苯并〔a〕芘是多环芳香烃类化合物，又名3，4－苯并芘，简称Bap，分子式C20H12；分子量253.23；沸点475℃；熔点179℃；相对密度1.351。3，4－苯并芘纯品为无或微黄针状结晶，在水中溶解度较小，易溶于苯、氯仿、乙醚、丙酮、环己烷、二甲苯等有机溶剂。在苯中溶解呈蓝或紫荧光，在浓硫酸中呈桔红并伴有绿荧光。3，4－苯并芘是环境中普遍存在的对动物致癌性很强的一种物质，主要是含碳燃料及有机物热解过程中的产物。煤炭、石油等在无氧加热裂解过程中产生的烷烃、烯烃，经过脱氢、聚合，常可产生一定数量的3，4－苯并芘。工厂烟气中的悬浮颗粒物上吸附有3，4－苯并芘，散布在大气，一部分降落到水面和陆地上，从而污染水源和土壤。炼焦、化工、染料等工厂排出的工业废水中以及熏制食品、香烟烟雾中均含有3，4－苯并芘。 3，4－苯并芘对动物具有局部和全身的致癌作用，对猴子反复皮下注射可在局部形成肿瘤，从气管反复滴注可形成肺癌，在小鼠身上涂抹可使小鼠诱发皮肤癌。流行病学调查认为人的肺癌与环境中3，4－苯并芘的含量之间有着极为密切关系。虽然目前各国尚无公认3，4－苯并芘的最高容许浓度，但通过动物试验和现场调查提出了一些建议，例如： 车间空气中3，4－苯并芘最高容许浓度为0.14μg/m3； 居民区大气最高容许浓度为10－3μg/m3。 飘尘上有机物的组分异常复杂，仅其中多环芳烃(简称PAH)就有几百种之多。测定3，4－苯并芘的方法很多，主要是将3，4－苯并芘与其他多环芳烃分开，常用的有柱层、纸层、薄层、气相谱、高压液相谱、气质联机等一系列分离体系。其中以气相谱法分离PAH尤为重要。 利用气相谱法分离迅速、效能高，再与薄层层析结合起来，可以迅速判断提取物中某些PAH的存在。特别是用毛细管谱与质谱及核磁共振谱联用，从城市悬浮颗粒物、烟草焦油及汽车废气中，可分离出100多种PAH，极大地发挥了气相谱的分离效能。 用高压液相谱法分离PAH比气相谱法具有以下优点：工作温度低(＜80℃)对被分离的各组分可以完整地收集起来，再进一步的用紫外或荧光光谱分析。谱柱是十八烷基硅烷(ODS)化学键为固定相。被检样品在注入分离柱前，最好先经过薄层作初步分离，除去其中混杂的烷烃、烯烃、杂环等化合物，以减轻分离柱的负担，此种方法可以和薄层层析联用，是一种快速鉴定PAH较好的方法。 柱层、纸层和薄层层析法，所需设备简单、操作容易，易于掌握和推广。但是，柱层析法和纸层析法所需时间长，分离效果较差，无法排除PAH异构体之间的干扰，使之不能精确定量。为了改进分离效果，可以先经过柱层析，再在乙酰化纸上进行分离。乙酰化纤维素薄层分离同分异构体效果较其他薄层为好。采用两种吸附剂(如氧化铝和40%乙酸的乙酰化纤维素)混合制板，进行双向展开，第一向用正烷＋苯(9＋1)，第二向用甲醇＋乙醚＋水(4＋4＋1)。这时可以将干扰3，4－苯并芘的几种干扰物分离，进行几种主要PAH的定量测定。 因苯并〔a〕芘是多环芳香烃类化合物，气相谱-质谱法被广泛采用。 执行标准： 1、环境空气 苯并[a]芘的测定 高效液相谱法 GB/T 15439-1995 样品采集：崂应2031型 智能大流量TSP（PM10）采样器 2、固定污染源排气中苯并（a）芘的测定 高效液相谱法HJ/T 40-1999 样品采集：崂应3012H型 自动烟尘（气）测试仪 3、环境空气和废气 气相和颗粒物中多环芳烃的测定气相谱-质谱法 HJ646-2013 空气样品采集：崂应2033B型 环境空气挥发性有机物采样仪 废气样品采集：崂应3075型 智能烟气有机物采样仪 4、气相和颗粒物中多环芳烃的测定高效液相谱法 HJ647-2013 备注：“环境空气和废气 气相和颗粒物中多环芳烃的测定气相谱-质谱法 HJ646-2013”此方法被广泛采用。 