一.选择题（在备选答案中选择一个最佳答案，每题2分，共20分）:
1.在核酸提取时，常需要使用氯化钠，醋酸钠等盐溶液，真正的目的是（）A.中和核酸的负离子，使其易于沉淀 B.调节PH值C.保持核算的完整性 D.提高核酸的浓度 E.无特定目的 2.在一个DNA分子中，如G所占摩尔比为17.2%，则A所占摩尔比为（）A.82.8% B.32.8% C.17.2% D.65.6% E.无法计算
3.下列那项不是扩增反应所必需的?（）
B.dNTP
C.Mg++
D.DNase
E.缓冲液4.下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（） A.基因结构与功能的关系
t型密封圈B.基因结构变异与疾病的关系
C.病原微生物的基因结构特征
D.基因的表达.调控与疾病的关系
E.以上皆是
5.分子生物学检验技术主要包括那些技术?（）A.核酸分子杂交技术 B.DNA测序技术 C.PCR技术 D.DNA重组技术 E.以上全是
6.下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（）A.肝功能检测 B.乙肝两对半检测 C.乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D.肿瘤细胞培养 E.病原微生物培养
7.在核酸的分离纯化过程中，为保证其一级结构的完整性，应采取（）A.尽量简化分离步骤，缩短提取时间 B.适当延长提取时间 C.在37摄氏度条件下进行
D.加入Mg++,Ca++等二价金属离子
E.以上全是
8.有一核酸样品，测得A260/A280=2.0，请问该样品属于哪类核酸样品?（）A.DNA B.RNA
C.是DNA，但有蛋白质污染
D.是RNA，但有蛋白质污染
E.DNA和RNA
9.在RNA提取和纯化过程中，为避免Rnase污染而导致RNA的降解，应采取（）A.在洁净的实验室里操作 B.带手套和口罩 C.所用器材高压消毒或DEPC处理 D.冰浴下操作 E.以上皆是
d1秒10.随机引物标记法全程标记DNA时，需选用下列哪种酶?（）A.DNA多聚酶I的Kelnow 片段 B.TaqDNA聚合酶 C.限制性内切酶 D.DNA连接酶 E.末端转移酶
二.判断题：(你认为下列叙述正确的请在题后括号内打√，错误的打×，每题2分，共6分) 1.双脱氧核酸链终止法是最常用的DNA测序技术（）
2.TapDNA聚合酶的作用是催化DNA合成，但由于缺乏3’→5’外切酶活性，无校正功能，所以在复制合成新链过程中可能会发生碱基错配，导致PCR产物的错误（）
3.采用加热煮沸法可使RNase完全失活（）三：填空题(每空格2分，共24分):门禁监控
1.在选择核酸的分离纯化方法，应遵循的总原则是：一是保证核酸（一级结构的完整性）；二是尽可能（排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度）。
2.在PCR反应中，Mg++是个至关重要的因素，浓度（过低）会降低酶的活性，浓度（过高）又会导致非特异性扩增。
3.用于核酸杂交的普通硝酸纤维素膜最大的优点是（本底低），因而最容易检测杂交信号，缺点是（脆性大）易破裂，且队＜５００bp的核酸结合力低。
4．整个核酸杂交反应主要由（预杂交）、（杂交）和（洗脱）三个步骤组成。
5.转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上的核酸，其与滤膜的结合是松散的，需做进一步的固定，常用的固定方法是（烘烤）、（紫外线固定）和（碱固定）。三.名词解释：(每题4分，共20分):
1.融点曲线分析技术：是根据野生型序列和突变序列因不同Tm而产生不同的融点曲线而设计的。
2.探针：指所有能与特定的靶分子发生特异性的相互作用，并可以被检测的分子。真空保鲜花
3.Tm值：DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。
4.转染：将外源DNA直接导入真核生物细胞的过程称为转染。
5.转化：将重组的DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化。四.问答题:（每题10分，共30分）
1.简述限制性内切酶的定义、命名原则和分类。
答：定义：限制性内切酶是能识别和水解双链DNA分子内特异序列的核酸水解酶类。命名：通常由3个斜体字母表示，第1个大写字母为来源微生物的属名第1个字母，第2、第3个小写子母取微生物种名的头两个字母。
分类：根据酶分子组成及裂解方式的不同，将限制性内切酶分3类，Ⅰ类和Ⅲ类限制性内切酶在同一酶分子中兼有修饰（甲基化）作用和依赖于ATP的限制水解活性，Ⅱ类限制性内切酶能识别并水解特异性的核苷酸序列是DNA重组技术中最重要的工具。
2.PCR引物的设计应遵循哪些原则。
礼花发射器答：1.用于PCR反应的引物需要两条，分别设在被扩增目的的片段的两端，并分别与模版正负链序列互补。
2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜，引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补，形成发夹状结构，影响引物和模板之间的互补。
穿孔塞焊3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体。
4.引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积。
5.PCR扩增中的退火温度是根据引物的Tm值而决定的，两条引物的Tm值不能差太大。
6.根据需要，可在合成引物时于其5’端加修饰成分。
3.试述实时荧光PCR水解探针法的实验原理？
答：原理：PCR反应体系中除有两条引物外还需要一条荧光素标记的探针。探针的5’端和3’端分别标记荧光报告基团R和荧光淬灭基团Q，当探针完整时R基团与Q基团分别位于探针的两端，Q基团抑制R基团使其不能发射荧光。PCR过程中，TaqDNA聚合酶沿着模板移动各成新链，当移动到模板互补的探针处时，TaqDNA聚合酶同时还发挥其5’-3’外切核酸酶活性，将探针的脱氧核苷三磷酸逐个水解，R基团与Q基团随子分离。此时R基团不再受Q基团的抑制而发射荧光，仪器的检测系统便可测得荧光信号。
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