一种含有线粒体靶向肽SS31的HAMA水凝胶的制作方法

一种含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶
技术领域
1.本发明涉及hama水凝胶技术领域，尤其涉及一种含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶。

背景技术：

2.脱发是皮肤科的一种常见病、多发病，包括了脂溢性脱发、斑秃、创伤性脱发、化疗后脱发等，好发于社会生活压力大、学习工作紧张、长期睡眠不足的20到40岁的脑力劳动者。毛发脱落虽然不会危及生命，但是严重影响人的外貌美观，在人们追求美好生活质量的今天，脱发的发病率逐年升高，且伴有低龄化倾向，给患者带来沉重的心理负担和精神痛苦，严重影响生活质量。以临床脱发中发病率最高的脂溢性脱发(又称为雄激素源性脱发)为例，其特征表现为进行性毛囊微型化，目前用于雄激素源性脱发的非手术手段主要有药物、中药、干细胞和物理(激光照射、微针)等。
3.目前用得最多的药物是米诺地尔和非那雄胺。米诺地尔发挥作用的物质是经磺基酶代谢的产物米诺地尔硫酸盐，所以该药物更适合酶活性高的患者使用。米诺地尔虽然在临床已经使用了三四十年，但是依旧存在一些问题，比如局部使用会导致接触性皮炎、皮肤瘙痒干燥，需要终生持续用药，中途停药容易出现毛发脱落，这些都让患者难以坚持。非那雄胺是一种选择性ⅱ型5a-还原酶抑制剂，可以阻断睾酮向二氢睾酮转化，减少雄激素活性代谢产物形成，从而达到目的。此疗法一般用于男性病人，但是耗时长且效果有限——需要至少3到6月的长期规律服药才有一定的临床效果，而且长出的毛发质量差，停药后易脱落，男性病人使用后还会导致性欲降低、勃起功能障碍等性功能相关的不良反应。
4.中药脱发历史悠久，方案多样，主要分为辩证分型、专方专药、针灸三方面。虽然许多的方案在临床随访过程中有着不错的疗效，但是绝大多数方法的作用机制机理研究不清，仅停留在临床观察层面。中医的辨证分型十分复杂，对医生的医术水平要求很高，也导致了药物的效果存在较大的个体差异，而且中药起效缓慢，需要患者长期坚持服药。
5.干细胞是将间充质干细胞、脂肪干细胞等干细胞注射于脱发部位，干细胞逐渐分化形成毛囊样结构的一种方法。该方法一定程度上弥补了药物和中药的不足，但仍然存在着许多问题，如：干细胞来源不足，存在致瘤风险和伦理学争议等。
6.激光照射或微针等手段促进毛囊再生均属于物理。虽然这些方法的安全性较高，但因机制未明，临床效果不甚理想，常作为辅助手段与其他方式结合应用。

