PCR仪使用说明
步骤：
1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：“-RUN ENTER PROGRAM PROGRAM ”准备执行程序。 2、放入样本管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：“-ENABLE DISABLE HEATED LID” 按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。 4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》，屏幕显示 “ -NEW LIST EDIT DELET”，按《Proceed》，1）选择NEW，命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认。 2）输入程序步骤：名字输入后，显示“ STEP1 _TEMP GOTO OPITON END”，按《Pro
ceed》则可以输入温度（0～100℃），按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。 3）选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步（循环数最多可达9999次）（为实际循环数-1)。 4) 选择option，显示“STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE ”再选择increment，按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值（-0.1℃～6℃），按《Proceed》确认。选择extend，按《Proceed》确认，输入每个循环增加或减少的时间（-60～60秒），按《Proceed》确认。
选择slop（指温度上升或下降的速率），输入温度的改变值（-0.1～1.5℃）按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。
4）选择End，输入结束步骤。
5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。
6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。
编辑程序：
1、可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。
2、对于未输完的程序，要先输入END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。
3、删除已经储存的程序：从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择DELET，用《Select》选择删除。
4、查看程序的步骤：在主菜单上选择LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称，再按《Proceed》，显示程序的第一步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。
编辑已有的程序：
1、从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择EDIT，按《Proceed》确认，用《Select》键选择要编辑的程序，按《Proceed》显示程序的第一步。
2、用《Select》键将光标移到要改变的温度或循环的值上，键入新值，按《Proceed》确认，按《Cancel》删除键入的值，出现空格，键入新值后确认。
注：一旦值被改变或删除，原来的值不能恢复，必须重新键入。
3、编辑时间值：必须重新键入小时、分钟、秒，按《Proceed》。
如何设置一个PCR体系：
一般分为8步：
1、预变性：可用94～95℃，2～10min，一般用5min。
2、变性：一般用94℃，30s～2min，一般45s～1min。
3、退火：温度自定，30s～2min。
4、延伸：70～75℃，一般72℃，对于＜2kb，＜1min；＞2kb，每增加1kb加1min。
5、循环数：一般25～35个循环。
6、最终延伸：72℃，5～15min。
7、保存：10℃，时间设为0。
8、END。
PCR使用说明
来源: 实验中心 作者: 实验中心 发表时间: 2009-04-27
1．开机预热30 分钟
2．利用上下左右键进入到程序主页面.
3．按A 对应的list,然后利用上下键选择empty ,再按enter 键进入
4．利用A 对应的abc 和数字键进行设定程序的名称,输入完按C 对应的name ok
5．再输入顶盖预热温度如105 长效复合肥度,按enter 键进入即可设定每一步的温度时间,循环数及梯
度
6．温度的设定:直接按数字键
7．时间的设定如下:如4 小时输入4..(注意一定要输入4 后的两个点)
8． 4 分钟输入.4.
9． 4 秒直接输入4 即可
10．循环的设定:在←对应的下面输入从第几步循环,在#下输入循环数,如从第2 步到第4 步需30 个循环,在第4 步的←应处输入数字2,在# 下输入29
11．梯度的设定:在gradient 对应下输入梯度的范围即可,如需要温度在55-65 度,在temp对应处输入60,在gradient 输入10 即可可以利用A 看已设的各个对应位置的温度.
12．设定完这些按pgmOK,再按start 程序开始运行.注意:顶盖温度较高,在使用过程中注意不要触摸用完要停下,不要让仪器长时间处于4 度,容易损坏仪器.