附录A：高效液相谱法测定环境空气中苯并芘。 一、高效液相谱法〔1〕 (一)原理 空气中颗粒物中的多环芳烃被采集在玻璃纤维滤纸上，经索氏提取或真空升华后，用高效液相谱分离测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。 (二)仪器 (1)大流量采样器见第十二章第一节总悬浮颗粒物大流量采样称量法。 (2)索氏提取器容量60ml。 (3)升华管见图6－9。 (4)真空升华装置 见图6－10。 (5)浓缩器及浓缩瓶 见图6-11 (6)微量注射器 10μl、20μl，刻度应校正。 (7)离心机 4000rpm。 (8)离心管 5ml，刻度应校正。 (9)高效液相谱仪 附荧光检测器或紫外检测器。 (三)试剂 (1)玻璃纤维滤纸规格见第十二章第一节总悬浮颗粒物。滤纸需作预处理，方法是将滤纸不重叠地放在高温炉中，经500℃灼烧30min，保存备用。 (2)谱柱 内径4mm，长20cm不锈钢柱，内装YWG－CH型微粒硅胶粒子(10μm)，塔板数为30000/m，柱压不超过5MPa。 (3)苯 重蒸馏。 (4)甲醇 重蒸馏。 (5)环己烷 重蒸馏。 (6)碱性氧化铝 200～300目。 (7)标准溶液 取一个10ml棕容量瓶，准确称量，然后小心加入约10mg苯并〔a〕芘①，再准确称量，两次称量之差即为苯并〔a〕芘质量。加苯溶解并稀释至刻度，计算每毫升溶液中苯并〔a〕芘的含量。然后再用甲醇稀释成1.00ml含100μg苯并〔a〕芘的贮备液。临用时，用甲醇稀释成1.00ml含2μg苯并〔a〕芘的标准溶液。贮于棕容量瓶中，置冰箱中保存。 (四)采样 采样方法同第十二章第一节中“总悬浮颗粒物大流量采样－重量法” (五)分析步骤 1.液相谱仪测试条件 分析时，应根据液相谱仪的型号和性能制定能测定苯并〔a〕芘的最佳测试条件。 柱温：室温。 流动相：(3＋1)甲醇＋水。 流动相温度：40℃。 流量：1ml/min。 柱压：4MPa。 检测器：紫外检测器波长 254nm。 荧光检测器激发波长 365nm。 荧光检测器发射波长 405nm。 2.绘制标准曲线和测定校正因子 在作样品测定的同时，绘制标准曲线或测定校正因子。 (1)绘制标准曲线将液相谱仪调至最佳测试条件，如用紫外检测器，可用微量注射器分别吸量1.00ml含100μg苯并〔a〕芘标准溶液5、10、15、20μl注入谱仪；如用荧光检测器，可用微量注射器分别吸量1.00m1含2μg苯并〔a〕芘标准溶液2、4、6、8、10μl注入谱仪，得苯并〔a〕芘的谱峰和保留时间。另取试剂空白溶液作零浓度点的测定，每个浓度重复三次测定，得峰面积或峰高的平均值。以苯并〔a〕芘的含量(ng)为横坐标，峰面积(mm2)或峰高(mm)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归线的斜率。以斜率倒数作为样品测定的计算因子Bs(ng/mm2或ng/mm)。 (2)测定校正因子在测定的线性范围内，可用单点校正法求校正因子。在样品测定同时，取试剂空白溶液和与样品提取溶液苯并〔a〕芘浓度相接近的标准溶液，按液相谱的最佳测试条件进行测定，得苯并〔a〕芘的谱峰和保留时间。重复做三次，得峰面积或峰高的平均值。用下列公式计算校正因子： 式中f——校正因子，ng/mm2或ng/mm； cs——标准溶液中苯并〔a〕芘含量，ng； As——标准溶液平均峰面积或峰高，mm2或mm； A0——试剂空白溶液平均峰面积或峰高mm2或mm。 