技术实现要素：

7.本发明的目的在于提出一种可以均匀分布于皮肤，提升生发效果的hama水凝胶。
8.为达到上述目的，本发明提出一种含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，将线粒
体靶向肽ss31溶液加入到甲基丙烯酰化透明质酸(hama)液体中，通过紫外光源照射原位形成水凝胶。
9.进一步的，ss31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，ss31的浓度为0.06-2mg/ml。
10.进一步的，ss31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度大于0.25％v/w。
11.进一步的，所述水凝胶用于脱发部位，持续减轻毛囊的应激压力和加快毛囊干细胞的迁移增殖，使得脱发部位长出毛发。
12.与现有技术相比，本发明的优势之处在于：
13.1、本技术含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶作用于脱发部位后，ss31可以减轻活性氧积累过多对细胞的损伤作用，能够让细胞产生更多的atp，促进细胞能量代谢，增强细胞活力，加快细胞的增殖，在短时间内在缺损部位到毛囊样结构，短时间实现生发效果。
14.2、本技术中的甲基丙烯酰化透明质酸(hama)，具有优异的生物相容性、生物活性和生物可降解性，还具有孔隙率高、比表面积大等独特的理化优点，能够有利于细胞的粘附、增殖和分化。hama固体能够溶于含有光固化激发剂的pbs溶液中，当受到紫外光激发时就可以在短时间内由液态变成水凝胶。
15.3、将ss31与hama混匀后，能够让ss31均匀的分布在皮肤表面，而且随着hama的降解可以缓释出ss31，让它长期、持续作用于脱发部位。
附图说明
16.图1为本发明实施例中不同浓度ss31不同时间段对细胞促进作用的柱状图；
17.图2为本发明实施例中不同浓度的甲基丙烯酰化透明质酸在紫外光激发下成胶能力比对图；
18.图3为本发明实施例中hama水凝胶对毛囊的再生效果。
具体实施方式
19.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案作进一步地说明。
20.本发明提出一种含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，将线粒体靶向肽ss31(h2n-darg-dmt-lys-phe-nh2)溶液加入到甲基丙烯酰化透明质酸(hama)液体里，保证ss31的浓度在0.06-2mg/ml之间，如图1所示，不同浓度的ss31处理细胞后，分别在处理后第一天、第三天、第五天和第七天通过cck8实验检测代表细胞的活力od值，其中control组在培养基里加入了等量的pbs；
21.hama的浓度大于0.25％v/w，如图2所示，据前期实验结果显示当甲基丙烯酰化透明质酸的浓度低于0.25％v/w在紫外光激发下成胶能力很差，为了满足甲基丙烯酰化透明质酸能够成胶，其浓度最好》0.25％v/w。
22.混匀后在需要生发部位涂上薄薄的一层含有ss31的hama液体，然后通过紫外光源照射原位形成水凝胶，或者将含有ss31肽的hama液体在紫外光交联后形成一层薄薄的水凝
胶后敷在需要生发的部位。形成的水凝胶可以牢固的粘在皮肤表面不脱落，较长时间贴在皮肤表面。如图3所示，前期实验结果显示，在大鼠背上造直径为2厘米的全层皮肤缺损模型，然后在创面处覆盖上含ss31的甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶。造模后第七天将创面处取材做he染。实验结果发现，不含ss31肽的水凝胶组和无处理的对照组呈瘢痕增生，没有毛囊样结构，而加有ss31肽的水凝胶组此时在再生区域出现了毛囊样结构。
23.hama水凝胶不仅有着优异的生物相容性，而且hama可以作为ss31的载体。如果将ss31直接敷在皮肤表面，大体上ss31溶液在皮肤上的分布无法做到均匀，微观上ss31肽分子之间也会聚集形成大小不等的ss31团块，而且由于ss31不能粘在皮肤上，很快就会随着汗液或摩擦等方式损失掉，没法达到长期、持续作用，无法保证效果均一。
24.而采用hama包裹ss31，hama水凝胶在发挥自己本身的优异生物相容性的同时，不仅能够在皮肤表面形成厚度可控的包含ss31的水凝胶层，而且形成的水凝胶能够将ss31分子锁定在相对固定的水凝胶网络中间阻止其聚团，达到让ss31均匀的分布在皮肤表面的效果。随着hama的缓慢降解，逐渐释放出水凝胶内部的ss31，让它不断的作用于脱发部位，持续减轻毛囊的应激压力和加快毛囊干细胞的迁移增殖，达到脱发部位能够在较短时间内长出毛发。