3V乙肝病毒PCR检测试剂盒使用说明
（20人份）
简介
切纸刀片
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus）所致，采用ELISA检测乙肝两对半的方法已广泛应用，对乙肝诊断提供了一种简便快速的工具，但由于免疫学检测只能提供HBV存在的间接证据，依靠乙肝两对半来判断病毒的复制状态及血清的传染性就受到了限制。近年来发展起来的聚合酶链反应（PCR）技术可直接检测病毒的病原体核酸，其特异性强、敏感度高，因此PCR在临床上可作为乙肝病毒检测的有效方法，可直接反映乙肝病毒存在与否，特别适应于早期诊断及明确诊断HBC的复制和血清的传染性。本试剂盒扩增靶序列选自HBV基因组相对保守的C区，扩增片段为270bp，具有良好的特异性和敏感度。
试剂盒组成：
裂解液A | 0.5（20ul/管） | 液体石蜡 | 600ul |
反应液 | 110ul（5ul/管） | 50×TAE电泳缓冲液 | 20ml |
灭菌双蒸水 | 1ml | 琼脂糖 | 沐浴粉1.0g |
阳性对照 | 50ul（5ul/管） | 溴乙锭（EB） | 20ul |
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实验操作
1.样品处理：
（1）标本来源：新鲜血清或血浆。
（2）标本保存：当天不处理的标本置-20℃保存。
（3）标本处理：取20ul裂解液A于离心管中，加40ul待测血清，混匀后，100℃沸水浴15分钟，15000rpm离心20分钟，4℃存放备用。
2.扩增反应
（1）根据扩增样品数量，取PCR反应液按每管5ul分装，每管再加入15ul灭菌双蒸水和一滴液体石蜡油（约20ul），盖上管盖备用。
蝶形螺栓 （2）先将灭菌双蒸水5ul加入一个分装管中（作为阴性对照）。取各标本离心上清液5ul加入对应的反应管中，最后取阳性对照5ul加入一个反应管中。加样完毕的反应管混匀后，10000rpm离心5秒，取出放入扩增仪里。
（3）按下列步骤循环
94℃ | 5分钟 | | 自制鱼缸灯架94℃ | 30秒 | | 55℃ | 30秒 | 美国zo0人与人x35次循环 | 72℃ | 30秒 | | 72℃ | 5分钟 | | | | |
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3.结果判断
（1）将50×TAE电泳缓冲液20ml加蒸馏水稀释至1000ml（1×TAE）待用，取50ml1×TAE缓冲液于三角瓶中，加入5ul溴乙锭，再加入1.0可琼脂糖，加热使之溶解至清亮状。待琼脂糖凉至50℃左右时，倒入事先准备好的电泳平板上。电泳槽中倒入1×TAE缓冲液。
（2）取15ul扩增产物，加入2%琼脂糖凝胶孔中进行电泳，80V电压电泳30分钟后，取出进行观察（至蓝指示剂离点样孔1.5cm左右时）。
（3）将凝胶置于紫外透射仪上，在紫外灯下被溴化乙锭染的DNA呈现明亮的橙黄的荧光。样品出现和阳性对照在同一水平位置上的橙黄荧光带即为阳性，否则为阴性。
注意事项：
1.阳性对照无需进行样品处理，直接取5ul进行PCR扩增。
2.使用前请将各管试剂复温至室温，并高速离心数秒，以免粘壁损失。
3.扩增仪类型的差异和循环温度的差异，可能导致二聚体（在蓝指示剂前面）的出现。
4.试剂盒存放于-20℃，有效期1年。
5.每次实验需设置阴、阳性对照。
6.取样品上清时，避免取出沉淀物。
7.因反应液为浓品，取样需准确，以免影响实验结果。
简单说明：
Real Time PCR反应液配制（50μl反应体系，染料法）：
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使用准备：
引物溶解：先12000rpm离心5分钟，然後用ddH2O溶解成25μM，加水量根据引物合成报告单提供的计算方法计算。
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配制说明：
按照以下配方，如果推荐引物加样量如加0.2ul的结果不好，可以调整引物使用量。括号里
是第二备选加样量和第三备选加样量。另外，可以调整的参数就是扩增程序的退火温度，请参考说明书。
2*PCR master mix | 25ul |
primer1 (25μM) | 0.4μl (0.6μl ,0.8μl) |
primer2 (25μM) | 0.4μl (0.6μl ,0.8μl) |
待检样品 | 5μl |
加ddH2O | 至50μl |
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可以用小体积的，等比例缩小体系。
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提高数据重复性的小技巧：
配制PCR 反应液时，尽量采用预混再分装的方式。
例如，可以计算加同一对引物的标本为5个，准备做三复孔，采用15ul体系，引物浓度为200nM(按照上面表格是加0.4ul的），就可以用以下的加样方式：
（比5份稍微多一点），总共为130ul的2*PCR master mix，2.1ul的上游引物，2.1 ul的下游引物，加dd水至235ul；混匀分装至每管45ul，每管加待检测样品5ul，混匀平均分装成三管，每管15ul。
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加样的注意事项：
1、注意加样的使用，加样时不要把头伸入液面下，避免挂液误差；
2、要使用低吸附的进口头，避免每次的残留导致的加样误差。
3、正确的加样方式：离液面1-2mm，加液，不靠壁，不贴液面。
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混匀平均分装的注意事项：
1、第一管吸液前需要先把头在液面中浸润一下，以保证三复孔的头吸液量是差不多的。
2、用混匀器进行混匀，不要用移液器吹打。
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详细说明书
transhold cat. A2010A0112
荧光定量PCR Premix试剂盒(荧光染料)
（FQ-PCR PreMix Kit）(除LIGHTCYCLER)操作说明书
豫公网安备41160202000603
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