3.样品测定 (1)样品提取 用索氏提取法或真空升华法。 ①索氏连续提取法：采样后，取80～100cm2的玻璃纤维滤纸，折叠后放进索氏提取器，加40ml环己烷，于沸水浴中连续提取8h(每小时回流次数不少于10次)。将提取液移至浓缩器中，在70～80℃水浴上减压浓缩至0.5～1.0ml(不可蒸干)。将浓缩液转移至5ml离心管内，用少量环已烷洗涤浓缩瓶，合并于离心管内，使总体积控制在1.0ml。加入0.5g碱性氧化铝，摇匀，离心5min，取上清液待测。 ②真空升华提取法：采样后，取80～100cm2的玻璃纤维滤纸，卷成筒状，放入升华管内。勿使滤纸折叠或堵塞管口，旋紧磨口。接口处用少量石膏浆密封，石膏固化后，将升华管放在管状电炉内，连接气路和真空泵，将管内抽成真空，3～5min后，转动三通活塞4，向管内充氮气，再抽真空、再充氮气，如此重复三次，以除去管内残留的空气。同时，将管状炉升温至300℃，升华40min。此时，可看到黄的油状物凝集在升华管的毛细管内壁上，为防止升华物被抽走，可在毛细管一端外壁放一小块纱布，裹以冰块冷却。待管状电炉温度下降至室温后，转动三通活塞，使内外气压平衡，关闭真空泵(避免真空泵的油进入管道和真空规中)。取下升华管，旋开磨口，将毛细管的大口朝上，垂直地固定在铁架上。用100μl注射器吸取甲醇，注入毛细管内壁，必要时可用金属丝摩擦管壁，帮助溶解，如此重复多次冲洗内壁，冲洗液收集于浓缩管中，将洗脱液浓缩至0.1～0.5ml，即为待测样品。 (2)样品分析在液相谱仪的最佳测试条件下，取1～20μl样品提取液(根据浓度大小决定进样量)注入谱仪，得谱峰，以保留时间确认苯并〔a〕芘峰，测定峰面积(mm2)或峰高(mm)，重复做三次，得峰面积或峰高的平均值。 在样品测定的同时，取同样规格及大小的未采样滤纸，按相同的操作步骤作试剂空白测定。 (六)计算 1.用绘制标准曲线法 式中c——空气中苯并〔a〕芘浓度，μg/100m3； A样品溶液峰面积或峰高，mm2徐山泉或mm； A0——试剂空白溶液峰面积或峰高，mm2或mm； Bs——用标准溶液绘制标准曲线得到的计算因子，ng/mm2或ng/mm； V1样品提取溶液的总体积，ml； V2——注入谱仪中样品溶液的体积，ml； S1——滤纸总过滤面积，cm2； S2——分析时所取滤纸的过滤面积，cm2； Es——由实验室确定的苯并〔a〕芘平均提取效率； V0——换算成标准状况下的采样体积，m3。 2.用单点校正法 式中f——用单点校正法得到的校正因子，ng/mm2或ng/mm； 其他符号与上式相同。 (七)说明 (1)检出限和测定范围本法检出限0.1ng(荧光检测器)、10ng(紫外检测器)。用荧光检测器测定范围为0.2～20ng苯并〔a〕芘。如采样体积为1440m3，取1/5滤纸样品，制成溶液总体积为1ml，进样量为10μl，则可测浓度范围为0.007～0.7μg/100m3。 (2)精密度对浓度为0.17～17mg/L的溶液重复测定的相对标准差为9.5%～3.1%。 (3)干扰与排除样品经过预处理以及谱柱分离，消除了大部分有机物的干扰。 (4)真空升华法和连续提取法各具优缺点。前法操作简单、快速、节省溶剂，可同时提取一组样品，但需要有一定的设备和条件，后法不需要特殊仪器设备，方法简单，提取效率高，易推广；缺点是使用溶剂多，需要增加浓缩这一步骤，提取时间太长。试验证明，这两种方法提取颗粒物中苯并〔a〕芘的回收率都很高，加入5μg苯并〔a〕芘，真空升华法回收率为95%～100%，索氏提取法为96%～108%。 (5)3，4－苯并芘是致癌性物质，操作人员要特别注意防护，防止污染。接触3，4－苯并芘溶液时，要带医用橡胶手套，并在专用实验台上操作，标准溶液要注意保管。测定后的3，4－苯并芘废液应集中起来，统一处理。所用过的玻璃仪器，必须用铬酸钾－硫酸洗液浸泡4h以上，最好浸泡过夜后用水洗净。 (6)谱条件的选择 ①流动相：用甲醇和水调节其不同比例，在每种比例下，变化流量，固定柱温，用萘、联苯、菲、蒽混合样品测量在各种条件下的保留值、柱效和蒽菲的分离度，结果见表6－10。 表6－10 流动相极性、流量变化对多环芳烃保留值、柱效和分离度(菲、蒽)的影响 续表 流动相甲醇和水的比例影响分离组分的保留值、柱效和分离度。如增加甲醇，保留时间减少，柱效和分离度发生变化，这主要是由流动相极性变化所引起的。另外，流量对保留时间、柱效和分离度也有影响，如流量变大，则保留时间减小，柱效降低，分离度下降。因此，对于甲醇和水的比例以及流量均须严格控制恒定。 ②柱温：提高柱温能缩短保留时间、增加塔板数(见表6－11)，这是由于温度增高，溶剂粘度减少，增加了溶剂在固定相中的渗透性，所以加快了分离；但温度过高，对低沸点溶剂(如甲醇)易形成气泡析出，影响结果。 表6－11 柱温对保留值、柱效和分离度影响 (7)标准和空气样品的谱图 标准和空气样品的谱图示于图6－12、图6－13、图6－14，空气样品测量结果列于表6－12。 表6－12 大气飘尘中多环芳烃含量(ng/m3) 从谱图上看到，二个环的仅知道萘和联苯，三个环的有蒽、菲二个峰，这在气相谱不易分开，而用液体谱是可以分开的。四个环的芘和荧蒽基本能分开，和苯并〔a〕蒽是难分离的异构体，此法虽能分开，但不理想。五个环的有苯并〔e〕芘、苯并〔a〕芘和苝是能分开的。 仪器型号用北京分析仪器厂生产的SY01型高压液体谱仪UV－254检测器得到多环芳烃标准曲线如图6－15。 二、纸层析－荧光分光光度法〔1〕 (一)原理 采集在玻璃纤维滤纸上颗粒物中的多环芳烃，经索氏提取或真空升华后，用苯洗脱浓缩，经乙酰化滤纸层析分离，分离出的苯并〔a〕芘在紫外光照射下呈蓝紫荧光斑点，用苯洗脱或斑点直接扫描，用荧光分光光度法定量。 (二)仪器 (1)层析缸 5L。 (2)紫外灯 附365或254nm滤光片。 (3)具塞比管 10ml，刻度需校正。 (4)荧光分光光度计 用10mm石英比皿，在激发波长385nm和发射波长400～410nm下测定荧光强度或附薄层扫描装置，用于荧光斑点直接扫描测定荧光强度。 其他仪器 同一法(415页)。 (三)试剂 (1)玻璃纤维滤纸 同一法(415页)。 (2)苯 重蒸馏。 (3)环己烷 重蒸馏。 (4)二氯甲烷 重蒸馏。 (5)无水乙醇 重蒸馏。 (6)乙酰化溶液 按150ml苯、50ml乙酸酐和0.1ml硫酸的比例混合配制。 (7)层析滤纸 新华牌中速层析滤纸。 (8)展开剂 无水乙醇十二氯乙烷，按(2＋1)比例(体积比)配制。 (9)乙酰化滤纸 将层析滤纸裁成长27cm、宽15cm。取20张卷成圆筒形，逐张浸入到盛有2000ml乙酰化溶液的烧杯中，滤纸圆筒状中空部分放入一个高10cm，内径6cm玻璃管(防止滤纸在搅拌时被搅破)。将电动搅拌棒置于玻璃柱中心，在(50～55)℃下缓慢搅拌6h，在搅拌浸泡过程中，溶液液面始终保持超出滤纸1cm，并在通风橱中进行。然后，静置浸泡过夜。取出滤纸在通风橱内晾干，再将滤纸逐张放入无水乙醇中浸泡4h以上，取出晾至微干，夹入粗滤纸之间，用玻璃板压平至干备用。经乙酰化处理过的滤纸，对着光线观察，质地应均匀，透明度一致。如质地不均匀，透明度明、暗不一，则不能用于分析。 