牛营超，崔立星，丁 露，等．柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的多样性及功能分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０２２，５０（２３）：１１０－１１５．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２２．２３．０１６ 柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的多样性及功能分析
牛营超１，崔立星１，丁 露１，戴小华１，２，郭青云１
，２
（１．赣南师范大学生命科学学院潜叶昆虫研究组，江西赣州３４１０００；２．国家脐橙工程技术研究中心，江西赣州３４１０００）
摘要：基于１６ＳｒＲＮＡ、ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉＳｅｑ高通量测序技术研究柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌组成的多样性，探索中肠细菌的潜在功能。通过１６ＳｒＲＮＡ宏基因测序分析，共获得２０３８６４条高质量序列，通过聚类分析获得５５０个操作分类单元（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌｔａｘｏｎｏｍｉｃｕｎｉｔ，ＯＴＵ），总共注释到１１门、２１纲、４２目、７１科、９９属。在门分类水平上，变形菌门（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）细菌占比为９０．８３％，为优势门；在属分类水平上，沙雷氏菌属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）细菌占比为４５．５２％，为优势属。在柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的
潜在功能中，代谢通路的丰度最高（８０．６７％），主要执行糖类代谢、氨基酸代谢。利用传统微生物分离纯化培养方法从柑橘潜叶甲幼虫中肠中共分离鉴定得到５株细菌，分别属于沙雷氏菌属（２株）、不动杆菌属（３株）。结果显示，柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌组成多样性丰富，研究结果有利于了解内食性潜叶昆虫的生命活动过程，可为今后开发该类害虫的新型防控技术提供基础。 关键词：柑橘潜叶甲；肠道细菌多样性；１６ＳｒＲＮＡ；高通量测序
中图分类号：Ｓ４３３．５；Ｓ１８６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２２）２３－０１１０－０６
收稿日期：２０２１－１１－１８
基金项目：国家自然科学基金（编号：３２１６０３１４、４１９７１０５９、３１７６０１７３）；江西省柑橘产业技术体系岗位专家项目（编号：ＪＸＡＲＳ－０７－病虫害防控）；赣州市创新领军人才计划（编号：［２０２０］６０）。
作者简介：牛营超（１９９６—），女，河南焦作人，硕士研究生，主要从事潜叶昆虫肠道微生物相关的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：２６０７１８５０６８＠ｑｑ．ｃｏｍ。
通信作者：郭青云，博士，副教授，研究方向为微生物组学、昆虫－微生物互作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉｎｇｙｕｎ６１２＠１６３．ｃｏｍ。
昆虫中肠是昆虫进行食物消化吸收的重要场所，栖息于中肠的微生物与寄主昆虫协同进化、互
惠共生，对昆虫的生命活动具有重要的影响［
１－２］
。中肠微生物的落结构和代谢活动不仅受到宿主昆虫中肠微环境的影响，还在宿主的生长发育、免疫反应、营养代谢、抵御病害和农药抗性等方面发
挥着重要作用［１，３－５］
。１６ＳｒＲＮＡ基因文库技术和
ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉＳｅｑ测序技术极大地推动了昆虫肠道微生物领域的研究。目前，昆虫中肠细菌多样性的研究主要集中在鳞翅目、鞘翅目、等翅目和膜翅目等昆虫中，已经取得不少进展，其优势细菌的种类因
昆虫种类而异［６］。
柑橘潜叶甲（ＰｏｄａｇｒｉｃｏｍｅｌａｎｉｇｒｉｃｏｌｌｉｓＣｈｅｎ）隶属于鞘翅目（Ｃｏ
ｌｅｏｐｔｅｒａ）叶甲科（Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌｉｄａｅ），是潜食性柑橘害虫，主要分布在我国南部柑橘产
地［７］。柑橘潜叶甲于每年４月上中旬孵化成幼虫
潜入柑橘类植物叶片中，取食叶片的幼嫩组织，仅留下叶片的上下表皮细胞，且具有转潜道行为，大量暴发时会严重降低叶片的光合作用，进而影响柑
橘的产量，造成经济损失［
８］
。柑橘潜叶甲幼虫，因其潜食在叶片内，药物很难直接接触虫体，防治较
