯合剂2,2’－联吡啶、未加细
菌的LB、TSB培养基。测量组为加不同浓度螯
合剂2,2’－联吡啶及细菌的LB、TSB培养基。
(3)CAS检测平板上的定性检测。将黄海希瓦
氏菌AP629、参考菌株KCCM41822以及大肠杆菌等
参考菌株，用TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)培养基培
养，接种后于28℃下培养24～48小时；用三角刮
刀将菌体刮下，PBS重悬，并稀释成5×106细胞/
毫升菌液。取20微升滴至CAS检测平板上，28℃
下培养24小时。在菌落的周围固体平板由原来的
亮蓝变为橙，这种典型的颜改变即是铁载
体分泌圈(Sohwyn B等，1987)。
(4)液体培养基中铁载体的定量检测。菌株上
清液中铁载体的检测参考高磊等(2007)的方法进
行。取培养获得的黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株
KCCM41822的菌悬液，12000转/分离心10分钟，
提取上清液与等量的CAS染液混合，静置数分钟，
用分光光度计测波长630纳米处的吸光值。
二、结果与分析
1.不同浓度螯合剂对细菌生长的影响
黄海希瓦氏菌在TSB、LB中限铁生长见图1、
图2。在TSB培养基中两株菌随着2,2’－联吡啶浓
度的渐增先迅速上升，后逐渐下降，两株菌在2,
2’－联吡啶浓度为25微摩/升时均生长最旺盛，当
2,2’－联吡啶的浓度达到300微摩/升时，黄海希
瓦氏菌AP629和参考菌株KCCM41822几乎不生长。
在LB培养基中，两株菌的生长量低于TSB中的生
长量，随着2,2’－联吡啶浓度的渐增，生长量逐
渐降低，黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株KC-
CM41822在2,2’－联吡啶浓度为50、100微摩/升
时均生长最旺盛，当2,2’－联吡啶的浓度达到
300微摩/升时，黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株
KCCM41822几乎不生长。菌株在加入一定浓度的螯
合剂后，会促进它的生长。
2.铁载体的检测
(1)CAS检测平板上的定性检测。结果表明，
在菌落的周围固体平板由亮蓝变为橙，这种
典型的颜改变即是铁载体分泌圈所致。从
图3A(1-2，3-4)可以看出，黄海希瓦氏菌AP629和
参考菌株菌落的周围变成橙，表明两株菌能够
产生铁载体；图3B(1-2)大肠杆菌菌落周围的橙
较大，说明分泌的铁载体较多。从图3C(3-4)可
见，假单胞菌在CAS检测平板上不能生长；从
图1黄海希瓦氏菌在TSB中限铁生长
图2
黄海希瓦氏菌在LB
中限铁生长
图3C、图3D 可见，溶藻弧菌和嗜水气单胞菌较迟钝爱德华氏菌的铁载体分泌圈稍小。
图3不同菌株铁载体形成能力比较
总线上的音频设备(2)液体培养基中铁载体的定量检测。铁载体的产生是通过蓝染液的颜变化来观察的。本试验用TSB 培养基发现不同浓度螯合剂对培养基的颜产生了影响，使培养基的颜略微呈现橘黄，如图4所示，干扰了结果的观察，因此，TSB 不宜作为检测铁载体的培养基。
图4
不同浓度2,2’－联吡啶TSB 上清液中铁载体检测
两株菌在LB 培养基上清液中分泌的铁载体产
量如图5所示。AP629在2,2’－联吡啶浓度为50微摩/升时铁载体产量最高，参考菌株在100微摩/升时铁载体产量最高。
图5LB 培养基中铁载体检测
三、讨论
本文研究了不同浓度螯合剂2,2’－联吡啶对黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株生长以及铁载体产生的影响。结果表明，培养基中加入2,2’－联吡啶后螯合了环境中的铁，细菌若没有产生铁载体其生长量必然减少，而试验结果细菌数量反而增加，说明了黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株为了在限铁环境中生存，已经产生了铁载体，以利于自身的生长。在TSB 培养基中，黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株的产铁载体的界限浓度都是50微摩/升；在LB 培养基中，两株菌的产铁载体的界限浓度分别是100、200微摩/升。当环境中铁离子浓度越高，越能通过非特异性系统摄取铁营养，而只有在铁营养不足时，细菌才合成铁载体来摄取铁。这些现象说明在黄海希瓦氏菌的生长中，铁这一营养因素扮演了重要的角。
本文采用了Sohwyn B 等(1987)的固体平板检测法来检测菌株的产铁载体的能力。结果表明，黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株能够产生铁载体；大肠杆菌菌落周围的橙圈较大，从而得出其能分泌较多的铁载体；假单胞菌在CAS 检测平板上不能生长，可能是合成铁载体量较少的细菌由于体系中的Fe 3+受到更强的限制，从而生长受到抑制；溶藻弧菌和嗜水气单胞菌较迟钝爱德华氏菌的铁载体分泌圈稍小。本文结果表明，不同菌种对于铁离子浓度的要求是有差异的，产生铁载体的能力也是有所不同的。
在对两株菌进行液体培养基检测时发现，TSB 不宜作为检测铁载体的培养基，本试验采用了LB 培养基。检测黄海希瓦氏菌AP629和参考菌株KCCM41822在LB 培养基上清液中的铁载体含量，结果表明，黄海希瓦氏菌AP629在2,2’－联吡啶浓度为50微摩/升时铁载体产量最高，参考菌株KCCM41822
在
100
微摩/升时铁载体产量最高。
A(1-2)：黄海希瓦氏菌参考菌株；A(3-4)：黄海希瓦氏菌AP629；B(1-2)：大肠杆菌参考菌株；B(3-4)：黄海希瓦氏菌AP629；C(1-2)：溶藻弧菌参考菌株；C(3-4)：假单胞菌参考菌株；D(1-2)：嗜水气单胞菌参考菌株；D(3-4)：迟钝爱德华氏菌参考菌株
A-B：黄海希瓦氏菌AP629；C-D：黄海希瓦氏菌参考菌株；AP629：A1-3、A4-6、A7-9、A10-12、B1-3、B4-6、B7-9、B10-12对应的2,2’－联吡啶浓度分别为0、25、50、100、150、200、250、300微摩/升；参考菌株：C1-3、C4-6、C7-9、C10-12、D1-3、D4-6、D7-9、D10-12对应的2,2’－联吡啶浓度分别为0、25、50、100、150、200、250、300微摩/升；E1：CAS 染液
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议