乙酰化滤纸检验方法：在乙酰化滤纸上分别点3，4－苯并芘、芘、1，2－苯并芘溶液和三种物质的混合液，用乙醇和二氯甲烷(2＋1)为展开剂，展开上升20cm后，在荧光灯下观察，三种物质均分开，3，4－苯并芘的斑点Rf值小于0.10，此滤纸即可供分析使用。 (10)标准溶液 贮备液的配制方法同一法，临用时，用苯稀释成1.00ml含2μg苯并〔α〕芘的标准溶液，贮于棕容量瓶中，并置冰箱中保存。 (四)采样 采样方法同第十二章第一节中总悬浮颗粒物大流量采样－重量法。 (五)分析步骤 1.样品提取 同一法(415页)。 2.纸层析分离 将空气总悬浮颗粒物样品的提取液定容后，作为纸层析点样待测液。 (1)点样 在乙酰化滤纸一端距底边5cm处，用铅笔轻轻划一横线，在横线上点6个样：二个点样品、二个点标准(取10μl标准溶液含0.02μg苯并〔α〕芘)、二个点试剂空白(均为平行双样)。各点间隔2cm。用微量注射器吸量样品提取液，根据苯并〔α〕芘浓度点样10～50μl。在点样过程中用吹风机缓缓送风，促使溶剂挥发，点样斑点直径不应超过5mm，点样速度应缓慢。如需将全部样品点样时，可用玻璃毛细管点样。溶液点完后，可用少量苯洗涤浓缩瓶，并将洗涤液全部点在斑点上。按相同操作步骤点标准溶液和试剂空白溶液。 (2)层析 在层析缸中加入适量展开剂，将点完样的层析滤纸悬挂在层析缸中，下端浸入展开剂约5mm，将层析缸用透明胶纸密封并避光，待溶剂前沿上升至离原点20cm处，取出滤纸，在通风橱中使展开剂自然晾干。然后在暗室内，于365nm紫外光下观察层析纸上苯并〔α〕芘的亮紫荧光斑点，并用铅笔圈出苯并〔α〕芘标准斑点及与其位置相对应的样品斑点和空白斑点。 (3)洗脱 用光亮无锈的剪刀分别剪下层析滤纸上苯并〔α〕芘标准、样品和空白斑点，各放入5ml比管中，各管准确加入5.00ml苯，加盖，于60～70℃水浴中，不断振摇，浸泡15min，使苯并〔α〕芘转移至苯液中。 3.测定 (1)洗脱液的荧光分光光度测定 将标准、样品和空白斑点的苯洗脱上清液分别倒入10mm石英比皿中，在激发狭缝10nm，激发波长385nm和发射狭缝5nm，发射波长400，405和410nm的条件下，分别测定荧光强度(mm)。 (2)苯并〔α〕芘荧光斑点直接扫描定量用荧光分光光度计的薄层扫描仪时，将层析纸展开的一面朝下，用透明胶纸将其固定于玻璃板上，放入薄层层析扫描板框座架上，设定激发波长为385nm、入射狭缝10nm、入射狭缝5nm，发射波长为405nm，以标准斑点调节仪器的负高压和记录器灵敏度，使记录笔的响应值在1/2满量程处。然后在发射波长400、405和410nm处，对标准，空白和样品斑点逐一进行直线或曲线移动扫描，测得每个斑点峰高或峰面积的积分值之和，即为该斑点的荧光强度(mm或mm2)。 (六)计算 1.荧光光度法测定洗脱液或斑点直接扫描标准、空白和样品的相对荧光强度： 式中A——相对荧光强度；造瘘袋 A405——于405nm发射波长处测定的荧光强度； A400——于400nm发射波长处测定的荧光强度； A410——于410nm发射波长处测定的荧光强度。 2.空气中苯并〔α〕芘浓度 式中c——空气中苯并〔α〕芘浓度，μg/100m3； A——样品斑点相对荧光强度，mm2或mm； A0——试剂空白样品相对荧光强度，mm2或mm； As——标准样品相对荧光强度，mm2或mm； W——标准斑点苯并〔α〕芘含量，μg； B——样品洗脱定容体积，μl； D——点样时所取洗脱液体积，μl； S1——样品滤纸的总面积，cm2； S2——分析时所取样品滤纸的面积，cm2； Es——由实验确定的苯并〔α〕芘的平均提取效率； V0——换算成标准状况下的采样体积，m3。 (七)说明 (1)纸层析法分离－荧光光度法测定苯并〔α〕芘，具有灵敏度高，操作简便，样品便于保存等优点，是目前测定苯并〔α〕芘普遍采用的方法之一，检出限为2ng/5ml。 (2)精密度和准确度对0.58μg苯并〔α〕芘重复测定的相对标准差小于6%；对5μg苯并〔α〕芘的加标回收率为95%～108%。 (3)精确量取10μl混合样品提取物各5份进行纸层析法和薄层层析法比较，测定结果见表6－13，从表中结果可以看出两种方法测定结果基本上是一致的。目视观测纸层分离荧光点分界不清晰，不如薄层法。但制备乙酰化滤纸比较容易。 表6－13 两种分离方法测定飘尘中3，4－苯并芘的比较 三、薄层层析－荧光或紫外分光光度法 (一)原理 采集在玻璃纤维滤纸上颗粒物中的3，4－苯并芘(Bap)，用充氮升华法或连续提取法提取，再经醋酸纤维素薄层层析法分离，分离出的Bap斑点，用苯洗脱，以荧光分光光度法或紫外分光光度法定量。 (二)仪器 (1)薄层涂布器。 (2)薄层层析仪。 (3)离心机 4000rpm。 (4)玻璃熔封铁芯转子 长6mm。 (5)电热式磁力搅拌器。 (6)其他仪器同二法(425页)。 (三)试剂 (1)玻璃纤维滤纸预处理同一法(415页)，Bap的空白值不应大于1ng。 (2)无水乙醇 重蒸馏。 (3)甲醇 重蒸馏。 (4)乙醚 重蒸馏。 (5)苯 使用前提纯，提纯方法：在分液漏斗中每次加少量浓硫酸，振摇，至浓硫酸层无为止，再加水振摇数次，洗去硫酸。然后加入无水硫酸钠脱水，再蒸馏。 (6)展开剂 甲醇+乙醚+水＝4+4+1(体积比)。 (7)薄层板 以每块板(200×200mm)平均需用4g乙酸纤维素，和15ml无水乙醇的比例调成糊状，在涂布器上制板。涂布后，先在室温下风干，再于80℃干燥箱中活化30min。然后，放在干燥器内，冷却备用。 (8)乙酸纤维素 160～250目，结合酸的含量为26%～30%。乙酸纤维素制备方法：量取682.5ml乙酸酐、300ml苯、7.5ml水依次放入2L烧杯中，混匀。置于冰水浴中，缓慢加入10ml高氯酸，搅匀(注意防止反应剧烈溅出)。然后，在不断搅拌下慢慢加入100g微晶纤维素(层用)，在通风橱内于30～35℃水浴中放置2h，并不断搅拌，以保证乙酰化反应充分，并注意观察温度，以防温度骤增。然后，再倒入大型离心管中，以4000rpm速度，离心3～5min，除去上层乙酰化剂溶液，沉淀物用无水乙醇洗涤三次，再离心，至pH＝6为止。最后将乙酰化纤维素置于通风橱中吹风晾干。放置过夜，再放入干燥箱中，于80℃干燥1h，取出冷却后，研磨，过160目筛，备用。 (9)3，4－苯并芘标准溶液同一法(415页)，临用时配制成1.00ml含10μgBap标准溶液。 (四)采样 采样方法同一法(415页)。 (五)分析步骤 1.滑步机样品提取 2.薄层分离① (1)点样取活化处理过的薄层板，将三边各刮去5mm。在距离底边2cm处，以1．5cm间隔，用毛细管将样品液全部(或一部分，视浓度而定)，在薄层板上作条状点样。斑点不大于15mm×3mm。用0.05ml苯洗管壁，洗液再点样。如此反复，直至洗液无荧光为止。同时，以同样方法，用微量注射器取10μl苯并芘标准溶液(0.1μg)点样，作为标准对照点。另外一个点不点样品，作为展开剂空白点。如用紫外分光光度法测定时，标准对照应点0.5μg苯并芘，并且不留展开剂空白点。 (2)层析点样后薄层板放入薄层层析仪中，加入15ml展开剂。