为困难。近年来有大量报道显示，肠道微生物可能作为防治害虫的新型靶标，研究者已在此基础上开发出新的防控技术。目前，柑橘潜叶甲的研究主要集中在形态、生理生化和防治上，有关肠道微生物的研究未见报道。本研究选择枳叶片上的柑橘潜叶甲幼虫为研究对象，基于１６ＳｒＲＮＡ基因的高通量测序技术研究柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的种类组成及多样性，以期为该害虫的防治提供新策略。同时，本研究利用传统微生物培养方法从柑橘潜叶甲幼虫中肠中分离细菌，以期为未来利用生物学试验验证柑橘潜叶甲幼虫中肠微生物的功能提供菌株材料。１ 材料与方法
１．１ 试验材料
加法器电路供试昆虫为２０２１年４月在江西省龙南市柑橘园采集的柑橘潜叶甲幼虫，寄主为枳［Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ（
Ｌ．）Ｒａｆ．］。１．２ 柑橘潜叶甲幼虫中肠的分离及总基因组ＤＮＡ的提取
取４０头柑橘潜叶甲幼虫，饥饿处理４８ｈ后在
无菌环境下用７５％乙醇对幼虫体表进行３ｍｉｎ的消毒，用无菌水清洗幼虫体表的乙醇３次，使用无菌镊子和眼剪将幼虫中肠取出，置于无菌的１．５ｍＬＥＰ管内，１０头虫的中肠为１个重复，共设３个重复［９］。用Ｍａｇ－ＢｉｎｄＳｏｉｌＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔ（Ｏｍｅｇａ）试剂盒提取柑橘潜叶甲幼虫肠道细菌总ＤＮＡ，将检测合格的样品于－８０℃保存备用。
１．３ 柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高通量测序
以提取的肠道总基因组为模板，采用通用引物３３８Ｆ（５′－ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡ－３′）、８０６Ｒ（５′－ＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷＴＣＴＡＡＴ－３′）扩增细菌１６ＳｒＲＮＡＶ３～Ｖ４区［１０］。５０μＬＰＣＲ扩增体系如下：２μＬ基因组ＤＮＡ模板，０．５μＬＴａＫａＲａＬＡＴａｑＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ，５μＬ１０×Ｂｕｆｆｅｒ，上、下游引物
（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）各１μＬ，４μＬｄＮＴＰｓ（各２．５ｍｍｏｌ／Ｌ），３６．５μＬｄｄＨ
２
Ｏ。ＰＣＲ扩增条件：９４℃５ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，５５℃３０ｓ，７２℃４５ｓ，３５个循环；７２℃１０ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增反应重复３次。将扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳检测，浓度和特异性合格后送至上海派森诺生物科技股份有限公司进行双端测序（使用ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅｑ２５００平台）。
１．４ 生物信息学分析
将测序得到的原始数据用ＱＩＩＭＥ２（２０１９年４月）的ｑｉｉｍｅｃｕｔａｄａｐｔｔｒｉｍ－ｐａｉｒｅｄ切除序列的引物片段，弃去未匹配引物的序列［１１－１２］；通过调用ＤＡＤＡ２进行质控、去噪、拼接、去嵌合体，得到有效序列［１３］。用ＵＳＥＡＲＣＨ（ｖ７．０．１０９０）软件在９７％的相似度下进行操作分类单元（ＯＴＵ）聚类，并用Ｓｉｌｖａ数据库对扩增获得的柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌１６ＳｒＲＮＡ序列进行物种注释［１４］。用ＰＩＣＲＵＳｔ２ＫＥＧＧ数据库分析柑橘潜叶甲幼虫中肠菌在第１、２级功能通路水平上的丰度，预测菌对宿主的潜在功能［１５］。
１．５ 柑橘潜叶甲幼虫中肠可培养细菌的分离培养取１０头柑橘潜叶甲幼虫，参照“１．２”节的方法取出中肠，置于灭菌的１．５ｍＬＥＰ管内，加入１００μＬ无菌磷酸缓冲盐溶液（ＰＢＳ），用灭过菌的研磨棒将中肠研磨至匀浆状，将研磨好的匀浆用无菌水稀释至１０－１～１０－６。取稀释度为１０－４、１０－５、１０－６的３个匀浆溶液均匀涂抹至ＬＢ培养基（分别称取１０ｇ蛋白胨、５ｇ酵母提取物、１０ｇＮａＣｌ、２０ｇ琼脂，用蒸馏水定容至１Ｌ，ｐＨ值为７．０）上进行分离培养，各稀释度重复３次。将平板于３７℃培养箱内培养３ｄ。通过观察菌落的颜、大小和形态分离纯化单菌落，经多次纯化，得到纯单克隆菌株，保存于－８０℃备用。
１．６ 柑橘潜叶甲幼虫中肠可培养细菌的１６ＳｒＲＮＡ基因扩增及系统发育分析
用ＴＩＡＮａｍｐＢａｃｔｅｒｉａＤＮＡＫｉｔ（ＤＰ－３０２）提取细菌总ＤＮＡ。采用细菌通用引物２７Ｆ（ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ）、１４９２Ｒ（ＣＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣ）扩增１６ＳｒＲＮＡ基因［１６］。５０μＬＰＣＲ反应体系：１μＬ基因组ＤＮＡ，上、下游引物（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）各２μＬ，２５μＬＰｒｉｍｅＳＴＡＲＭＡＸＤＮＡ聚合酶，２０μＬｄｄＨ