25.脱发的分类多样有脂溢性脱发、斑秃、创伤性脱发等，它们的主要病因有毛囊周围微环境的血管不足和过度氧化应激。过度的氧化应激会引起毛囊细胞的凋亡和毛乳头细胞的提前衰老，而且毛囊干细胞的激活受阻，正常的毛囊生长周期被打破，阻碍毛囊从静止期向生长期转化。另外，氧化应激导致的活性氧累积也会造成血管闭塞，加重血供不足，加速毛囊坏损。所以氧化应激在脂溢性脱发的发病机制中占有至关重要作用。活性氧(ros)是氧化应激过程中最主要的作用物质，来源于线粒体氧化呼吸链过程。ss31肽(h2n-darg-dmt-lys-phe-nh2)是一种能够靶向作用于线粒体，与线粒体膜上的心磷脂结合的短肽。在氧化应激环境下能够通过竞争性与心磷脂结合，阻止心磷脂与附近的细胞素c结合，从而让细胞素c能够用于细胞氧化呼吸过程，最终达到活性氧在呼吸链上转移利用更加顺畅。所以ss31不仅可以减轻活性氧积累过多对细胞的损伤作用，而且能够让细胞产生更多的atp，促进细胞能量代谢，增强细胞活力，加快细胞的增殖。
26.甲基丙烯酰化透明质酸(hama)，具有优异的生物相容性、生物活性和生物可降解性，还具有孔隙率高、比表面积大等独特的理化优点，能够有利于细胞的粘附、增殖和分化。hama固体能够溶于含有光固化激发剂的pbs溶液中，当受到紫外光激发时就可以在短时间内由液态变成水凝胶。
27.将ss31与hama混匀后，均匀涂抹在需要生发部位，然后用紫外光源照射形成水凝胶，或者将含有ss31的hama水凝胶在体外成形后敷在需要生发的部位，这样就能够让ss31均匀的分布在皮肤表面，而且随着hama的降解可以缓释出ss31，让它长期、持续作用于脱发部位。
28.在前期试验中我们在大鼠背上制造了直径为2厘米的圆形全层皮肤缺损，然后在大鼠创面上涂上含有ss31的hama水凝胶，在第七天时将大鼠创面取材并做he组织切片。结果显示不含ss31肽的水凝胶组和无处理的对照组呈瘢痕增生，没有毛囊样结构，而加有ss31肽的水凝胶组此时在再生区域出现了毛囊样结构。实验提示了ss31对细胞具有很强的保护作用，而且能够在较短的时间促进毛囊干细胞的增殖与迁移，促进毛囊再生。与目前有
研究报道的绝大多数促进全层皮肤缺损修复的药物及方式相比，含有ss31的hama水凝胶能够在相对短的时间里在缺损部位到毛囊样结构。
29.上述仅为本发明的优选实施例而已，并不对本发明起到任何限制作用。任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的技术方案的范围内，对本发明揭露的技术方案和技术内容做任何形式的等同替换或修改等变动，均属未脱离本发明的技术方案的内容，仍属于本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.一种含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，其特征在于，将线粒体靶向肽ss31溶液加入到甲基丙烯酰化透明质酸(hama)液体中，通过紫外光源照射原位形成水凝胶。2.根据权利要求1所述的含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，其特征在于，ss31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，ss31的浓度为0.06-2mg/ml。3.根据权利要求1所述的含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，其特征在于，ss31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度大于0.25％v/w。4.根据权利要求1所述的含有线粒体靶向肽ss31的hama水凝胶，其特征在于，所述水凝胶用于脱发部位，持续减轻毛囊的应激压力和加快毛囊干细胞的迁移增殖，使得脱发部位长出毛发。

技术总结

本发明提出一种含有线粒体靶向肽SS31的HAMA水凝胶，将线粒体靶向肽SS31溶液加入到甲基丙烯酰化透明质酸(HAMA)液体中，通过紫外光源照射原位形成水凝胶。SS31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，SS31的浓度为0.06-2mg/ml；SS31和甲基丙烯酰化透明质酸的混合溶液中，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度为0.25％v/w。本发明通过将SS31与HAMA混匀后用紫外光源照射形成水凝胶，将水凝胶在体外成形后敷在需要生发的部位，利用HAMA的特性，能够让SS31均匀的分布在皮肤表面，而且随着HAMA的降解可以缓释出SS31，让它长期、持续作用于脱发部位，有效达到生发效果。有效达到生发效果。有效达到生发效果。