〔附简图)
一．生产前的准备工作
〔1〕生产用菌种的鉴定:主要包括纯度鉴定，生产性能的检查，有无杂菌污染。还有就是菌种的活性，重要特性有无退化等。防伪印章
〔2〕如菌种已发生功能性改变或被杂菌污染，还需要进行菌种的纯化或或复壮。
〔3〕其次在规模生产之前，还要通过实验室中试，确定该菌的最适生长温度，PH，发酵培养基的最适成分与比例；生长曲线的绘制与最适培养时间确实定。我们一般选取对数生长期的菌体〔丝〕做为生产发酵用的菌种。最正确接种量与装液量的控制。 〔1〕将冷冻保藏管中的菌种在斜面中活化〔37℃ 24h〕，并在平板中进行纯化〔37℃ 24h〕。最终得到斜面菌种或菌种斜面。
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斜面培养基成份 | 葡萄糖 | 牛肉膏 | 蛋白胨 | Nacl | 琼脂 | PH |
组成比例 | 0.1% | 1% | 1% | 0.5% | 2.0-2.5% | |
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〔2〕摇瓶培养阶段: 取一环纯化后的的菌种，接入装量为20mL种子培养基的250mL三角瓶中，置于180r/min中摇床中培养 (37℃ 18h)。 分别取1mL的种子液 ,接入五个盛有20mL发酵培养基的250 mL 三角瓶中。置于180 r/ min摇床中 培养〔37℃ 24h〕 。接种量为三角瓶实际培养基装量的4-5%.PH控制在7.0-7.5之间。
培养基组成见下表：
摇瓶种子培养基成分 | 葡萄糖 | 尿素 | 硫酸镁 | 光盘封套磷酸氢二钾 | 玉米浆服务器平台 | 硫酸亚铁 | 硫酸锰 | PH |
各组成成分比例〔%〕再生油 | 2.5 | 0.5 | 0.04 | 0.1 | | 2ppm | 2ppm | 7.0 |
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〔注；1ppm=1mg/l)
三．生产车间多级种子罐发酵阶段：
工艺流程 工艺条件 中控
蒸汽 0.103MPa~0.168 MPa
0.5h~1.0h
d型管
种子罐
一级种子罐 PH值检测
培养基 加料体积50%~75%，实际为60% PH6.5~7.5
121℃~125℃
蒸汽 0.103MPa~0.168 MPa
0.5h~1.0h
灭菌空气 25℃~35℃
常压
物料量的0.5-5%.实际接种量为1%
灭菌空气 25℃~35℃ 镜检：
24~36h
消泡剂 芽孢形成率≧80%
搅拌转速：180r/min
二级种子罐重复上述操作和参数控制
其中，由摇瓶菌种向一级种子罐的接种量，控制在一级种子罐实际装料量的0.5%-5.0%;PH控制在6.5-7.5;发酵温度控制在25℃~35℃；装料量控制在种子罐公称容积的60%左右。搅拌转速控制为180r/min.
二级种子罐的具体工艺操作和参数控制和一级种子罐大体相同。二级种子罐培养基成分应尽可能的接近主体发酵罐培养基成分。
通过上述二级种子罐发酵培养，我们大致可以得到450L的发酵种子液。〔计算如下：0.6*0.01*V=0.225L由此可得V=37.5L即通过一级种子发酵，我们可以得到22.5L的发酵菌体或菌丝。二级种子罐的接种量为5%。即0.6*0.05*V=22.5L)即V=750L.即通过二级种子发酵，我们大致可以得到450L的二级种子发酵液。
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