内裤加工２
Ｏ。扩增程序：９５℃３ｍｉｎ；９５℃１５ｓ，５５℃３０ｓ，７２℃１ｍｉｎ，３０个循环；７
２℃１０ｍｉｎ。扩增结束后用１．０％琼脂糖凝胶进行检测，切取目标ＤＮＡ条带，用ＯｍｅｇａＤ２５００－０２ＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化后测序。将所获序列在ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行ＢＬＡＳＴ同源比对［１７］，选取各个菌株的近缘序列，采用最大似然（ＭＬ）算法，用ＭＥＧＡ７．０软件构建系统发育树，用ｂｏｏｔｓｔｒａｐ验证进化树的可靠性［１８］。强力磁盘
水过滤板２ 结果与分析
２．１ 高通量测序结果和ＯＴＵ聚类分析
通过１６ＳｒＲＮＡ高通量测序，共得到２１９００３条柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的原始序列，通过质控拼接，共得到２０３８６４条优质序列，序列的平均长度为４２５ｂｐ。基于９７％的相似水平，柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌通过聚类分析共获得５５０个ＯＴＵ，隶属于１１门、２１纲、４２目、７１科、９９属。
２．２ 柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的种类组成与丰度基于ＯＴＵ的分类结果，分别从门、纲、目、科、属５种不同分类等级上对柑橘潜叶甲幼虫中肠菌种类和相对丰度进行分析。由图１可以看出，在门分类水平上，注释到的优势菌有变形菌门（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、厚壁菌门（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、放线菌门（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、拟杆菌门（Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄｅｔｅｓ）、异常球菌－栖热菌门（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ－Ｔｈｅｒｍｕｓ）、绿弯菌门（Ｃｈｌｏｒｏｆｌｅｘｉ）、疣微菌门（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、埃普西隆杆菌门（Ｅｐｓｉｌｏｎｂａｃｔｅｒａｅｏｔａ）、蓝细菌门（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、Ｐａｔｅｓｃｉｂａｃｔｅｒｉａ等，其中以变形菌门、厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门为优势菌门，相对丰度占比分别为９０．８３％、４．８０％、２．３０％和１．０４％。
测控系统
在纲分类水平上，柑橘潜叶甲幼虫中肠菌由γ－变形菌纲（Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、α－变形菌纲（
Ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、梭菌纲（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）、放线菌纲（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、芽孢杆菌纲（Ｂａｃｉｌｌｉ）、拟杆菌纲（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｉａ）、丹毒丝菌纲（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈｉａ）、异常球菌纲
（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｉ）、β－变形菌纲（Ｄｅｌｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ＯＬＢ１４等２１个纲组成。其中γ－变形菌纲、α－变形菌纲是优势菌，占比分别为７３．７１％、１６．９７％。
在目分类水平上，柑橘潜叶甲幼虫中肠菌由肠杆菌目（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ）、根瘤菌目（Ｒｈｉｚｏｂｉａｌｅｓ）、海螺菌目（Ｏｃｅａｎｏｓｐｉｒｉｌｌａｌｅｓ）、假单
胞菌目（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ）、
伯
克
氏
菌
目
（Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ）、梭菌目（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ）、黄单胞菌目（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｌｅｓ）、微球菌目（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ）、柄杆菌目（Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒａｌｅｓ）、丹毒丝菌目（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｌｅｓ）等４２个目组成。其中主要的优势菌是肠杆菌目，相对丰度占比为５３ ５９％，而根瘤菌目、海螺菌目和假单胞菌目次之，相对丰度占比分别为１５．５２％、９．２８％和５．４９％。
在科分类水平上，柑橘潜叶甲幼虫中肠菌隶属于肠杆菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、德沃斯氏菌科（Ｄｅｖｏｓｉａｃｅａｅ）、盐单胞菌科（Ｈａｌｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）
、根瘤菌科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）、假单胞菌科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、伯克氏菌科（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ）、单胞菌科（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、丹毒丝菌科（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）、生丝单胞菌科（Ｈｙｐｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、消化链球菌科（
Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）等７１个科。其中主要的优势菌是肠杆菌科，相对丰度占比为５３．５９％，其次是德沃斯氏菌科、盐单胞菌科、根瘤菌科、假单胞菌科，相对丰度分别为９．７３％、９．２８％、５．５２％、５．１４％
。
在属分类水平上，柑橘潜叶甲幼虫中肠菌主要由沙雷氏菌属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、Ｐｅｌａｇｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、嗜盐单胞菌属（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ）、假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、欧文氏菌属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、泛菌属（Ｐａｎｔｏｅａ）、苍白杆菌属（
Ｏｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ）、苏黎世杆菌属（Ｔｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒ）、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｅｌｌａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ等９９个属组成。其中优势菌为沙雷氏菌属、Ｐｅｌａｇｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、嗜盐单胞菌属、假单胞菌属，相对丰度占比分别为４５．５２％、
９ ７３％、９．２８％、５．１４％。
２．３ 柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌功能分析
利用ＰＩＣＲＵＳｔ２预测柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌在ＫＥＧＧ第１、２分类层次功能通路的丰度，其中第１分类层次功能通路有６种，分别为代谢（８０ ６７％）、遗传信息处理（１０．０３％）、细胞过程（４ ９８％）、环境信息处理（３．８％）、生物体系统（０ ３３％）和人类疾病（０．１９％）（图２）。由于代谢
功能通路对应的丰度占比是一级通路丰度占比的４倍，因此预测柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的主要功能是代谢。柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌代谢功能的二级通路共有２
８种（图２）。各二级通路在全部样本中的占比如下：糖类代谢占１４．３６％，氨基酸代谢占１２ ８５％，辅助因子和维生素代谢占１１．７６％，萜类和多酮代谢占８．１０％，生物降解和代谢占７．７０％，
其他氨基酸代谢占７．６８％，脂质代谢占６．５８％，能量代谢占５．１３％，细胞活性占３．２１％，糖类生物合成和代谢占２