待展开剂前沿上升至15cm处，取出薄层板，放在通风橱中，让展开剂自然挥发，晾干。然后在暗室内，于紫外线灯下观察薄层板上荧光斑点。用针划出苯并芘标准斑点和其相对应位置的样品斑点和空白点。 (3)洗脱用光亮无锈的小刀仔细刮下标准斑点、样品斑点和空白点。通过漏斗分别移入10ml比管中，再加入5ml苯，并放入一个玻璃熔封铁芯转子。将比管放在盛水的烧杯中，于电热磁力搅拌器上加热65℃，10min，进行洗脱。然后，在离心机上，以4000rpm，离心2min。上清液分别转移于10ml比管中。再向原比管中加5ml苯，重复洗脱一次，合并洗脱液，混匀，作为被测样品。 3.测定 将标准管及样品管和空白管中洗脱液均用苯定容至10ml，分别进行荧光或紫外分光光度法测定，测定步骤同二法(425页)。 (六)计算 同二法(425页)。 (七)说明 (1)乙酸纤维素薄层法可将样品中的3，4－苯并芘与其他多环芳烃化合物完全分离，不受或少受其他干扰物的影响。由于它具有灵敏度高，重现性好，分离时间比纸层析法快等优点，所以这个方法仍被广泛采用。 (2)检出限本法检出限用荧光分光光度法为1ng/10ml紫外分光光度法为300ng/10ml。 (3)乙酸纤维素目前市场还没有商品供应，需要自己制备。乙酸纤维素的结合酸含量对分离有一定的影响，结合酸最适范围26%～30%为最好。结合酸测定步骤如下： ①试剂 a.0.500mol/L氢氧化钠－乙醇水溶液(3＋1)。 b.0.500mol/L盐酸溶液：一级。 c.丙酮：一级。 d.0.500mol/L氢氧化钠溶液。云朵制造机 ②测定步骤 a.总酸测定：称取乙酰化纤维素0.500g放到回流器的磨口瓶中，加入丙酮15ml溶解乙酰化纤维素，在不停振摇下加入1ml水及15ml0.500mol/L氢氧化钠乙醇溶液，摇匀。在65℃水浴中回流珍珠岩保温管壳30min，冷却后加入20.00ml 0.500mol/L盐酸，10min后，以酚酞为指示剂，用0.500mol/L氢氧化钠溶液滴定。 计算 式中V1——0.500mo1/L氢氧化钠－乙醇溶液体积，ml； V2——0.500mol/L盐酸体积，ml； V3——0.500mol/L氢氧化钠滴定体积，ml； 60——乙酸摩尔质量； W——样品质量，g。 b.游离酸的测定：不加温回流，其余步骤和计算与测定总酸相同。 防盗螺母c.结合酸的计算 结合酸(%)＝总酸－游离酸 例：总酸测定消耗氢氧化钠17.56ml 游离酸测定消耗氢氧化钠12.96ml ③此法比纸层析法分离多环芳烃效果好，荧光斑点不扩散，清晰。3，4－苯并芘与其他荧光斑点之间有明显的无荧光带分界线，如果展开两次或进行连续展开，分界效果更佳。 ④薄层分离样品后最好当日将样品洗脱定量测定，如果不能完成时，应将薄层板放在暗箱内保存，24h内无有明显变化，放置5天后再经薄层扫描测定，3，4－苯并芘结果偏低6%～10%。 (4)鉴于苯并芘(Bap)的强致癌性，实验中的一切操作均在白搪瓷盘中进行，防止泼散污染，可随时用重铬酸钾－浓硫酸洗液处理，Bap可被强氧化剂破坏。 参考文献 1 中国预防医学科学院环境卫生监测所.环境空气质量监测检验方法.北京：中国科技出版社，1991：31～42 ①苯并〔a〕芘为强致癌性物质，操作时务必注意安全。 ①应避光直射，以防Bap光解。 |
附录B：环境空气和废气 气相和颗粒物中多环芳烃的测定 气相谱-质谱法（HJ 646-2013） |
本文发布于:2024-09-23 07:30:03，感谢您对本站的认可！
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