MS培养基的配制步骤：这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素(母液Ⅰ) mg／L防水牛津布
NH4NO3
33 000 KNO3
38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分(母液Ⅳ)ⅣA 肌醇
20 000 ⅣB烟酸
100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中， 母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5?5，最后定容到1 L，保存在棕玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液 号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸
固态去耦合器(NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0?1 mg/mL的母液。 配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4?D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 b2y
MS培养基配制培养液时的注意事项
配制培养液时应注意： ①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制； ②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次； ③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000
mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4～7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。每1 000 mL培养基，可分装25～30瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。
高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥
形瓶之间放一块玻璃板隔开。 第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。 第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 ℃下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。
烟草组织培养
植物离体培养（Plant in vitro culture）是指通过无菌操作，把植物体的各类结构材料，即外植体（Explant）,接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下，进行离体培养的一套技术与方法，通常称之为植物组织培养（Plant tissue culture），或植物的细胞与组织培养。
通过组织培养进行再生的步骤，包括培养基的制备、外植体的选择、消毒、接入，芽的诱导、根的诱导、移裁等几个阶段。
一、培养基的制备
在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛彩
的基本培养基开始，烟草的培养采用的·植物学论文是MS基本培养基。在实际培养过程中，分为三种培养基进行使用：
1、诱导愈伤组织的培养基：MS+6-BA2+NAA0.5
2、诱导芽的培养基：MS+6-BA2+NAA0.1
3、诱导根的培养基：MS+6-BA2+IBA0.5
各种培养基所用琼脂为9g/L，蔗糖均为30g/L，PH为5.5-6.0，配制后高温灭菌·动物/水产论文备用。
二、外植体的选择
植物细胞全能性是植物细胞的一种重要属性，也是组织培养的重要理论基础。任何一个植物细胞都具有的产生一个完整植株的固有能力称做“细胞的全能性”。因此可选取烟草根、茎、叶等的任何一部分，作为组织培养的外植体。但在选择时应注意所选部位无病虫害、生长旺盛。
三、外植体的消毒及接入培养
组织培养的接种是指将灭过菌的材料，在无菌的情况下，切成小块，放入培养基的过程。
把烟草外植体放在10%次氯酸钙溶液中8分钟，再加吐温1滴，用无菌水冲洗3次；然后在0.
1%中浸泡5分钟，再用无菌水冲洗5粘胶带
次，完成对外植体的消毒。此过程在无菌室及超净工作台上进行。消毒后，对外植体进行修剪、剪切，并接入培养基中，即可进入诱导愈农学其他
论文伤组织的过程。培养条件一般控制在12小时光照，狗皮护膝
20±1℃。 生物的全息现象 所谓“生物全息”就是生物体的每一相对独立的部分，在它的组成结构上，同整体是相同的，每一部分都是整体的缩小，它们都包含着整体的全部信息。
植物的全息现象，在大自然中，已从形态、生物化学和遗传学等多方面到了论证的实例，马路边的棕榈树，它的一张叶子，由薄扇似的叶片和长长的叶柄组成，仔细观察一下叶子的整个外形，当把它竖在地上与全株外形相比时，你会发现，它们的外形是多么的一致，只是比例的大小不同而已。一只梨子，它的外形与它的整体果树形吻合。行叶脉的植物，它们都是从茎的基部或下部分枝，主茎基本无分枝；相反，叶脉为网状的植物，它们的分枝多呈网状。在植物的生化组成上，也有明显的全息现象。例如，高梁一片叶上的氰酸分布形式与整个植株的分布形式相同。在整个植株上，上部的叶含氰酸较多，下部的叶
含氰酸较少；在一张叶上，也是上部含量较多，下部含量较少。 有趣的是，当进行植物离体培养时，也发现了植物的全息现象。若将百合的鳞片经消毒用来离体培养，发现在鳞片基部较易诱导产生小鳞茎，即使把鳞片从上到下切成数段，同样发现小鲜茎的发生都是在每个离植段基部首先产生，且每段鳞片上诱导产生小鳞茎的数量，遵循由下至上递补增的规律。这种诱导产生小鳞茎的特性与整株生芽特性相一致，呈全息对应的关系。在植物组织培养过程中，以大蒜的蒜瓣、矩叶菊、花叶芋和彩叶草等多种植物叶片为外植体，进行同样的试验观察时，都能见到这种全息现象。 植物全息的规律应用于农作物的生产实践，已产生了惊人的效果。例如，马铃薯的载种，习惯以块茎上的芽眼切下作"种子"。但长期以来，人们并没有考虑到块茎上芽眼之间的遗传差异。根据植物全息的原理，想来这些芽眼之间必定会有特性的区别。马铃薯在全株的下部结块茎，对于全息对应的块茎来说，它的下部（远基端）芽眼结块茎的特性也一定较强。于是，为了证实上述的想法，科学家做了系统的试验。分别以"蛇皮粉"、"跃进"等5个马铃薯品种的块茎为材料，将它们的芽眼切块成远基端芽眼和近基端芽眼两组，进行种植比较试验。实验结果，以远基端芽切块制种生产时，各个品种均增产，平均增产达19.2％。 不过，人们在长期的生产实践中，个别的生产措施，也是符合生物全息规律的，只不过未意识到这点罢了。例如，我国不少地区种
植玉米的农民，他们在留种时，习惯把玉米棒上中间（或偏下）的籽粒留下作种，而把两端的籽粒去除，确保玉米的年年丰收。这种玉米籽粒的留种方法是符合生物全息律的。因为玉米棒子是在植株的中间或偏下部分着生的，而作为植株对应全息的玉米棒，其中间（或偏下）着生的籽粒，在遗传势上也一定较强。经试验，以这种方法制种，可以增产35.47％。
5-氯-2-戊酮
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