．８４％，其他次生代谢产物的生物合成占２．０６％。预测柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的功能是代谢体内各种物质，主要参与糖类、氨基酸和维生素的代谢，同时次要参与外源化学物质、萜类和
多酮类化合物的降解。
２．４ 柑橘潜叶甲幼虫中肠可培养细菌的分离和鉴定
从ＬＢ固体培养基中共分离得到５株形状有差异的细菌菌落，分别编号为ＰＮ１、ＰＮ２、ＰＮ３、ＰＮ４、ＰＮ５。菌落形态均为圆形且边缘整齐，其中ＰＮ２、ＰＮ４为湿润光滑的乳白菌落，ＰＮ１、ＰＮ２、ＰＮ５为小的白菌落。将从柑橘潜叶甲幼虫中肠中分离的５株可培养细菌用通用引物进行１６ＳｒＲＮＡ扩增，测
序后将序列上传至Ｇ
ｅｎＢａｎｋ。将得到的１６ＳｒＤＮＡ序列在ＮＣＢＩ数据库进行ＢＬＡＳＴ比对，分析序列的同源性，并构建ＭＬ系统发育树（图３）。结果表明，ＰＮ２、ＰＮ４菌株与沙雷氏菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ）的亲缘关系最近，聚为１支，鉴定为沙雷氏菌（图３－Ａ）。ＰＮ１、ＰＮ３和ＰＮ５菌株与不动杆菌（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）的亲缘关系最近，聚为１支，鉴定为不动杆菌。从可培养微生物数量来看，以沙雷氏菌为优势菌（图３－Ｂ）。
３ 讨论与结论
本研究基于１６ＳｒＲＮＡ和ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉＳｅｑ开展了潜食性害虫柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌多样性组成分析，共注释到１１门、２１纲、４２目、７１科、９９属。柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌
主要以变形菌门（９１％）、厚壁菌门（５％）、放线菌门（２％）和拟杆菌门（１％）为主。研究发现，昆虫的肠道共生细菌的优势门虽然存在各式差异，但是变形菌门细菌是肠道的主要菌之一［１９］。如Ｃｕｉ等发现，潜食性昆虫黄黑趾铁甲（Ｄａｃｔｙｌｉｓｐａｘａｎｔｈｏｓｐｉｌａ）成虫肠道细菌主要分为３０门、６４纲、１３５目、２０７科、３６９属，其中以变形菌门（９２％）、拟杆菌门（３．４％）和厚壁菌门（２．５％）为优势菌［９］。张某等研究发现，专性寄生内食性昆虫泽兰实蝇（Ｐｒｏｃｅｃｉｄｏｃｈａｒｅｓｕｔｉｌｉｓ）幼虫肠道细菌注释到１３门、４纲、６目、７科、１０属，其中变形菌门细菌为优势菌（９９％）［２０］。陈宏健等研究发现，鞘翅目昆虫松墨天牛（Ｍｏｎｏｃｈａｍｕｓａｌｔｅｒｎａｔｕｓ）成虫中肠细菌主要分为２２门、４８纲、１１２目、１７２科、２８５属，其中变形菌门为主要优势菌（９３％）［２１］。
在属分类水平上，柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌以沙雷氏菌属为优势属（４５．５２％），该属细菌在许多昆虫肠道中作为优势菌存在，能够帮助宿主昆虫高效降解纤维素、单萜或双萜等物质［２２－２３］。在已有的其他鞘翅目昆虫研究中，昆虫肠道优势菌属存在物种、虫态差异，如黄黑趾铁甲成虫肠道细菌以肠杆菌属为优势属［９］；国内室内饲养的松墨天牛的成虫中肠细菌以沙雷氏菌属为优势属，室外成虫肠道细菌以肠杆菌属为优势属［２１］；寄生于栎属的象甲肠道细菌以假单胞菌属为主［２４］。肠杆菌属、沙雷氏菌属属于肠杆菌科变形菌门细菌，普遍存在于动物肠道中，主要在纤维素、碳水化合物等代谢中起作用［２５］。
纳米除臭装置
本研究利用传统微生物学分离法对柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌进行离体培养时，发现沙雷氏菌为优势菌，其次是不动杆菌，与１６ＳｒＲＮＡ高通量测序结果一致。沙雷氏菌作为条件致病菌，在很多昆虫如小菜蛾、黄粉虫、椰心叶甲等肠道中被离体培养分离出来［２６－２８］，该类细菌可能长期参与昆虫的共进化并对昆虫的生命活动有重要作用。不动杆菌具有协助宿主消化食物和转化氮素的功能，该类菌也在蜜蜂、斜纹夜蛾和褐飞虱肠道中分离培养出来［２９－３１］。柑橘潜叶甲幼虫主要潜食在柑橘类植物叶片里，以叶肉为食，肠道菌可能受到柑橘植物与土壤微生物的影响，其影响程度和相关性还需进一步通过其他试验进行验证。这些优势肠道细菌的功能值得我们关注和研究，以期能发掘出与柑橘潜叶甲潜食性相关的肠道细菌或特定基因，用于该类害虫的综合防控。
昆虫肠道菌多样性丰富，许多菌与宿主昆虫之间相互依赖、协同进化［２］，影响着昆虫的生命活动。本研究还利用ＰＩＣＲＵＳｔ２预测柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌的潜在功能，结果显示，柑橘潜叶甲幼虫中肠细菌有８０％执行代谢功能，主要通过代谢碳水化合物和氨基酸等为寄主提供营养物质，也有参与对外源化学物质、萜类和多酮类化合物及其他次生代谢物质的降解功能，同时肠道菌也参与宿主遗传信息处理过程。研究结果表明，柑橘潜叶甲肠道细菌多样性丰富，多数菌不仅参与了营养代谢，还可能帮助宿主昆虫解毒。该研究结果有利于了解内食性潜叶昆虫的生命活动过程，为今后进一
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议